電針通過調節膀胱及尿道平滑肌中的血清素受體表達改善骶上脊髓損傷大鼠的排尿功能

〔摘要〕 目的 觀察電針治療后骶上脊髓損傷（suprasacral cord injury，SSCI）大鼠的膀胱最大容量（maximum cystometric capacity，MCC）、漏尿點壓力（leakage point pressure，LPP），結合分析逼尿肌、內尿道括約肌（internal urethral sphincter，IUS）中血清素（5-hydroxytryptamine，5-HT）不同亞型受體的表達，探討電針治療通過突觸后5-HT受體調節逼尿肌-尿道括約肌協同失調（detrusor sphincter dyssynergia，DSD）大鼠排尿功能的效應機制。方法 36只SD雌性大鼠，隨機抽取12只作為空白組，剩余24只采用改良Hassan Shaker脊髓橫斷法在T10脊髓節段全橫斷制作SSCI大鼠模型，成模后隨機分為模型組和電針組，每組12只。電針組取次髎、中極、三陰交穴予持續電針刺激40 min，1次/d，連續治療7 d；空白組與模型組只捆綁不治療。采用膀胱造瘺法進行尿流動力學檢測；處死大鼠后取逼尿肌和近端尿道組織，采用Western blot法檢測5-HT受體含量。結果 模型組大鼠MCC、LPP顯著高于空白組（P＜0.01）；電針組MCC顯著低于模型組且高于空白組（P＜0.01），LPP顯著低于模型組（P＜0.01）。與空白組比較，5-HT1A受體在模型組大鼠逼尿肌中表達顯著降低（P＜0.01），IUS中顯著增高（P＜0.01）；電針組大鼠逼尿肌中5-HT1A受體顯著高于模型組（P＜0.01），IUS中5-HT1A受體低于模型組（P＜0.05），但仍顯著高于空白組（P＜0.01）。模型組大鼠逼尿肌中5-HT2B受體表達高于空白組（P＜0.05）；電針組大鼠逼尿肌中5-HT2B受體表達低于模型組和空白組（P＜0.05）。與空白組比較，5-HT7受體在模型組大鼠逼尿肌中表達顯著降低（P＜0.01），IUS中表達顯著增高（P＜0.01）；電針組大鼠逼尿肌和IUS中5-HT7受體的表達均低于模型組（P＜0.05）。結論 電針刺激SSCI后DSD大鼠次髎、三陰交、中極穴引起膀胱及尿道平滑肌中5-HT受體表達變化，5-HT1A和5-HT2B受體可能通過Ca2+流入使平滑肌產生相性和/或強直性收縮，5-HT7受體可能通過環磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）途徑影響大電導Ca2+激活K+（big-conductance Ca2+-activated K+，BK）通道活性介導平滑肌松弛，電針治療由此抑制逼尿肌過度活動、增加其收縮能力并協調尿道阻力以改善SSCI后DSD大鼠下尿路功能。

〔關鍵詞〕 神經源性膀胱；膀胱平滑肌；膀胱部分出口梗阻；外尿道括約肌爆發模式；尿道Cajal間質細胞；機械拉伸；平滑肌張力

〔中圖分類號〕R245.9 " " " " 〔文獻標志碼〕A " " " " "〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０24.02.019

Improvement of electroacupuncture in urinary function of rats with suprasacral cord injury by regulating the expressions of serotonin

receptors in the smooth muscles of the bladder and urethra

ZHANG Yuchen， XU Ming， LIU Qiong， HU Binong， TANG Liya， ZHANG Hong*， AI Kun*

School of Acupuncture-moxibustion， Tuina and Rehabilitation， Hunan University of Chinese Medicine，

