腫瘤標志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199聯合診斷胰腺癌的價值

劉永生

（內蒙古自治區精神衛生中心檢驗科，內蒙古 呼和浩特，010010）

胰腺癌在全球范圍內的發病率在所有惡性腫瘤中的位置雖然不在前列，但是病死率一直居高不下，嚴重影響患者的身心健康。胰腺癌發病早期無典型癥狀，早期診斷率比較低，往往錯過最佳診治階段[1]。同時由于腫瘤灶體積、范圍等還較小，難以通過影像學與臨床癥狀進行確認[2]。研究表明，除基礎疾病、職業暴露、年齡、性別、遺傳因素，生活行為也是胰腺癌的重要危險因素之一，與胰腺癌的發病率有關[3]。盡管手術切除、化學療法和放射療法在胰腺癌的治療中應用較廣泛，但是由于腫瘤頻繁的復發和轉移，其總體的治療效果有限，為此進行早期診斷具有重要價值[4-5]。腫瘤標志物是臨床診療惡性腫瘤的重要參考，也是胰腺癌診療的重要實驗室指標[6]。癌胚抗原（CEA）、糖類抗原199（CA199）是由胎兒、胎盤、消化道、支氣管黏膜等產生的糖蛋白。正常人中血清癌胚抗原與糖類抗原199的含量很低，但是在炎癥性疾病、腫瘤患者的血清中呈現高表達狀況，尤其是在惡性腫瘤患者中的含量非常高。AFF3的全名為AF4/FMR2 家族成員3，具有調節DNA轉錄等作用，對于一些腫瘤定位的判斷具有重要價值[7]。miRNAs是當前研究的重點，miRNAs是真核生物中不具有編碼功能的小分子物質，主要發揮表觀遺傳學的功能[8]。miR-429與胰腺癌癥患者的轉移狀態高度相關，由此推測miR-429在胰腺癌的增殖、侵襲轉移中也應該發揮著重要的生物學功能[9]。本文具體探討與分析了腫瘤標志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199聯合診斷胰腺癌的價值，以促進胰腺癌的早期檢出，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年8月—2022年12月內蒙古自治區精神衛生中心接受檢驗的105例胰腺癌患者作為胰腺癌組，同期選取在內蒙古自治區精神衛生中心接受檢驗的105例胰腺良性結節作為良性組。在胰腺癌組中，平均腫瘤最大直徑（4.10±0.21）cm；病理類型：鱗癌80例，腺癌25例；淋巴結轉移35例；組織學分化：高分化35例，低分化25例，中分化45例；臨床分期：Ⅰ期55例，Ⅱ期35例，Ⅲ期15例。胰腺癌組與良性組患者的一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性，見表1。本研究經內蒙古自治區精神衛生中心醫學倫理委員會批準。患者知情同意本研究并簽署知情同意書。

表1 胰腺癌組與良性組一般資料比較 [（）/n（%）]

表1 胰腺癌組與良性組一般資料比較 [（）/n（%）]

注：1 mm Hg≈0.133 kPa。

組別例數（n）性別年齡（歲）空腹血糖（mmol/L）男女身體質量指數（kg/m2）收縮壓（mm Hg）心率（次/min）舒張壓（mm Hg）胰腺癌組10555（52.38）50（47.62）58.21±4.5522.82±2.86123.11±12.3882.47±5.6975.38±5.675.69±0.21良性組10554（51.43）51（48.57）58.58±4.5722.19±3.19123.87±11.2782.76±6.3575.20±4.695.62±0.66 t/χ20.0190.5881.5070.4650.3490.2511.036 P 0.8900.5570.1330.6420.7290.8020.132

1.2 納入與排除標準

納入標準：①年齡在30～70歲；②胰腺癌組符合胰腺癌的病理學診斷標準[2]；③良性組病理診斷為胰腺結節良性；④臨床、病理資料完整。

排除標準：①合并嚴重心腦血管疾病的患者；②伴有基因疾病的患者；③合并肝組織、腎組織等器官疾病的患者；④合并嚴重自身免疫系統疾病患者；⑤合并有血液系統疾病的患者；⑥合并其他惡性腫瘤的患者；⑦妊娠與哺乳期婦女；⑧合并有遺傳代謝性疾病的患者。

