HPLC-FP 法同時(shí)測(cè)定新品富硒竹筍中10 種核苷類成分的含量

秦心睿，聶曉兵，袁高陽(yáng)，劉詩(shī)菡，楊玉玉，劉志新，邱首哲，鄭 麗，楊 碩,*，范寶磊

（1.湖北科技學(xué)院藥學(xué)院，湖北咸寧 437100；2.湖北省咸寧市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，湖北咸寧 437100；3.湖北科技學(xué)院核技術(shù)與化學(xué)生物學(xué)院，湖北咸寧 437100）

富硒竹筍，禾本科竹亞科多年生常綠植物，是可食用竹種幼嫩的莖[1-2]，是一種備受人們歡迎的蔬菜，食用和栽培歷史極為悠久。《本草綱目》中闡述了竹筍的藥用功效：竹筍味甘、微寒、無(wú)毒[3-4]、具有消渴、利水道[5]、養(yǎng)氣、清熱化痰[6]、爽胃[7]等功效。現(xiàn)代研究表明，富硒竹筍含有豐富的核苷類成分[8-9]、膳食纖維[10]、蛋白質(zhì)、氨基酸、脂肪、糖類、維生素和礦物質(zhì)元素[11-12]，是優(yōu)良的保健蔬菜，且具有較高的藥用價(jià)值，有降低血糖、促進(jìn)創(chuàng)面愈合、延緩衰老、增強(qiáng)免疫功能、抑制細(xì)胞突變的作用，還可調(diào)節(jié)胃腸道等藥理作用，對(duì)肥胖、高脂血、高血壓、腫瘤等疾病具有預(yù)防作用[13]。

核苷類化合物是細(xì)胞的重要組成成分，作為生物活性成分，對(duì)機(jī)體的免疫系統(tǒng)、代謝系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)及心血管系統(tǒng)等有著很強(qiáng)的調(diào)節(jié)作用，例如抗血小板聚集、抗心律失常、抗氧化劑、抗癲癇以及抗腫瘤等，是改善人類健康和預(yù)防疾病的重要組成成分之一[14-15]。竹筍作為傳統(tǒng)的藥食同源植物，應(yīng)用多以水為溶劑進(jìn)行加工，其水溶性活性成分的生物活性研究已經(jīng)受到一定的關(guān)注，富硒竹筍具有紫外吸收的水溶性成分主要是核苷類物質(zhì)[16-17]。因此，核苷類成分的含量可作為評(píng)價(jià)食品和藥品品質(zhì)的指標(biāo)，核苷是一類由含氮堿基與糖縮合而成的糖苷，是構(gòu)成生命體DNA 和RNA 的基本物質(zhì)，核苷類成分已經(jīng)被證實(shí)是重要的生物活性成分，與富硒竹筍生物活性（抗腫瘤、抗癲癇、抗氧化等）具有一定的關(guān)聯(lián)性[18]。

目前，小柴胡[19]、熟地黃[20]、半夏[21]、食用菌[22]、龍眼[23]等藥材和食材中已報(bào)道建立了核苷類物質(zhì)的檢測(cè)方法。但是竹筍中核苷類等含氮類化合物的液相檢測(cè)方法報(bào)道較少，并且針對(duì)新品富硒竹筍中胞嘧啶、尿嘧啶、胞苷、次黃嘌呤、尿苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤、鳥苷、胸苷、腺苷10 種核苷的同時(shí)測(cè)定的報(bào)道也相對(duì)較少[24-25]。本研究采用HPLC 法測(cè)定21 種富硒竹筍中10 種核苷類成分的含量，并采用主成分分析、相關(guān)性分析和聚類分析對(duì)其進(jìn)行評(píng)價(jià)，比較21 種富硒竹筍中化學(xué)成分的差異，探究21 種竹筍的質(zhì)量等同性，為解決竹筍基源單一的狀況提供理論基礎(chǔ)，為富硒竹筍的進(jìn)一步高效開發(fā)利用和質(zhì)量控制提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

