圣草酚咀嚼片的制備及質量評價Δ

秦春夢 ，李文軍 ，李遼平 ，劉杰 ，劉松青 1，#（1.重慶醫科大學藥學院，重慶 400010；.重慶醫科大學附屬第三醫院藥劑科，重慶 40110；.重慶市力揚醫藥開發有限公司，重慶 400050）

圣草酚[（S）-2-（3，4-二羥基苯基）-2，3-二氫-5，7-二羥基-4-香豆素]，又名北美圣草素，味微苦，是一種淡黃色結晶性粉末，易溶于甲醇，微溶于水；其廣泛分布在植物藥材、柑橘類果實和多種蔬菜中，口服后以被動轉運的方式直接被小腸細胞吸收進入體內[1]。相關研究表明，圣草酚具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤、保肝和改善認知功能障礙等多種藥理活性，但目前國內外均無圣草酚產品上市[2-4]。

咀嚼片大小、外觀和普通片劑無差異，但其具有促進藥物吸收、患者服用方便等優點，尤其適用于兒童、高齡、吞咽困難以及胃腸功能較差的患者，還可降低藥物對患者胃腸道的影響[5]。本實驗以圣草酚為主藥，以甘露醇、微晶纖維素（microcrystalline cellulose，MCC）、聚乙烯吡咯烷酮（polyvinylpyrrolidone，PVP）等為輔料制成了圣草酚咀嚼片，并對其進行了初步的質量評價，旨在為圣草酚制劑的開發提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括LC-10ATVP Plus型高效液相色譜儀（日本Shimadzu公司），ZP-7A型旋轉式壓片機（上海天祺制藥機械有限公司），FADT-800RC型智能藥物溶出儀（上海富科思分析儀器有限公司），YPD-300C型智能片劑硬度測定儀、CJY-300C型片劑脆碎度測定儀（上海黃海藥檢儀器有限公司），BT25S型電子天平（德國Sartorius公司），BL-200F型電子天平（美國Setra公司），B20002型電子天平（上海良平儀器儀表有限公司），HE53型水分測定儀（瑞士Mettler Toledo公司），LHP-20-H型純化水機（重慶力德高端水處理設備研發有限公司），GZX-9240型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海博迅實業有限公司醫療設備廠），SHZ-IIIA型循環水真空泵（鞏義市予華儀器有限責任公司）。

1.2 主要藥品和試劑

本研究所用主要藥品與試劑包括圣草酚原料藥（美國Syntech International公司，批號1695100501，純度≥98%），圣草酚對照品（上海麥克林生化科技股份有限公司，批號C14683633，純度98%），MCC（珠海市東辰制藥有限公司，批號C20905），甘露醇（美國SPI Pharma公司，批號122100871），枸櫞酸（湖南九典宏陽制藥有限公司，批號TF81220201），三氯蔗糖（江西阿爾法高科藥業有限公司，批號20210301），硬脂酸鎂（安徽山河藥用輔料股份有限公司，批號210501），PVP（重慶斯泰克瑞登梅爾材料技術有限公司，批號010521003），甲醇、乙腈（國藥集團化學試劑有限公司，批號分別為20211112，20220119），磷酸（天津市科密歐化學試劑有限公司，批號20210110），聚山梨酯80（南京威爾藥業集團股份有限公司，批號20210604-2），磷酸二氫鉀、氫氧化鈉[重慶川東化工（集團）有限公司，批號分別為20211101、20190401]等。

2 方法與結果

2.1 圣草酚咀嚼片的制備

按處方稱取圣草酚、甘露醇、MCC、三氯蔗糖以及檸檬酸，充分混勻后，過60目篩。以5%PVP溶液作為黏合劑，加入至上述混合物中，攪拌均勻，得到軟材，過24目篩制粒。將顆粒置于60 ℃的烘箱中烘干至含水量≤2%，過24目篩整粒，稱定顆粒質量，再加入處方量的硬脂酸鎂，混勻，用壓片機壓片（沖模選用8.0 mm或9.0 mm淺凹沖，轉速為10 r/min，片劑硬度為50.0～70.0 N），即得圣草酚咀嚼片。

2.2 圣草酚咀嚼片的處方優化

2.2.1 綜合評分標準

參考相關文獻[6]，以外觀、口感、風味、質地4個評價項目對圣草酚咀嚼片進行綜合評分。由10位藥學專業人士擔任評審，在評定前詳細閱讀評分標準，然后根據該產品特性，獨立對產品進行客觀評分。每一項指標取各評審的平均分，再根據加權法計算最終得分，外觀、口感、風味、質地的加權系數分別為0.2、0.3、0.3、0.2。評分標準見表1。

