食品中總皂苷的測定方法改進

◎ 莫素青，陳 曄

（廣西壯族自治區(qū)新材料技術工程院，廣西 南寧 530000）

總皂苷是一類存在于植物中的天然化合物，具有多種功效和作用，如抗氧化、降血脂、免疫調(diào)節(jié)及抗腦血管損傷等，在保健和醫(yī)學領域備受關注。近年來，總皂苷在食品行業(yè)被廣泛應用，添加總皂苷的食品越來越多，因此建立一種高效穩(wěn)定的食品中總皂苷的測定方法顯得尤為重要。

目前食品（含保健食品）中總皂苷的測定方法比較多，如液相色譜法、近紅外光譜法、紫外分光光度法[1]等，但我國尚無國家標準方法，食品中總皂苷的檢測主要參考《保健食品理化及衛(wèi)生指標檢驗與評價技術指導原則》（2020 年版）第二部分第十四章中“保健食品中總皂苷的測定”，該方法分析步驟多、檢測時間較長，特別是試樣凈化處理后，洗脫液于60 ℃水浴揮干的時間較長，且檢測結(jié)果精密度差、方法回收率差。本文針對該檢測方法進行改進，旨在完善該檢測方法，提高該法檢測結(jié)果的準確度。

1 材料與方法

1.1 材料與設備

1.1.1 材料

樣品：金花茶花；人參皂苷Re：天津中易嘉信科技發(fā)展有限公司/斯坦福分析化學公司，純度：99.9%；Amberlite-XAD-2 大孔樹脂：20 ～60 目；中性氧化鋁：層析用（100 ～200 目）；無水乙醇、甲醇、高氯酸、冰乙酸、香草醛，分析純[2]。

1.1.2 儀器和設備

TU-1901 雙光束紫外可見分光光度計、電子天平（感量分別為0.01 mg 和0.1 mg）、超聲波清洗儀、恒溫水浴鍋、溫控氮吹儀。

1.2 樣品前處理

稱取2 g（精確至0.000 1 g）經(jīng)粉碎的樣品，經(jīng)溶劑提取后凈化，洗脫液定容后，根據(jù)試樣中總皂苷含量的高低，分取一定體積洗脫液濃縮至干，顯色，于560 nm 波長測定吸光值。

1.3 標準溶液的配制

準確稱取18.90 mg 人參皂苷Re 標準品，用甲醇溶解并定容至25 mL，得到人參皂苷Re 標準貯備液（0.756 mg·mL-1）。分別吸取人參皂苷Re 標準貯備液0.10 mL、0.15 mL、0.20 mL、0.25 mL、0.30 mL 以及0.35 mL，得到系列標準點：0.075 6 mg、0.113 4 mg、0.151 2 mg、0.189 0 mg、0.226 8 mg 和0.264 6 mg。

1.4 實驗方法

1.4.1 顯色前不同濃縮方式對系列標準濃度吸光值穩(wěn)定性以及曲線線性的影響

系列標準濃度顯色前分別采用60 ℃水浴揮干和60 ℃氮吹至干進行處理，做6 次平行試驗，并繪制標準曲線，考察顯色前不同系列標準濃度的處理方式對數(shù)據(jù)穩(wěn)定性及標準曲線線性的影響[3-5]。

1.4.2 凈化時不同洗脫液對樣品測定回收率的影響

凈化樣品提取液時，分別采用70%乙醇和70%甲醇進行洗脫，進行低、中、高3 個水平加標，考察不同洗脫液對回收率的影響[6]。

1.4.3 顯色前樣品洗脫液不同濃縮方式對樣品測定結(jié)果穩(wěn)定性的影響

顯色前，分別采用60 ℃水浴揮干和60 ℃氮吹至干對樣品洗脫液進行處理，進行6 次平行試驗，考察不同處理方式對樣品測定結(jié)果穩(wěn)定性的影響。

1.4.4 不同洗脫液和洗脫液濃縮方式對不同量洗脫液濃縮時間的影響

試樣提取液經(jīng)凈化后分別采用70%甲醇、70%乙醇洗脫定容，分別取5 mL、10 mL、15 mL 采用60 ℃水浴揮干、60 ℃氮吹至干的濃縮方式進行試驗，考察不同洗脫液和洗脫液濃縮方式對不同量洗脫液濃縮時間的影響。