1.3 血清miR-429、CEA、AFF3、CA199檢測

清晨抽取胰腺癌組與良性組患者的空腹外周靜脈血4 mL，靜置20 min后，采用離心機在4 ℃ 離心后（3 000 r/min離心10 min），取上層血清，采用酶聯免疫法檢測血清CEA、AFF3、CA199含量，分別由上海西唐生物科技有限公司、上海酶聯公司、大連TAKARA公司提供試劑盒（批號分別為20838114、20448914、34149821），按照說明書操作。

1.4 觀察指標

（1）調查胰腺癌組與良性組患者的性別、年齡、身體質量指數、收縮壓、心率、舒張壓、空腹血糖。（2）重點調查胰腺癌組患者的臨床病理特征，包括病理類型、組織學分化、臨床分期、淋巴結轉移等。（3）CEA正常參考范圍0.0～10.0 ng/mL，AFF3參考范圍0.0～40.0 μg/L，CA199參考范圍0.0～50.0 U/mL。同時，提取血清的DNA，采用熒光定量PCR方法檢測血清miR-429相對表達水平，陽性標準為miR-429相對表達水平為健康人群的3倍及以上。聯合檢測陽性的判斷標準：血清miR-429、CEA、AFF3、CA199任一一項判斷為陽性。

1.5 統計學分析

以EXCEL 2022整理數據，采用SPSS 22.00統計學軟件進行數據分析。符合正態分布的計量資料以（）表示，采用t檢驗；計數數據以[n（%）]表示，采用χ2檢驗；相關性分析采用Pearson相關分析，診斷價值分析采用受試者操作特征（ROC）曲線分析，0.5＜ROC曲線下面積（AUC）≤0.7有較低準確性，在0.7＜AUC≤0.9有一定準確性，0.9＜AUC＜1.0有較高準確性。數據一致性分析采用Kappa檢驗，Kappa值越大，表示一致性越好，Kappa≤0.2為差，0.2＜Kappa≤0.4為一般，0.4＜Kappa≤0.6為中等，0.6＜Kappa≤0.8為好，Kappa＞0.8為非常好，檢驗水準為α=0.05。

2 結果

2.1 血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表達水平比較

胰腺癌組的血清CEA、AFF3、CA199含量顯著高于良性組，差異有統計學意義（P＜0.05），血清miR-429相對表達水平與良性組相比也顯著增加，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 胰腺癌組與良性組血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表達水平比較 （）

表2 胰腺癌組與良性組血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表達水平比較 （）

注：CEA，癌胚抗原；CA199，糖類抗原199。

組別例數CA199（U/mL）CEA（ng/mL）AFF3（μg/L）miR-429胰腺癌組10590.43±4.1163.44±4.03 89.47±13.586.77±0.26良性組10528.66±2.43 3.79±0.3425.36±3.351.98±0.17 t 132.566151.133 46.967158.003 P＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001

2.2 血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表達陽性率比較

胰腺癌組的血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表達陽性率為74.29%、80.00%、84.76%、90.48%，顯著高于良性組的4.76%、5.71%、3.81%、6.67%，差異有統計學意義（P＜0.05）,見表3。

表3 胰腺癌組與良性組血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表達陽性率比較 [n（%）]

2.3 相關性分析

在胰腺癌210例患者中，Pearson相關分析顯示血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表達水平與組織學分化、臨床分期、淋巴結轉移等存在相關性（P＜0.05），見表4。

表4 胰腺癌患者血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表達水平與病理特征的相關性 （n=105）

2.4 聯合診斷價值

在胰腺癌組與良性組210例患者中，腫瘤標志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199判斷為胰腺癌104例，腫瘤標志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199鑒別診斷胰腺癌的敏感度與特異度分別為98.10%（103/105）、99.05%（104/105），陽性預測值為99.04%（103/104），陰性預測值為98.11%（104/106），Kappa檢驗分析聯合診斷的一致性為0.874，ROC分析顯示腫瘤標志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199聯合診斷胰腺癌的最大曲線下面積為0.920，具體情況見表5與圖1。

圖1 腫瘤標志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199聯合診斷胰腺癌的曲線下面積

表5 腫瘤標志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199聯合診斷胰腺癌的敏感度與特異度 （n=210）