富硒竹筍 共21 種，主要包括兩大類，分別為咸寧市農(nóng)業(yè)科學(xué)院最新研發(fā)的新品富硒竹筍和市場(chǎng)上已有的富硒竹筍，所有實(shí)驗(yàn)所需富硒竹筍的品種認(rèn)真檢查，洗凈、去除損壞部分，放入冰箱儲(chǔ)存（2 ℃）。21 種富硒竹筍的采樣地點(diǎn)、采樣時(shí)間和部位，如表1 所示；磷酸二氫鉀、磷酸 分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；甲醇、乙腈 色譜級(jí)，德國(guó)Merck 公司；超純水 實(shí)驗(yàn)室自制；對(duì)照品胞嘧啶（cytosine，CAS：71-30-7）、尿嘧啶（uracil，CAS：66-22-8）、胞苷（cytidine，CAS：65-46-3）、次黃嘌呤（hypoxanthine，CAS：68-94-0）、尿苷（uridine，CAS：58-96-8）、胸腺嘧啶（thymine，CAS：65-71-4）、腺嘌呤（adenine，CAS：73-24-5）、鳥苷（guanosine，CAS：118-00-3）、胸苷（thymidine，CAS：50-89-5）、腺苷（adenosine，CAS：58-61-7）純度質(zhì)量分?jǐn)?shù)均大于98%，上海麥克林生化科技有限公司。

表1 21 種富硒竹筍的基本信息Table 1 Basic information of 21 selenium-rich bamboo shoots

HPLC-16 島津高效液相色譜儀 日本島津公司；CM-RO-C2 實(shí)驗(yàn)室超純水機(jī) 寧波丹斯博頓環(huán)保科技責(zé)任有限公司；FA2004B 電子分析天平 上海越平科學(xué)儀器有限公司；KQ3200DB 超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；FSJ-A03D1 型粉碎機(jī) 廣東佛山市尚電電器有限公司；SHZ-D（Ⅲ）型循環(huán)水式多用真空泵 鄭州博科儀器設(shè)備有限公司；DZF-6050 真空干燥箱 上海Bullun 實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療器械廠；VM-B 漩渦混合器 上海舍巖儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 溶液的制備

1.2.1.1 對(duì)照品溶液的配制 分別精密稱取對(duì)照品胞嘧啶、尿嘧啶、胞苷、次黃嘌呤、尿苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤、鳥苷、胸苷、腺苷各10 mg 分別置于10 個(gè)10 mL 容量瓶中，加入超純水定容，配置成質(zhì)量濃度分別為1 mg·mL-1的單一對(duì)照品儲(chǔ)備液，用超純水稀釋定容得到核苷類成分濃度為20 μg/mL 混合標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，經(jīng)0.45 μm 濾膜過(guò)濾，置于進(jìn)樣瓶中，進(jìn)HPLC 系統(tǒng)分析。

1.2.1.2 供試品溶液的配制 取21 種不同品種的新鮮富硒竹筍各約4 g，精密稱定，用移液管精密量取20 mL 超純水置于錐形瓶中，放置18 h 浸提，超聲30 min，過(guò)濾。濾液過(guò)0.45 μm 濾膜，取濾液作為供試品，經(jīng)0.45 μm 濾膜過(guò)濾，置于進(jìn)樣瓶中，待測(cè)。

1.2.2 HPLC 色譜條件 用Shimadzu LC-16 系統(tǒng)，Inertsil ODS-3，C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），本實(shí)驗(yàn)選用了不同種流動(dòng)相進(jìn)行考察，經(jīng)過(guò)篩選，從乙腈-水、甲醇-水、甲醇-（0.02 mol·L-1）磷酸二氫鉀、乙腈-（0.1 mol·L-1）磷酸二氫鉀、甲醇-0.1%磷酸水、乙腈-0.1%磷酸水中進(jìn)行從流動(dòng)相的比例進(jìn)行最優(yōu)條件的選擇。梯度洗脫程序?yàn)?～5 min，1% B；5～10 min，1%～5% B；10～20 min，5%～15% B；20～25 min，15%～5% B；25～30 min，5%～1% B；設(shè)定柱溫為30 ℃，流速為0.8 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為260 nm，進(jìn)樣量為20 μL。

1.2.3 方法學(xué)驗(yàn)證

1.2.3.1 線性回歸方程 精密吸取混合標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液2、10、20、40、80、120 μL 分別置于2 mL 的量瓶中，用移液管精密量取超純水，經(jīng)定容、搖勻后配制得到1、5、10、20、40、60 μg/mL 的混合對(duì)照品溶液，用0.45 μm 濾膜過(guò)濾，裝入進(jìn)樣小瓶中，按照質(zhì)量濃度由低到高分別進(jìn)樣，每個(gè)濃度提取配置混合標(biāo)準(zhǔn)品3 份。橫坐標(biāo)（X）為質(zhì)量濃度，縱坐標(biāo)（Y）為峰面積，進(jìn)行線性回歸分析。

