高效液相色譜-四級桿/飛行時間高分辨質譜法檢測保健食品中非法添加藥物

吳竹蓮 蔡甜

作者簡介：吳竹蓮（1988—），女，湖北襄陽人，碩士，實驗師。研究方向：環(huán)境和食品安全檢測。

摘 要：建立高效液相色譜-四級桿/飛行時間高分辨質譜法檢測保健食品中非法添加藥物西布曲明和酚酞的分析方法。通過保留時間對西布曲明和酚酞進行定性分析，通過標準曲線法對保健食品中西布曲明和酚酞進行定量分析。結果表明，2種藥物標準品的溶液濃度與檢測響應具有良好的線性關系，其相關系數(shù)（R2）均大于0.99，該方法簡單、快速、準確，適合用于保健食品中非法添加物的篩查。

關鍵詞：高效液相色譜；四級桿/飛行時間高分辨質譜法；保健食品；非法添加藥物

The detection of Illegally Added Drugs in Health Food Products Using High-Performance Liquid Chromatography-Quadrupole/Time-of-Flight High-Resolution Mass Spectrometry

WU Zhulian， CAI Tian

（School of Chemistry and Chemical Engineering， Southwest University， Chongqing 400715， China）

Abstract： An analytical method for the detection of unlawfully added drugs， sibutramine and phenolphthalein， in health food products was established using high-performance liquid chromatography coupled with quadrupole/time-of-flight high-resolution mass spectrometry. Qualitative analysis of sibutramine and phenolphthalein was conducted based on retention time， while quantitative analysis of these two drugs in health food products was performed using the standard curve method. The results showed that a strong linear correlation was observed between the concentrations of the standard solutions of the two drugs and the corresponding detection response， with correlation coefficients （R?） greater than 0.99. This approach is simple， rapid， and precise， indicating its suitability for the screening of illegally added substances in health food products.

Keywords： high-performance liquid chromatography; quadrupole/time-of-flight high-resolution mass spectrometry; health food products; illegally added drugs

在追求健康與形體美的時代背景下，減肥保健食品逐漸成為消費者日常生活中的重要選擇。然而，部分不法商家為追求短期利益，違法添加西布曲明和酚酞等藥物成分到減肥保健食品中，嚴重侵害了消費者的權益。西布曲明作為中樞神經(jīng)抑制劑，長期攝入可能導致心率異常、血壓波動，甚至引發(fā)嚴重的心腦血管事件，對消費者的生命安全構成極大威脅[1-2]。酚酞常作為瀉藥使用，但長期或過量攝入可能導致電解質紊亂、腸道功能失調，甚至增加患癌風險[3]。因此，對減肥保健食品中的非法添加藥物進行準確、高效檢測至關重要。

傳統(tǒng)的檢測方法，如高效液相色譜法[4-5]和拉曼光譜法[6]，在保健食品非法添加物的檢測中雖有一定應用，但受限于其靈敏度和分辨率，難以滿足對微量復雜成分的精確檢測需求。相比之下，高效液相-高分辨質譜檢測以其高靈敏度、高分辨率和快速分析的特點，在非法添加物檢測領域展現(xiàn)出顯著優(yōu)勢[7-8]。

該方法不僅能夠實現(xiàn)對微量成分的準確檢測，還能夠獲得分析對象的分子量和碎片離子信息，進而實現(xiàn)一次檢測即可同時確證結構，為監(jiān)管部門提供有力的技術支持。本文探討了高效液相色譜-四級桿/飛行時間高分辨質譜法在定性定量分析減肥保健食品中西布曲明和酚酞方面的應用，可為減肥保健品里非法添加藥物的檢測提供參考。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

甲醇（LC-MS純，上海麥克林生化科技有限公司）；乙腈（LC-MS純，阿拉丁試劑有限公司）；甲酸（分析純，F(xiàn)isher Scientific）；氫氧化鈉（電子級純，Sigma-Aldrich）；西布曲明（分析純，壇墨質檢標準物質中心）；酚酞（分析純，阿拉丁試劑有限公司）；異丙醇（LC-MS純，Sigma-Aldrich）；水為超純水。

Agilent 1290 infinity II超高效液相色譜儀；Bruker Impact II四級桿-飛行時間質譜儀，精天FA2004B萬分之一分析天平；KQ5200B超聲波儀。

1.2 實驗條件

（1）液相色譜條件。色譜柱：Agilent Poroshell 120 EC-C18（2.1 mm×100 mm，1.9 μm）；流動相：含0.1%甲酸的水溶液（A）和甲醇（B）；流速：

0.2 mL·min-1；進樣量：2 μL；柱溫：30 ℃。采用梯度洗脫方式，梯度變化如表1所示。

（2）質譜條件。采用電噴霧離子源（ESI），正離子掃描模式；電噴霧電壓：4 500 V；霧化氣壓力：0.24 bar；干燥氣流量：8.0 L·min-1；干燥溫度：220 ℃；掃描范圍（m/z）： 50～1 500。