2 結(jié)果與分析

2.1 顯色前不同濃縮方式對系列標準濃度吸光值穩(wěn)定性以及曲線線性的影響

由表1 可知，氮吹方式處理的各濃度點6 次平行試驗吸光值的相對標準偏差均≤6.0%，說明該方式處理的同一濃度點平行試驗吸光值離散程度較小、數(shù)據(jù)間的穩(wěn)定性較好；而水浴方式處理的各濃度點6 次平行試驗吸光值的相對標準偏差均大于10%，最高達到48.7%，說明該方式處理的同一濃度點平行試驗吸光值離散程度較大、數(shù)據(jù)間的穩(wěn)定性較差。水浴處理的同一濃度點6 次平行試驗吸光值波動幅度大，而氮吹處理的穩(wěn)定性很好。

表1 不同濃縮方式的系列標準濃度吸光值測定結(jié)果表

由表2 可知，人參皂苷含量在0.075 6 ～0.264 6 mg時，60 ℃氮吹方式得到的標準曲線相關系數(shù)R2明顯優(yōu)于60 ℃水浴方式，而且60 ℃水浴方式處理的標準點曲線線性（R2）低于0.99，曲線相關性差。因此，選擇氮吹方式有利于該測定方法標準曲線的建立，得到穩(wěn)定性好、線性好的標準曲線，也有利于在不同時期測定皂苷時及時發(fā)現(xiàn)異常數(shù)據(jù)。

表2 不同濃縮方式的系列標準濃度曲線線性比較表

2.2 凈化時不同洗脫液對樣品測定回收率的影響

洗脫液濃縮選擇60 ℃氮氣吹干的方式，由表3 可知，使用兩種不同的洗脫液，樣品回收率均在85%以上，在標準曲線線性范圍內(nèi)，加標濃度越高，樣品回收率越高。用70%甲醇洗脫，低、中、高3 種不同加標量的回收率均高于90%，回收率相對較好；采用70%乙醇洗脫，加標量低的樣品回收率低于90%；且對于同一加標水平，采用70%甲醇洗脫均比70%乙醇洗脫回收率更好。因此，選用70%甲醇洗脫進行后續(xù)實驗更利于食品中總皂苷含量的測定。

表3 凈化時不同洗脫液對樣品測定回收率的影響表

2.3 顯色前樣品洗脫液不同濃縮方式對樣品測定結(jié)果穩(wěn)定性的影響

凈化時的洗脫液選用70%甲醇，由表4 可知，采用60 ℃水浴揮干的6 次平行試驗結(jié)果相對標準偏差超過8%，同一樣品測定結(jié)果數(shù)據(jù)相對離散，難以滿足第三方檢測機構(gòu)對檢測數(shù)據(jù)穩(wěn)定性的要求；采用60 ℃氮吹至干的6 次平行試驗結(jié)果相對標準偏差為2.4%，數(shù)據(jù)相對集中、穩(wěn)定，采用該方式對樣品洗脫液進行處理，更有利于檢測工作的開展。

2.4 不同洗脫液和洗脫液濃縮方式對不同量洗脫液濃縮時間的影響

由表5 可知，對于不同量的洗脫液，70%乙醇+60 ℃水浴揮干的方式所消耗的時間均比70%甲醇+60 ℃氮吹至干的方式消耗的時間長。當濃縮量為15 mL 時，采用70%甲醇+60 ℃氮吹至干的方式較70%乙醇+60 ℃水浴揮干的方式可節(jié)省65 min，對于常年大批量連續(xù)檢測樣品的檢驗機構(gòu)，該方式可以節(jié)省大量人力成本和時間成本。

3 結(jié)論

本文對保健食品中總皂苷的測定方法進行了改進，用70%甲醇代替70%乙醇作為洗脫液，用60 ℃氮氣吹干代替60 ℃水浴揮干進行試驗，結(jié)果表明改進后的方法比《保健食品理化及衛(wèi)生指標檢驗與評價技術指導原則》（2020 年版）第二部分第十四章中“保健食品中總皂苷的測定”更高效省時，對于樣品量大的檢驗機構(gòu)具有很大意義；系列標準吸光值更穩(wěn)定，所得標準曲線相關系數(shù)更好；樣品測定液的吸光值也更穩(wěn)定、樣品測定結(jié)果重現(xiàn)性更好，回收率更高。因此，改進后的方法更有利于食品中總皂苷的測定。