1.2.3.2 檢出限（LOD）和定量限（LOQ）試驗(yàn) 將混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行HPLC 分析，得到各核苷對(duì)照品溶液最小檢出限和最小定量限。最小檢出限和最小定量限定義為信噪比分別等于3 和10 對(duì)應(yīng)的進(jìn)樣量。

1.2.3.3 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液20 μL，制備6 份混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按色譜條件測(cè)定，以峰面積計(jì)算RSD。

1.2.3.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密量取供試品溶液40 μL，制備6 份混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，待測(cè)，記錄峰面積，并計(jì)算各核苷化合物含量來(lái)表示RSD。

1.2.3.5 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn) 精密量取供試品溶液60 μL，共3 份，再精密加入混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液1、20、60 μL，一式三份進(jìn)行HPLC 色譜分析，以計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

1.2.4 富硒竹筍指紋圖譜的建立 將21 種富硒竹筍對(duì)其10 種核苷類化合物建立HPLC 圖譜，將所得的各色譜圖導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》（2012）中進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，設(shè)定以S1 為參照?qǐng)D譜，時(shí)間窗寬度為0.1 min，采用平均數(shù)生成對(duì)照?qǐng)D譜，經(jīng)過(guò)多點(diǎn)校正、Mark 峰匹配生成21 種富硒竹筍共有模式指紋圖譜。

1.3 數(shù)據(jù)處理

繪制21 種富硒竹筍的HPLC 指紋圖譜，采用《中藥色譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012 版）》進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)，確定共有峰；采用SPSS 27.0 軟件進(jìn)行主成分分析，Origin 2021 版軟件進(jìn)行相關(guān)性分析和聚類分析從而對(duì)21 種富硒竹筍中10 種核苷類成分含量進(jìn)行比較研究。

2 結(jié)果與分析

2.1 HPLC 條件的選擇優(yōu)化

流動(dòng)相的組成也應(yīng)被視為改善峰型的重要因素，本實(shí)驗(yàn)選用了不同種流動(dòng)相進(jìn)行考察。其結(jié)果如圖1 所示，顯示同一條件下，甲醇作為有機(jī)相時(shí)，完全出峰的時(shí)間為25 min，乙腈作為有機(jī)相時(shí)，完全出峰時(shí)間為28 min。雖然甲醇作為有機(jī)相的保留時(shí)間小于乙腈作為有機(jī)相時(shí)的保留時(shí)間，但是前者的部分色譜峰分離度R 小于1.5，且色譜峰寬，所以不宜采用甲醇作為有機(jī)相。乙腈作為有機(jī)流動(dòng)相時(shí)有所改善，綜合選擇乙腈作為有機(jī)流動(dòng)相。此外，溶液電離、流動(dòng)相的pH 對(duì)核苷類化合物的保留和選擇性也有明顯的影響。在水相中使用純水作為流動(dòng)相改性劑，以改善目標(biāo)峰的拖尾現(xiàn)象，最終選用乙腈-水作為優(yōu)選流動(dòng)相，并進(jìn)行梯度洗脫。在上述優(yōu)化條件下，所有目標(biāo)化合物可在28 min 內(nèi)完全地分離。最終確定色譜條件為以水（A）-乙腈（B）為流動(dòng)相，梯度洗脫程序?yàn)?～5 min，1% B；5～10 min，1%～5% B；10～20 min，5%～15% B；20～25 min，15%～5% B；25～30 min，5%～1% B。

圖1 不同流動(dòng)相的HPLC 特征圖譜Fig.1 HPLC characteristic chromatogram of different mobile phases

2.2 方法學(xué)驗(yàn)證

2.2.1 線性回歸方程 線性關(guān)系考察結(jié)果發(fā)現(xiàn)，峰面積（Y）與濃度（X）之間具有良好的相關(guān)性（R2≥0.9990），表明10 種核苷類成分在其所在的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，結(jié)果見表2。

表2 目標(biāo)化合物的回歸方程、決定系數(shù)（R2）、線性范圍、檢出限（LOD）和定量限（LOQ）Table 2 Regression equation,coefficient of determination (R2),linear range and LOD and LOQ of target compounds

2.2.2 檢出限（LOD）和定量限（LOQ）試驗(yàn) 將混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液多次稀釋分別進(jìn)行HPLC 分析，得到各核苷對(duì)照品溶液最小檢出限和最小定量限的比值接近1:3，表明在該條件下測(cè)得的結(jié)果相對(duì)準(zhǔn)確，結(jié)果見表2。