Changsha， Hunan 410208， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To observe the maximum cystometric capacity （MCC） and leakage point pressure （LPP） of rats with suprasacral cord injury （SSCI） after electroacupuncture （EA） treatment， and to analyze the expressions of different subtypes of serotonin 5-hydroxytryptamine （5-HT） receptors in the detrusor and internal urethral sphincter （IUS）， so as to explore the effect mechanism of EA in regulating the urinary function of rats with detrusor sphincter dyssynergia （DSD） through postsynaptic 5-HT receptors. Methods Twelve of 36 SD female rats were randomly selected as blank group. The remaining 24 rats were made into SSCI models by modified Hassan Shaker spinal cord transection at T10 segment， which were randomized into model group and EA group after modeling， with 12 rats in each. EA group was given continuous EA stimulation at the acupoints of \"Ciliao （BL32）\" \"Zhongji （CV3）\" and \"Sanyinjiao （SP6）\" for 40 min， once a day， for consecutive seven days; blank and model groups were only bound without any treatment. The urodynamic test was performed by cystostomy. After the rats were sacrificed， tissues of the detrusor and proximal urethra were taken， then Western blot was used to check the content of 5-HT receptors in them. Results The MCC and LPP of model group were significantly higher than those of blank group （Plt;0.01）; the MCC of EA group was significantly lower than that of model group and higher than that of blank group （Plt;0.01）， and the LPP was significantly lower than that of model group （Plt;0.01）. Compared with blank group， the expression of 5-HT1A receptor showed a significant decrease in the detrusor of model group （Plt;0.01） and a significant increase in the IUS （Plt;0.01）. The expression of 5-HT1A receptor in the detrusor of EA group was significantly higher than that of model group （Plt;0.01）， and its expression in the IUS of EA group was lower than that of model group （Plt;0.05）， but still significantly higher than that of blank group （Plt;0.01）. The expression of 5-HT2B receptor in the detrusor of model group was higher than that of blank group （Plt;0.05）; its expression in the detrusor of EA group was lower than that of model and blank groups （Plt;0.05）. Compared with blank group， the expression of 5-HT7 receptor in the detrusor significantly decreased （Plt;0.01） and that in the IUS significantly increased （Plt;0.01） in the model group; its expression in the detrusor and IUS of EA group was lower than that of model group （Plt;0.05）. Conclusion EA stimulation at the acupoints of \"Ciliao （BL32）\" \"Sanyinjiao （SP6）\" and \"Zhongji （CV3）\" of DSD rats after SSCI can induce changes in the expressions of 5-HT receptors in the smooth muscles of the bladder and urethra. 5-HT1A and 5-HT2B receptors may cause phasic and/or tonic contractions of smooth muscles through Ca2+ influx; 5-HT7 receptor may mediate the smooth muscle relaxation by altering the big conductance Ca2+-activated K+ （BK） channel activity through cyclic adenosine monophosphate （cAMP） pathway. EA treatment may improve the lower urinary tract function in DSD rats after SSCI by inhibiting overactivity of the detrusor， increasing its contractility， and coordinating urethral resistance through the above mechanism.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 neurogenic bladder; bladder smooth muscle; partial bladder outlet obstruction; external urethral sphincter bursting activity; urethral Cajal mesenchymal cell; mechanical stretch; smooth muscle tension

骶上脊髓損傷（suprasacral cord injury， SSCI）破壞了協調逼尿肌和尿道功能的正常反射通路。損傷部位在脊髓節段T6至S2之間，脊髓休克期后儲尿過程中膀胱平滑肌（urinary bladder smooth muscle， UBSM）出現不可抑制性收縮，稱為膀胱過度活動（overactivity bladder， OAB）或逼尿肌過度活動（detrusor overactivity， DO）；排尿過程中出現UBSM與外尿道括約肌（external urethral sphincter， EUS）活動不協調，稱為逼尿肌-括約肌協同障礙（detrusor sphincter dyssynergia， DSD），兩者同時收縮導致排尿效率低下和高殘余量[1]。損傷高于脊髓T6水平，則可能出現UBSM與內尿道括約肌（internal urethral sphincter， IUS）協同障礙和自主神經反射亢進[2]。目前，現代醫學的治療措施主要是針對慢性SSCI后DSD患者，使用抗毒蕈堿藥物、肉毒桿菌毒素注射和經皮脛神經刺激（percutaneous tibial nerve stimulation， PTNS）減輕OAB、尿頻、尿失禁的癥狀，使用骶神經調節（sacral neuromodulation， SNM）和導尿術改善排尿效率低下、尿潴留[3]。本課題組既往研究證實，電針治療可以改善SSCI后DSD大鼠急性期排尿功能障礙[4-6]。