表1 圣草酚咀嚼片的評分標準

2.2.2 處方初步篩選

根據咀嚼片已有研究[5]，結合圣草酚的相關報道[1，7]，設計圣草酚的含量為每片50 mg，初步選用甘露醇和MCC作填充劑，檸檬酸和三氯蔗糖作矯味劑，硬脂酸鎂作潤滑劑，PVP作黏合劑，并通過前期預實驗確定PVP（用純化水配制成5%的溶液）的用量為總片重的2%以及其余各輔料的大致比例及用量。在確定檸檬酸和三氯蔗糖大致用量的基礎上，固定三氯蔗糖的用量，調整檸檬酸的用量，進一步確定當檸檬酸和三氯蔗糖的用量為1∶1（質量比）時，咀嚼片的甜酸比最適宜。

2.2.3 正交實驗設計優化處方

在初步篩選的處方基礎上，以綜合評分為指標，以甘露醇（A）、MCC（B）、檸檬酸（C）、硬脂酸鎂（D）的用量為因素，每個因素設置3個水平，采取L9（34）正交實驗優化圣草酚咀嚼片各輔料配比。由于當正交設計未留空白列時，需重復實驗，用于統計誤差和方差分析[8]，因此本正交實驗重復了3次，以提高分析的可靠性。因素與水平見表2，正交實驗結果見表3，方差分析結果見表4。

表2 正交實驗篩選圣草酚咀嚼片輔料配比的因素與水平

表3 正交實驗篩選圣草酚咀嚼片輔料配比的結果

表4 正交實驗篩選圣草酚咀嚼片輔料配比的方差分析結果

由表3、表4可知，4個因素對圣草酚咀嚼片綜合評分的影響順序為C（檸檬酸）＞A（甘露醇）＞B（MCC）＞D（硬脂酸鎂），4個因素均有顯著影響（P＜0.05），最佳處方為A1B1C2D2，即甘露醇用量為45%，MCC用量為25%，檸檬酸用量為0.3%，硬脂酸鎂用量為1.0%。另處方中圣草酚用量為26.4%，三氯蔗糖用量為0.3%，PVP用量為2%。

2.2.4 優化處方驗證

按照“2.2.3”項下最佳處方取料，制成3批圣草酚咀嚼片，對其進行綜合評分。結果顯示，3批圣草酚咀嚼片的綜合評分分別為8.76、8.75、8.80（RSD＝0.30%，n＝3），可見3批圣草酚咀嚼片間綜合評分無顯著差別，且平均評分大于正交實驗中的其余處方結果。

2.3 最佳處方圣草酚咀嚼片的質量評價

2.3.1 外觀性狀

圣草酚咀嚼片的外觀完整，表面光潔，色澤均勻，無雜斑。

2.3.2 重量差異

取圣草酚咀嚼片20片，按照2020年版《中國藥典》（四部）“片劑”中的“重量差異檢查法”[9]進行測定。結果顯示，20片圣草酚咀嚼片的平均片重為192.57 mg，每片的重量差異均在限度（±7.5%）內，符合藥典規定。

2.3.3 硬度

取10片圣草酚咀嚼片，用硬度儀測定其硬度分別為55.27、52.51、53.11、58.31、62.78、59.99、50.21、57.53、61.00、62.90 N，平均值為57.36 N。

2.3.4 脆碎度

取圣草酚咀嚼片34片，精密稱重為6.549 g，按照2020年版《中國藥典》（四部）“片劑脆碎度檢查法”[9]進行測定。結果顯示，測試后重新精密稱重為6.543 g，測試中減少重量0.006 g，得脆碎度為0.09%，且所有片劑均完好無殘缺，符合藥典規定。

2.3.5 含量測定

圣草酚含量測定的色譜條件如下：色譜柱為Alltima C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液（30∶70，V/V），檢測波長為290 nm，流速為1.0 mL/min，柱溫為30 ℃，進樣量為10 μL。在該色譜條件下，圣草酚的出峰時間約為10 min，與其他雜質分離良好（圖1）；其峰面積（y）與質量濃度（x）的回歸方程為y＝32 115.83x－1 431.88（R2＝0.999 9），線性范圍為2.5～37.5 μg/mL；精密度試驗的RSD為1.35%（n＝6）；重復性試驗的RSD為1.49%（n＝6）；準確度試驗的回收率為100.07%（RSD＝1.75%，n＝9）；耐用性試驗的RSD為1.67%（n＝7）；穩定性試驗的RSD為1.30%（n＝6），均符合藥典規定。取3批圣草酚咀嚼片各20片，分別研成粉末，精密稱量94.7 mg（相當于圣草酚25 mg），加至100 mL容量瓶中，加甲醇溶解，超聲（功率500 W，頻率53 kHz）提取20 min，放冷，并用甲醇定容，用0.45 μm微孔濾膜濾過，將濾液稀釋10倍，在上述色譜條件下進樣檢測，每批平行測定3次，記錄峰面積并根據標準曲線法計算圣草酚含量。結果顯示，3批圣草酚咀嚼片中圣草酚的含量分別為每片50.03、50.30、51.89 mg，平均含量為每片50.74 mg（RSD＝1.98%，n＝3）。