2.2.3 精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、準(zhǔn)確度試驗(yàn) 根據(jù)精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各組分色譜峰的保留時(shí)間波動(dòng)在0.05 min 內(nèi)，各核苷類成分峰面積的RSD 在0.31%～1.25%范圍內(nèi)，表明儀器精密度良好；根據(jù)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以峰面積計(jì)算各核苷化合物的RSD 在0.75%～2.41%范圍內(nèi)，供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好；根據(jù)重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，混合標(biāo)準(zhǔn)品中各核苷類化合物含量的RSD 在0.43%～1.70%范圍內(nèi)，表明該方法的重復(fù)性良好；根據(jù)準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各個(gè)核苷回收率平均值分別為胞嘧啶92.34、尿嘧啶98.73、胞苷104.23、次黃嘌呤90.42、尿苷106.20、胸腺嘧啶96.45、腺嘌呤104.21、鳥苷102.44、胸苷97.23、腺苷98.60，RSD 值均在0.33%～0.79%范圍內(nèi)，結(jié)果顯示該方法對(duì)于確定10 種目標(biāo)化合物是準(zhǔn)確的，結(jié)果見表3。

表3 精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果（RSD%，n=6）Table 3 Test results of precision,repeatability,stability and accuracy (RSD%,n=6)

2.3 樣品的定量分析

按照1.2.1 中的方法進(jìn)行提取，按照1.2.2 中的色譜條件分別對(duì)21 種富硒竹筍的筍尖部分進(jìn)行HPLC 定量分析，根據(jù)得到的10 種核苷類化合物的線性方程進(jìn)行計(jì)算，最終得到的含量測(cè)定結(jié)果見表4 和圖2。

圖2 21 種富硒竹筍樣品中10 種核苷化合物的含量Fig.2 Contents of 10 Nucleoside Compounds in 21 Seleniumenriched Bamboo Shoots

表4 21 種富硒竹筍樣品中10 種核苷化合物的含量（±s，n=3）Table 4 Contents of 10 nucleoside compounds in 21 selenium-enriched bamboo shoots (±s,n=3)

表4 21 種富硒竹筍樣品中10 種核苷化合物的含量（±s，n=3）Table 4 Contents of 10 nucleoside compounds in 21 selenium-enriched bamboo shoots (±s,n=3)

注：“-”表示沒(méi)有此類核苷類化合物。

由表4 和圖2 可知，不同品種富硒竹筍中10 種核苷類成分含量差異明顯，且核苷類成分結(jié)構(gòu)比（每個(gè)核苷類成分所占該樣品核苷類成分總量比值）也不相同。21 種富硒竹筍中胞嘧啶、尿嘧啶、胞苷、次黃嘌呤、尿苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤、鳥苷、胸苷、腺苷和總核苷類成分的平均含量分別為0.9311、0.4965、0.8828、2.1497、1.2950、32.5135、0.2777、0.9400、18.2668、3.0507、59.8727 μg·g-1。其中，胸腺嘧啶含量最高，平均含量達(dá)32.5135 μg·g-1，胸腺嘧啶和胸苷的平均含量占10 種核苷類化合物平均總量的84.81%，而胞嘧啶、尿嘧啶、胞苷、腺嘌呤、鳥苷含量相對(duì)較低，占核苷總量的5.89%。

2.4 富硒竹筍指紋圖譜的建立

將不同品種的富硒竹筍按照上述方法制備供試品溶液進(jìn)行HPLC 分析，不同核苷類化合物均在27 min 內(nèi)洗脫出來(lái)，將所得的各色譜圖導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012 版）》中進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，生成核苷類化合物樣品對(duì)照指紋圖譜，如圖3。

圖3 混合標(biāo)準(zhǔn)品及樣品提取物中核苷類成分的HPLC 特征圖譜Fig.3 HPLC characteristic chromatogram of nucleosides in mixed standard and sample extracts

對(duì)不同品種的富硒竹筍特征圖譜分析，發(fā)現(xiàn)1～10 號(hào)峰為所有樣品溶液色譜峰中共有色譜峰，10 個(gè)峰依次為胞嘧啶、尿嘧啶、胞苷、次黃嘌呤、尿苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤、鳥苷、胸苷、腺苷。且10 個(gè)峰的峰面積和分離度較大，因此說(shuō)明不同品種的富硒竹筍含有的核苷類化合物大致相同，但是含量有所差異。