血清素又名5-羥色胺（5-hydroxytryptamine， 5-HT），是中樞神經系統的一種關鍵神經遞質。中樞神經系統中參與排尿功能的脊髓反射回路表現出密集的5-HT能神經支配。5-HT作為神經遞質，大多存在于中樞神經系統之外，通過激活突觸后5-HT受體發揮效應。KADEKAWA等[7]認為，反射性EUS爆發模式是大鼠失去脊髓上控制后能部分實現有效排尿的重要原因。而5-HT1A受體激動劑應用于T8挫傷大鼠，可減少排尿期間EUS的緊張性活動，提高排尿效率[8]。對5-HT受體激動劑和拮抗劑的研究認為，5-HT1A和5-HT2受體可誘導膀胱體逼尿肌收縮，5-HT7受體可誘導膀胱頸松弛[9]。但其在大鼠下尿路平滑肌（UBSM和IUS）中的具體效應機制，以及各受體如何協調配合改善SSCI后DSD大鼠排尿功能，值得深入探討。

1 材料與方法

1.1 "實驗動物

雌性SD成年大鼠36只，SPF級，體質量230～250 g。湖南中醫藥大學動物實驗中心提供，許可證號：SCXK（湘）2019-0004，合格證號：1107271911006889。分籠飼養于湖南中醫藥大學動物中心實驗室，飼養溫度24～26 ℃，濕度50%～70%。實驗單位使用許可證號：SYXK（湘）2019-0009，倫理審批號：LL2019092303。

1.2 "主要試劑、藥物和儀器

10%水合氯醛溶液（國藥集團化學試劑有限公司，批號：20181120）；青霉素鈉（華北制藥集團有限責任公司，批號：H13020657）；象皮生肌膏（湖南中醫藥大學第一附屬醫院藥劑科自制）；5-HT1A受體、5-HT7受體（美國Abcam公司，批號：ab64994、ab128892）；5-HT2B受體（愛必信生物科技有限公司，批號：abs136963）；總蛋白抽提試劑盒、BCA蛋白定量試劑盒、KCTM化學發光試劑盒（上海康成生物工程有限公司，批號：KC-415、KC-430、KC-420）。

多通道生理記錄儀（美國Biopac公司，型號：MP150-WSW）；雙通道微量注射泵（史密斯醫學儀器有限公司，型號：WZ-50C6）；電針治療儀（蘇州醫療用品廠有限公司，型號：SDZ-V）；低溫離心機（美國Scilogex公司，型號：D3024R）；酶標儀（美國Thermo公司，型號：FC）；電泳儀（北京六一儀器廠，型號：DYCZ-24EN）。

1.3 "動物分組與造模

1.3.1 "分組 "36只大鼠隨機編號后，采用隨機數字表法分組。首先選取12只作為空白組，其余24只大鼠在T10脊髓節段采用改良Hassan Shaker脊髓橫斷法[10]制作完全性SSCI模型，造模成功后再分為模型組和電針組，每組12只。

1.3.2 "造模方法 "大鼠術前24 h禁食不禁水，術前2 h腹腔注射20萬IU青霉素鈉預防感染。稱重后，用10%水合氯醛300 mg/kg行腹腔麻醉，隨后將大鼠俯臥固定于鼠板上備皮。采用改良Hassan Shaker脊髓橫斷法制作完全性SSCI模型。脊髓橫斷部位選取T10脊髓節段（相當于T8椎骨的位置），通過浮肋連接的T13作為骨性標志向上具體定位。確定手術部位后做標記并消毒皮膚，以標記點為中心沿背部正中線做長約3 cm的縱向切口，依次切開表皮和皮下筋膜，使用玻璃分針鈍性分離兩側豎脊肌，充分暴露棘突和椎板。用顯微咬骨器從尾側向頭側咬除T8椎板直至兩側椎弓根，使脊髓充分暴露，用牙科鉤沿橫斷椎間隙橫向小幅度鉤出脊髓，手術刀切斷脊髓后反復刮掃以確定脊髓完全橫斷，且無神經纖維殘留，則表明脊髓完全橫斷[11]。最后由內層向外逐層縫合完成手術。手術全程要求嚴格消毒及無菌操作，術后觀察大鼠的生命體征是否平穩。