圖1 圣草酚咀嚼片含量測定的高效液相色譜圖

2.3.6 溶出度

按照2020年版《中國藥典》（四部）“溶出度與釋放度測定法第二法”[9]測定3批圣草酚咀嚼片的體外溶出度。以含0.5%（m/V）聚山梨酯80的磷酸鹽緩沖溶液（pH6.8）900 mL為溶出介質，轉速為100 r/min，溫度為（37.0±0.5）℃，依法操作。在第5、10、15、20、30、45、60、120 min時取樣，取樣量為5 mL，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續濾液備用（每次取樣時需補加等體積同溫度的溶出介質）。精密量取上述續濾液各1 mL，置于試管中，加等體積的溶出介質稀釋，按照“2.3.5”項下色譜條件進樣檢測，記錄峰面積，根據標準曲線法計算各時間點取得的樣品中圣草酚的濃度，并代入下述公式計算累積溶出度。

式中，Cn為各時間點取出的樣品濃度（即稀釋前的樣品濃度），L為制劑標示量，V1為各時間點固定取樣體積，V2為溶出介質體積。結果顯示，3批圣草酚咀嚼片在30 min時的累積溶出度超過80%，60 min內可完全溶出。溶出曲線見圖2。

圖2 3批圣草酚咀嚼片的體外溶出曲線

2.3.7 含量均勻度

按照2020年版《中國藥典》（四部）“含量均勻度檢查法”[9]，取圣草酚咀嚼片10片，按“2.3.5”項下含量測定方法操作（加至容量瓶中的粉末改為完整圣草酚咀嚼片，濾液稀釋倍數改為20倍），分別測定每片的相對含量（設標示量為100）。結果顯示，圣草酚相對含量的均值為100.89，標準差（s）為2.10（n＝10），標示量與均值之差的絕對值（A）為0.89，A+2.2s＝5.51＜15，符合藥典規定。

3 討論

圣草酚流動性較差、質輕、味苦，選擇合理的輔料是其制作咀嚼片的關鍵。甘露醇造粒性好，入口有涼爽感，且味微甜，適于制作咀嚼片；MCC分子間有氫鍵，可壓性佳，故本實驗選用甘露醇和MCC作為填充劑。三氯蔗糖是一種高倍甜味劑，小劑量便可滿足甜度要求，且穩定性較高；檸檬酸溫和、可口，且具有防腐的作用，可延長藥品的保存時間，故本實驗選用三氯蔗糖和檸檬酸作為矯味劑。硬脂酸鎂潤滑性好、抗黏性強，可降低顆粒之間的摩擦力，改善粉末的流動性和片劑的脆碎度，故本實驗選用硬脂酸鎂作為潤滑劑。

在前期的預實驗中，本課題組首先采用粉末直接壓片法制備圣草酚咀嚼片，出現了細粉多、不易壓片的情況；換用濕法制粒法后，較易壓片，且制得的咀嚼片口感更佳。純化水是常用的黏合劑，其可誘發原輔料的黏性從而適于制粒，但其缺點為濕潤程度不均勻。本實驗以純化水作黏合劑時，在壓片過程中多次出現黏沖的情況，換用PVP作黏合劑后黏沖情況明顯改善，故最后選用PVP作為黏合劑制備圣草酚咀嚼片。

2020年版《中國藥典》未對咀嚼片的溶出度作出質量評價要求，但考慮到一些患者可能會在未咀嚼的情況下直接吞服咀嚼片，為保證圣草酚咀嚼片中的圣草酚即使在未咀嚼的情況下也可充分溶出，本實驗在質量評價中加入了溶出度考察。結果顯示，圣草酚咀嚼片溶出度符合藥典對普通片劑的要求。

綜上所述，本實驗成功制得圣草酚咀嚼片，且質量評價符合2020年版《中國藥典》要求。