1.3 標準溶液及校正液配制

（1）標準溶液配制。精確稱取鹽酸西布曲明、酚酞適量，用甲醇溶解并配成1 000 mg·mL-1的儲備液，各取適量儲備液，用甲醇稀釋為50 μg·mL-1的混合溶液。取混合溶液適量，用甲醇逐級稀釋成質量濃度為0.05 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1、0.25 μg·mL-1、

0.50 μg·mL-1、1.00 μg·mL-1和5.00 μg·mL-1的系列標準溶液。

（2）甲酸鈉校正液配制。異丙醇和水按1∶1混合并加入0.2%甲酸作為溶劑。取1 mL 1 mol·L-1 NaOH和99 mL溶劑混勻配制成10 mmol·L-1甲酸鈉校正液。

1.4 實際樣品處理

取適量市售樣品，研細，準確稱取1.000 g粉末，置于50 mL具塞離心管中，加入20 mL甲醇，渦旋1 min，超聲提取10 min，10 000 r·min-1離心

5 min，上清液用0.22 μm微孔濾膜（有機相型）過濾，收集濾液，作為樣品原液。

取1 mL樣品原液到15 mL具塞離心管中，加入9 mL甲醇，渦旋1 min，超聲提取10 min，

10 000 r·min-1離心5 min，上清液用0.22 μm微孔濾膜（有機相型）過濾，收集濾液作為樣品待測液。

2 結果與分析

2.1 西布曲明和酚酞定性分析

按照上述色譜和質譜條件對西布曲明和酚酞標樣（5 μg·mL-1）進行液質聯(lián)合分析，得到總離子流譜圖，實驗數(shù)據(jù)采用Data Analysis 4.4處理。在50～

1 500質荷比范圍內，通過高分辨全譜掃描模式，以精確質量數(shù)提取目標化合物，得到西布曲明和酚酞的保留時間分別為5.1 min和4.7 min（圖1），此為二者定性的依據(jù)。分析二者的質譜圖（圖2和圖3），如表2所示，西布曲明和酚酞的測量分子量與實際分子量偏差較小（≤5×10-6），同位素模式擬合小于50 mSigma[9]，表明該測試方法準確度高，可用于后續(xù)分析測試。

2.2 西布曲明和酚酞定量分析

分析一系列標準樣品的測試結果，以目標物的濃度為橫坐標（x），色譜峰積分面積為縱坐標（y），繪制標準曲線，擬合校正曲線，建立回歸方程，計算相關系數(shù)。實驗結果如表3所示，在濃度為0.05 ～ 5.00 ?g·mL-1時，西布曲明和酚酞均呈現(xiàn)良好線性關系，相關系數(shù)R2大于0.99。

在空白樣品中添加低濃度的西布曲明和酚酞，將信噪比（S/N）為3時的濃度定義為方法的檢出限，信噪比為10所對應的濃度定為方法的定量限。經(jīng)過實驗，得到方法的檢出限和定量限見表3。

2.3 實際樣品檢測

用本方法對實際樣品進行測試分析，按定性分析數(shù)據(jù)處理方法未得到西布曲明和酚酞的信號，即表明該實際樣品為陰性樣品，西布曲明和酚酞含量可忽略不計。

3 結論

本研究建立了基于高效液相色譜-四級桿/飛行時間高分辨質譜儀檢測減肥保健品中西布曲明和酚酞的定性定量分析方法，該方法簡便快速，準確可靠，靈敏度高，并用于實際樣品檢測，未檢出西布曲明和酚酞。

參考文獻

[1]林春芳，孫音，林曉嵐.減肥食品中非法添加西布曲明檢測的研究進展[J].食品工業(yè)，2023，44（4）：260-263.

[2]儲蓉，陳麗波，張斌，等.84批減肥類保健食品中非法添加化學物質的數(shù)據(jù)分析[J].中國現(xiàn)代應用藥學，2020，37（16）：1973-1976.

[3]張宜，張秀娟.濫用瀉藥可致生命危險[J].首都醫(yī)藥，2005（15）：35.

[4]李靜，李倚云，聞琍毓.HPLC法檢測減肥類保健食品中非法添加的酚酞和鹽酸西布曲明[J]天津藥學，2015，27（2）：17-18.

[5]王靜文，黃湘鷺，曹進，等.超高效液相色譜法同時測定減肥類保健食品中非法添加25種藥物[J].色譜，2014，32（2）：151-156.

[6]李想，譚麗麗，劉吉成，等.TLC原位拉曼光譜法快速檢測減肥類保健食品中非法添加的四種成分[J].光譜學與光譜分析，2018，38（3）：830-836.

[7]徐曉楠，葉剛，張楠，等.液相色譜-串聯(lián)質譜法測定減肥降脂通便類保健食品中38種非法添加藥物[J].食品安全質量檢測學報，2020，11（17）：6075-6085.

[8]段瓊，馬春艷，趙振霞，等.飛行時間高分辨質譜法分析紅曲類食品中他汀類物質[J].河北師范大學學報（自然科學版），2024，48（2）：160-166.

[9]HOFFMANN T，KRUG D，BOZKURT N，et al.

Correlating chemical diversity with taxonomic distance for discovery of natural products in myxobacteria[J].Nature Communications，2018（9）：803.