1.4 "術后護理

（1）體溫管理：術后立即置于電熱毯上防止體溫過低，以肛溫上升到 37 ℃以上為佳，大鼠均單籠飼養。（2）抗感染護理：術后48 h內，腹腔注射青霉素鈉20萬U/12 h；48 h后至術后7 d，20萬U/24 h；從術后第8天開始，如大鼠出現膿尿、血尿，則注射20萬U/24 h以抗感染，直至尿液澄清；術后每24小時在傷口周圍使用碘酊進行皮膚消毒3次。（3）Crede手法排尿：每8小時（早、中、晚）用Crede法對大鼠進行人工輔助排尿，注意手法和力度，防止損傷膀胱；密切觀察大鼠的生命體征，每日總飲水量應小于30 mL，防止因膀胱大量尿潴留導致腎臟及膀胱壁損傷。（4）壓瘡防護：用50%乙醇溶液擦拭大鼠的身體（腹部及雙下肢）以防止壓瘡；有壓瘡形成的用象皮生肌膏涂抹以促進傷口愈合。（5）自殘防護：因術后大鼠下肢感覺缺失，部分老鼠會出現撕咬手術部位和下肢的自殘行為，可涂上苦蘋果防舔防咬噴劑防止自殘。

1.5 "納入及剔除標準

1.5.1 "納入標準 "（1）運動功能評估：采用Basso-Beattie-Bresnahan（BBB）評分法[12]，評估大鼠后肢運動功能恢復情況，0分為雙后肢拖行。（2）排尿功能評估：脊髓休克后，雖能不自主、間斷地少許排尿，但膀胱內仍潴留大量尿液，Crede手法輔助排尿時觸及脹大的膀胱在兩手拇指指腹間滾動并感覺排尿有阻力。同時滿足以下兩項條件：BBB評分為0分和采用Crede手法輔助排尿時感到阻力，則認為模型成功，納入實驗。

1.5.2 "剔除標準 "造模后，大鼠出現雙后肢自主運動、脊髓休克期后完全尿潴留或自主排尿、大鼠自殘或死亡的情況，均予以剔除。模型組、電針組各1只大鼠因死亡剔除實驗，最后納入34只大鼠，進行尿流動力學檢測。

1.6 "治療方案

1.6.1 "處理方法 "術后第14天開始實施干預，電針組大鼠取次髎、中極、三陰交穴予持續電針刺激，空白組與模型組大鼠只捆綁固定。均干預40 min/次，1次/d，連續7 d。

1.6.2 "取穴方法 "參照“十三五”國家規劃統編教材《實驗針灸學》[13]大鼠標準穴位圖譜定位，并模擬人體腧穴骨度分寸法量取次髎、中極、三陰交穴。

1.6.3 nbsp;電針方法 "（1）針刺方法：各穴均用30號1寸針直刺，深度分別為次髎15 mm、中極5 mm、三陰交5 mm。（2）穴位對接：大鼠仰臥位固定，中極與三陰交一組（三陰交左右兩穴隔日交替進行），電針刺激時間20 min；俯臥位固定，次髎與大鼠尾根部一組（次髎左右兩穴隔日交替進行），電針刺激時間20 min。（3）電針刺激參數：SDZ-V型華佗牌電針治療儀，疏密波10/50 Hz，強度以肢體輕顫并耐受為度。

1.7 "指標檢測

1.7.1 "尿流動力學檢測 "治療7 d后，所有大鼠采用膀胱造瘺法行尿流動力學檢測。大鼠麻醉后，用Crede手法排空膀胱后進行膀胱造瘺，用眼科剪在膀胱頂部造一小口插入F3導尿管，深度1～2 cm，用4-0絲線將切口部位膀胱與導管捆綁固定防止滲漏。將導尿管、MP150-WSW型16通道生理記錄儀與WZ-50C6微量注射泵通過三通管相連接。始終保持導尿管水平放置，與尿道平行。設置MP150主機壓力基線為零。打開微量注射泵，灌注速度為6 mL/h，灌注的生理鹽水溫度為25～35 ℃。觀察并記錄大鼠首次尿液溢出時的膀胱壓力即為漏尿點壓力（lea？鄄kage point pressure，LPP），最大膀胱容量（maximum cystometric capacity，MCC）則為從開始灌注到尿液首次溢出期間所灌注的液體總量。