以S1 為對(duì)照?qǐng)D譜，計(jì)算共有峰的保留時(shí)間的RSD，結(jié)果見表5。從中得出每個(gè)峰號(hào)的共有峰數(shù)量代表不同品種中含有的核苷類化合物的種類，特征圖譜分析結(jié)果與實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致。計(jì)算不同品種的富硒竹筍核苷類化合物的色譜圖和對(duì)照?qǐng)D譜之間的相似度，結(jié)果見表5，從相似度結(jié)果來(lái)看，本實(shí)驗(yàn)收集的不同品種的富硒竹筍樣品之間核苷類化合物有一定的差異性，說(shuō)明富硒竹筍不同品種中均有一定的應(yīng)用價(jià)值，其在富硒竹筍核苷類化合物質(zhì)量方面能夠發(fā)揮積極的作用。

表5 共有峰保留時(shí)間和共有峰的峰數(shù)Table 5 Retention time of common peak and peak number of common peak

2.5 主成分分析（PCA）

應(yīng)用SPSS 分析軟件對(duì)所有樣品中10 種核苷類成分含量進(jìn)行主成分分析。提取標(biāo)準(zhǔn)為特征值>1，得到4 個(gè)主成分。其中，第一主成分的方差貢獻(xiàn)率為27.543%；第二個(gè)主成分的方差貢獻(xiàn)率為48.916%；第三個(gè)主成分的方差貢獻(xiàn)率為62.069%；第四個(gè)主成分的方差貢獻(xiàn)率為74.390%，包含的信息量大，貢獻(xiàn)率最高。主成分得分系數(shù)矩陣見表6。由表6 可知，主成分1 與胸腺嘧啶、鳥苷、胸苷、腺苷4 個(gè)成分的相關(guān)性高于其他核苷類成分，相關(guān)系數(shù)在0.562～0.918之間；主成分2 與尿嘧啶、胞苷2 個(gè)成分的相關(guān)性高于其他核苷成分，相關(guān)系數(shù)在0.926～0.941 之間；主成分3 與次黃嘌呤、尿苷2 個(gè)成分的相關(guān)性高于其他核苷類成分，相關(guān)系數(shù)在0.482～0.689 之間；主成分4 與胞嘧啶、腺嘌呤2 個(gè)成分的相關(guān)性高于其他核苷類化合物，相關(guān)系數(shù)在0.223～0.805 之間。主成分分析結(jié)果見表6 和圖4。

圖4 21 種富硒竹筍的主成分分析結(jié)果圖Fig.4 Results of principal component analysis of 21 seleniumenriched bamboo shoots

表6 主成分得分系數(shù)矩陣Table 6 Score coefficient matrix of principal components

將SPSS 分析軟件給出的主成分得分系數(shù)乘以主成分相對(duì)應(yīng)的特征值的平方根，得到4 個(gè)主成分種每個(gè)指標(biāo)所對(duì)應(yīng)的系數(shù)，關(guān)系如下：

PCA 分析結(jié)果顯示（見圖4），市場(chǎng)已有竹筍相對(duì)集中的聚集在一起，新品富硒竹筍分布均較散，表明在該大類里個(gè)體間的差異性較大。

2.6 相關(guān)性分析

多樣本兩指標(biāo)之間相關(guān)系數(shù)絕對(duì)值越大，則這兩個(gè)指標(biāo)之間的聯(lián)系越緊密。由此進(jìn)一步考察不同品種富硒竹筍10 種核苷類成分相互間的相關(guān)性，采用Person 相關(guān)系數(shù)對(duì)不同品種富硒竹筍核苷類化合物含量進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果見表7。由表7 可知，21 個(gè)品種富硒竹筍的10 項(xiàng)指標(biāo)之間相關(guān)性存在差異。尿嘧啶含量與胞苷含量存在極顯著正相關(guān)（P<0.01）；胸腺嘧啶含量與胸苷和腺苷含量存在極顯著正相關(guān)（P<0.05），胸苷和腺苷含量的變化共同影響胸腺嘧啶含量的變化；鳥苷含量與胸苷含量存在顯著正相關(guān)，胸苷含量與腺苷含量存在極顯著正相關(guān)（P<0.01）。此外，尿嘧啶與胞苷、鳥苷與胸苷、胸苷與腺苷等的相關(guān)系數(shù)絕對(duì)值大于0.05，指標(biāo)間相關(guān)性較高。相關(guān)性分析結(jié)果表明，所檢測(cè)的21 種富硒竹筍的10 種核苷指標(biāo)間具有一定相關(guān)性，因而所統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)信息重疊，因此采用主成分分析，提高這21 種富硒竹筍品質(zhì)評(píng)價(jià)的分析效率。