3 討論

3.1 胰腺癌患者多伴有血清miR-429、CEA、AFF3、CA199的高表達

胰腺癌的病死率一直比較高，胰腺癌的發病風險與一些遺傳和環境因素有關，手術、放療和化療是目前胰腺癌患者的主要治療方法。胰腺癌患者的5年生存率很低，因為復發的風險很高[10]。此外，促進胰腺癌的發生、發展的遺傳機制目前還沒有得到很好的理解[11]。因此，迫切需要尋找新的胰腺癌早期診斷的生物學標志物。腫瘤標志物的血清學檢測具有動態性、方便性、快速性、簡便性、非介入性等優勢，能對腫瘤的早期診斷及鑒別做出判斷[12]。本研究顯示胰腺癌組的血清CEA、AFF3、CA199含量顯著高于對照組（P＜0.05），血清miR-429相對表達水平與對照組相比也顯著增加（P＜0.05）；胰腺癌組的血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表達陽性率為74.29%、80.00%、84.76%、90.48%，顯著高于對照組的4.76%、5.71%、3.81%、6.67%（P＜0.05），表明胰腺癌多伴有血清miR-429、CEA、AFF3、CA199的高表達。從機制上分析，CEA是很早開始應用于惡性腫瘤鑒別診斷的標志物之一，在胰腺癌患者中的應用也比較高，是存在于惡性腫瘤組織中的一種基因編碼于19號染色體上胎兒性糖蛋白[13]。CA199是一種哺乳動物組織中普遍存在的糖蛋白，可作為胰腺癌特異性較強的腫瘤標志物[14]。AFF3屬于高度保守的核轉錄因子laf4/mllt2基因家族，在多種腫瘤的發生與淋巴系統發育中發揮重要作用。miRNA抑制腫瘤相關基因的轉錄，通過與靶基因mRNA的3'-UTR區堿基位點特異性配對引起靶基因mRNA的降解或翻譯抑制，從轉錄后水平調控靶基因的表達。miR-429也是多種惡性腫瘤的生物標志物，在惡性腫瘤中表達上調與不良預后明顯呈正相關[15]。

3.2 腫瘤標志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199聯合診斷胰腺癌具有很高的價值，與患者的病理特征存在相關性

腫瘤標志物是當前診斷癌癥的有效標志物，CA199是多種腫瘤的重要特異性標志物。CA199是一種糖鏈抗原，含有大量的糖基，在多種惡性腫瘤中的含量明顯升高[16]。AFF3廣泛存在于在人類的生殖系統上皮細胞、上呼吸道黏膜細胞、腎遠曲小管細胞中，當機體發生惡性腫瘤，AFF3可顯著表達上升。在所有類型的惡性癌癥腫瘤中，miRNAs都被發現在機體內表達調控失調，發揮致癌或腫瘤抑制功能[17-18]。目前大量研究分析表明，機體內多種癌癥腫瘤細胞的增殖、發生發展進程及患者預后生存率等均與microRNA密切相關[19-20]。本研究顯示，在胰腺癌210例患者中，Pearson相關分析顯示血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表達水平與組織學分化、臨床分期、淋巴結轉移等存在相關性（P＜0.05）；依據腫瘤標志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199判斷為胰腺癌104例，腫瘤標志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199鑒別診斷胰腺癌的敏感度與特異度分別為98.10%（103/105）、99.05%（104/105），陽性預測值為99.04%（103/104），陰性預測值為98.11%（104/106），Kappa檢驗分析聯合診斷的一致性為0.874，ROC分析顯示腫瘤標志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199聯合診斷胰腺癌的最大曲線下面積為0.920，表明腫瘤標志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199聯合診斷胰腺癌具有很高的價值。由于經費問題與一定的倫理問題，本次研究沒有納入健康人群進行分析，調查人數過少，分析的指標比較少，沒有進行單一指標的診斷學分析，也沒有進行影像學判斷分析，結果存在一定的偏倚，將在后續研究中增加樣本和分組，深入探討血清miR-429、CEA、AFF3、CA199在胰腺癌的診斷價值。

綜上所述，胰腺癌多伴隨有血清miR-429、CEA、AFF3、CA199的高表達，與患者的病理特征存在相關性，腫瘤標志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199聯合診斷胰腺癌具有很高的敏感度與特異度。