1.7.2 "Western blot檢測大鼠逼尿肌和IUS中各亞型5-HT受體蛋白含量 "每組隨機選取6只，共18只大鼠處死；取膀胱和尿道組織各一小塊（約250 mg）放入管中，裂解提取組織總蛋白；配制BCA工作液測量蛋白濃度；進行電泳，直至溴酚藍出膠底部；準備好Bio-Rad蛋白轉移裝置夾板，4 ℃過夜轉移；5% BSA溶液中室溫孵育2 h以封閉膜；分別加入5HT1A（1∶1 000稀釋）、5HT2B（1∶1 000稀釋）、5HT7（1∶1 000稀釋）和GAPDH（1∶5 000稀釋），4 ℃過夜；TBST洗膜，5 min×6次；采用TBST稀釋HRP標記的二抗（1∶5 000稀釋），室溫孵育膜1 h；TBST洗膜，5 min×6次；KCTM化學發光試劑盒顯色，以CCD相機曝光、掃描拍攝；并用Image J分析軟件將圖片上每個特異條帶灰度值數字化，并進行比對。

1.8 "統計方法

使用SPSS 22.0進行數據處理。計量資料以“ｘ±s”表示，所有資料均進行正態性和方差齊性檢驗：符合正態分布者采用單因素方差分析；不符合正態分布者采用非參數檢驗。均以Plt;0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 "尿流動力學檢測結果

與空白組相比，模型組大鼠MCC和LPP顯著增大（P＜0.01）。電針組大鼠MCC和LPP較模型組均顯著降低（P＜0.01）；且LPP較空白組差異無統計學意義（P＞0.05），但MCC仍顯著高于空白組（P＜0.01）。詳見表1。

2.2 "逼尿肌和IUS中各亞型5-HT受體蛋白的表達

2.2.1 "5-HT1A蛋白相對表達量比較 "與空白組比較，5-HT1A受體在模型組大鼠逼尿肌中的表達明顯降低（P＜0.01），IUS中表達明顯增高（P＜0.01）；與模型組比較，電針組大鼠逼尿肌中5-HT1A受體顯著增高（P＜0.01），IUS中5-HT1A受體降低（P＜0.05），但仍顯著高于空白組（P＜0.01）。詳見表2、圖1。

2.2.2 "5-HT2B蛋白相對表達量比較 "與空白組比較，5-HT2B受體在模型組大鼠逼尿肌中表達增高（P＜0.05），在IUS中表達降低（P＜0.05）；電針組大鼠逼尿肌中5-HT2B受體低于模型組和空白組（P＜0.05），IUS中5-HT2B受體與其他組比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。詳見表3、圖1。

2.2.3 "5-HT7蛋白相對表達量比較 "與空白組比較，5-HT7受體在模型組大鼠逼尿肌中表達顯著降低（P＜0.01），在IUS中表達顯著增高（P＜0.01）；電針組大鼠逼尿肌中5-HT7受體表達低于模型組（P＜0.05）且顯著低于空白組（P＜0.01），IUS中5-HT7受體表達低于模型組（P＜0.05），較空白組差異無統計學意義（P＞0.05）。詳見表4、圖1。

3 討論

尿液的儲存和定期排泄需要一個復雜的神經控制系統來協調逼尿肌、IUS和EUS的活動。尿液儲存階段，EUS處于強直活動狀態；排尿時，EUS強直活動短暫切換為相位活動（EUS爆發性放電）。EUS爆發活動是嚙齒動物有效排尿的基本特征，其模式發生器位于大鼠L3～L4脊髓節段[14]。若L3～L4以上脊髓節段SSCI，脊髓休克期后大鼠逼尿肌收縮力降低，且DO、IUS協同收縮或松弛伴持續的EUS強直活動；SSCI損傷后3～6周EUS爆發活動再次出現，爆發頻率及活動持續時間影響SSCI后DSD大鼠膀胱排空效率[15]。