表7 不同品種富硒竹筍10 種核苷類化合物指標(biāo)的相關(guān)性分析Table 7 Correlation analysis of 10 kinds of nucleoside compounds in different varieties of selenium-enriched bamboo shoots

2.7 聚類分析

以21 種富硒竹筍樣品10 個(gè)共有峰的峰面積（部分缺失色譜峰面積以0 為計(jì)）為變量，導(dǎo)入SPSS 軟件，將數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化后，采用Ward 聯(lián)結(jié)法，以平方Euclidean 距離為分類依據(jù)，進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析，得到聚類樹狀圖見圖5。當(dāng)距離為8 時(shí)，21 種富硒竹筍樣品可分為3 類，第Ⅰ類包括Y1、X3、CK3、五月季、Y3 和黃甜竹，第Ⅱ類包括CK2、甜富硒竹筍，第Ⅲ類包括富陽(yáng)烏哺雞竹、石竹、黃槽竹、黃桿烏哺雞竹、烏芽竹、雷竹、黃紋竹、高節(jié)竹、Y2、角竹、X2、白哺雞竹、CK1。可見，新品富硒竹筍主要集中在第Ⅰ類，市場(chǎng)上常見的富硒竹筍主要分布在第Ⅱ類和第Ⅲ類。

圖5 21 種富硒竹筍的聚類樹狀圖Fig.5 Cluster tree diagram of 21 selenium-rich bamboo shoots

3 討論與結(jié)論

當(dāng)前使用的抗病毒藥物中近50%是核苷類藥物，許多抗腫瘤藥物也是核苷類成分[26-27]。核苷類成分的研究具有廣闊的前景，也可從中藥中分離有效的核苷類成分作為先導(dǎo)化合物來(lái)尋求更為有效的藥物[28-29]。富硒竹筍中核苷類成分的含量很高，具有開發(fā)作為補(bǔ)充核苷的功能性食品的潛力[30]。現(xiàn)代研究表明，富硒竹筍中的核苷類成分主要有鳥苷、尿嘧啶、腺苷等，具有免疫調(diào)節(jié)、影響機(jī)體心血管系統(tǒng)、抗腫瘤、保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)等藥理作用，是富硒竹筍重要功效成分之一。傳統(tǒng)方法對(duì)于富硒竹筍中核苷類成分的提取方法和分析檢測(cè)方法不僅分析時(shí)間長(zhǎng)，所使用的提取和分析有機(jī)溶劑也具有很大的毒性。因此，開發(fā)一套完整的質(zhì)量評(píng)價(jià)系統(tǒng)為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供理論參考依據(jù)[31]，為富硒竹筍的進(jìn)一步高效開發(fā)利用和質(zhì)量控制提供參考[32]。

以多種富硒竹筍的筍尖部位為考察物，通過(guò)HPLC 對(duì)21 種富硒竹筍的核苷類化合物進(jìn)行定性和定量分析，具有科學(xué)性和綜合性，利用HPLC-FD、主成分分析、相關(guān)性分析和聚類分析對(duì)其多種核苷類成分進(jìn)行化學(xué)計(jì)量學(xué)分析，為解決竹筍基源單一的狀況提供理論基礎(chǔ)。

本研究發(fā)現(xiàn)，這21 種富硒竹筍的10 種核苷類化合物成分指標(biāo)互相間存在著不同程度的相關(guān)性。通過(guò)主成分分析，提取了4 個(gè)主成分，并確定了胸苷、胸腺嘧啶、腺苷、鳥苷為4 項(xiàng)核心指標(biāo)，可用于評(píng)價(jià)不同品種富硒竹筍的品質(zhì)；通過(guò)相關(guān)性分析，得出尿嘧啶與胞苷、鳥苷與胸苷、胸苷與腺苷等指標(biāo)間相關(guān)性較高，指標(biāo)之間的含量會(huì)互相影響；通過(guò)聚類分析，得出新品富硒竹筍主要集中在第Ⅰ類，市場(chǎng)上常見的富硒竹筍主要分布在第Ⅱ類和第Ⅲ類。

? The Author(s) 2024.This is an Open Access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution License (https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).