三陰交穴為足太陰脾經、足少陰腎經和足厥陰肝經交會穴，從淺到深分布有隱神經、脛神經和腓深神經，其中隱神經起源于L3～L4神經根。CHANG等[16]研究證實，L3節段脊髓硬膜外刺激可抑制強直性EUS活性并引發EUS爆發。次髎穴位于骶尾部第2骶后孔處，八髎穴之一，屬膀胱經，臨近骶部脊髓排尿中樞，其下有骶神經S2～S4走行。REDSHAW等[17]認為，SCI后立即接受骶神經刺激可防止神經源性DO并保持膀胱容量和順應性。中極穴是膀胱的募穴，位于下腹部正中線上。JIANG等[18]研究發現，電刺激導致腹部肌肉收縮引起腹壓突然升高，壓力傳遞到膀胱和近端尿道，改變尿道阻力，但不引起膀胱收縮。本研究發現，模型組大鼠膀胱MCC和LPP均顯著增大（P＜0.01），說明膀胱壓力高、排空效率低、膀胱容量被動增大，符合T8椎體水平脊髓橫斷后DSD的表現。脊髓休克期后立即介入治療，電針組大鼠MCC、LPP明顯低于模型組（P＜0.01），說明電針刺激SSCI后DSD大鼠次髎、中極、三陰交穴可能通過抑制膀胱過度活動、調節尿道阻力、促進EUS爆發活動，提高排尿效率以避免損傷早期膀胱過度膨脹，降低膀胱壓力、保留順應性，從而改善大鼠下尿路功能。

細胞外鈣、細胞內鈣和鈣敏化共同影響平滑肌收縮活動。而膀胱逼尿肌的收縮70%依賴于細胞外鈣，Ca2+通過CaV通道內流使細胞內Ca2+濃度快速增加。Ca2+內流激活的信號級聯通路是導致平滑肌收縮的關鍵[19]。Ca2+通過L型電壓依賴性Ca2+通道進入UBSM細胞，可誘發逼尿肌的相位性收縮。OAB患者的UBSM細胞：Ca2+濃度上升，自發性Ca2+振蕩的幅度也更大[20]。MIRONOVA等[21]證實，5-HT2B受體激動劑可誘導大鼠主動脈平滑肌細胞內Ca2+輕度增高，增強Ca2+信號傳導，引起血管收縮。本研究中，大鼠造模后逼尿肌5-HT2B受體表達增高（Plt;0.05），可能引起平滑肌細胞內Ca2+濃度增加，導致膀胱自發相位性收縮增多，符合SSCI后DSD大鼠OAB的表現。與模型組比較，電針組大鼠逼尿肌5-HT2B受體表達降低（Plt;0.05），表明OAB改善。

尿液儲存階段UBSM電生理活動需維持在靜息狀態，大電導Ca2+激活K+（big-conductance Ca2+-activated K+，BK）通道作為唯一被細胞內Ca2+增加激活的K通道，觸發UBSM動作電位的復極化，介導逼尿肌松弛[22]。5-HT誘導平滑肌松弛的長期效應，5-HT7受體的激活是必須的[23]。5-HT7受體可與Gs蛋白偶聯導致環磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）濃度升高。UBSM細胞內cAMP信號通路的激活，可增加BK通道活性，從而介導逼尿肌松弛[24]。BK通道的總體生理功能是降低膜興奮性，降低肌源性和神經誘發的UBSM收縮，破壞BK通道會誘導大鼠OAB[25]。本研究中，模型組大鼠逼尿肌中5-HT7受體表達顯著低于空白組（Plt;0.01），表明SSCI后大鼠逼尿肌中BK通道活性降低，導致OAB或DO。膀胱部分出口梗阻（partial bladder outlet obstruction，PBOO）使整個膀胱產生代償性功能變化，使UBSM的受力Ca2+敏性和最大縮短速度明顯降低[26]。DSD引起的EUS持續強直活動即為神經源性的部分膀胱出口梗阻。大鼠在PBOO的病理條件下，BK通道活性降低導致UBSM收縮力增加[27]。本研究中，電針組大鼠逼尿肌中5-HT7受體低于模型組（P＜0.05），提示電針治療可降低SSCI后DSD大鼠逼尿肌中5-HT7受體表達及其偶聯的cAMP活性，以抑制BK通道活性，誘導逼尿肌收縮能力增加、排空功能增強。

SSCI后，大鼠出現DO則IUS協同松弛。IUS張力起源于尿道Cajal間質細胞（interstitial cells of Cajal， ICC）產生傳播Ca2+波的能力[28]。研究發現，小鼠尿道平滑肌的張力與電壓無關，而依賴于鈣庫操縱的鈣內流（store-operated Ca2+ entry，SOCE）通道[29]，且阻斷SOCE會終止ICCs的起搏活性[30]。cAMP激活PKA或Epac蛋白會耗盡細胞內鈣儲存，并降低SOCE活性，誘導平滑肌松弛[31]。本研究中，造模后大鼠IUS中5-HT7受體表達顯著增高（Plt;0.01），可激活cAMP途徑，導致IUS張力降低，符合SSCI后DSD大鼠IUS協同松弛的特征。與模型組比較，電針組大鼠IUS中5-HT7受體表達降低（Plt;0.05），提示電針治療可能通過減少cAMP活性導致SOCE激活，增強ICCs的起搏活性，致使IUS受損的張力恢復。

5-HT1A受體已被證明，可通過G蛋白偶聯抑制腺苷酸環化酶（adenylyl cyclase，AC）降低cAMP水平，并激活磷脂酶C（phospholipase C，PLC）。cAMP在β-腎上腺素受體介導的膀胱松弛中發揮作用。毒蕈堿刺激膀胱平滑肌收縮的主要途徑涉及PLC的激活，誘導肌醇-1，4，5-三磷酸（inositol-1，4，5-trisphosphate，IP3）生成導致Ca2+釋放[32]。故5-HT1A受體的激活，有助于誘導逼尿肌的持續收縮及張力維持。本研究中，造模后大鼠5-HT1A受體在逼尿肌表達顯著降低（Plt;0.01），表明SSCI后大鼠逼尿肌收縮力降低、排空能力減弱。此時，IUS應表現為協同收縮。研究證實，激活PLC依賴的Ca2+釋放途徑可提高ICCs的起搏活性[33]。模型組大鼠5-HT1A受體在IUS表達顯著高于空白組（Plt;0.01），表明IUS收縮增強。經電針治療后，5-HT1A受體在逼尿肌表達顯著增高（Plt;0.01），在IUS表達降低（Plt;0.05），說明電針治療可使SSCI后DSD大鼠逼尿肌收縮能力增強、IUS協同松弛，有利于膀胱排空。

電針刺激SSCI后DSD大鼠次髎、中極、三陰交穴，可能通過骶神經、隱神經傳入及腹壓變化的刺激誘導EUS爆發活動，導致膀胱及尿道平滑肌中5-HT受體表達改變，從而抑制膀胱過度活動，增加逼尿肌收縮能力并協調尿道阻力，提高排尿效率以避免損傷早期膀胱過度膨脹，降低膀胱壓力、保留順應性，從而改善大鼠下尿路功能。膀胱中5-HT7受體可能通過激活cAMP途徑以增加BK通道活性，調節UBSM張力以介導逼尿肌松弛；5-HT1A受體則可抑制cAMP并激活PLC釋放Ca2+，從而介導逼尿肌收縮及其張力維持；5-HT2B受體誘導的UBSM內Ca2+濃度增高可能引起逼尿肌相性收縮。尿道中5-HT1A和5-HT7受體可能分別通過激活PLC依賴的Ca2+釋放和激活cAMP降低SOCE通道活性，調節ICCs的起搏活性，介導尿道平滑肌的收縮和松弛。

膀胱張力調節不完全依賴于神經支配，也與膀胱壁機械拉伸特性有關，在特定長度處施加可變張力，而自發的節律性收縮疊加在基礎張力之上。SSCI后DSD大鼠EUS的持續強直活動造成PBOO，開始表現為逼尿肌收縮力增加伴充盈期DO；隨著梗阻持續，出現逼尿肌活動不足伴大量排尿后殘余尿量[34]。UBSM被拉伸首先會施加更大的張力，持續拉伸則張力逐漸降低，拉伸改變了UBSM的膜電位及對收縮刺激的反應。由于5-HT1A和5-HT2B受體可能涉及Ca2+流入，其表達與下尿路平滑肌收縮（相性和/或強直性）正相關。而5-HT7受體可能涉及的BK通道，其激活也與胞質Ca2+信號和去極化膜電位相關。故5-HT7受體對下尿路平滑肌收縮及張力的影響，與平滑肌機械拉伸特性也密切相關。總之，下尿路平滑肌的張力變化是個極其復雜的協調過程，關于5-HT各亞型受體的獨立及聯合調控效應仍有待更深入的研究，闡明其機制。

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