HER2低表達乳腺癌組織中p53基因突變與臨床病理特征的關系

葛玲 陳艷 沈南秀

乳腺癌是由不孕及初次生育年齡晚、雌激素替代治療、月經初潮年齡早等多種因素共同誘發的常見惡性腫瘤，早期多表現為乳頭溢液、乳房無痛性腫塊、乳腺橘皮征，隨病情的發展部分患者可出現腦、肝、骨、胸膜轉移等相關癥狀，最終對患者生命安全構成了威脅，故需早期診治[1]。人表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor 2，HER2）是一種可參與細胞生長、分化調節的重要信號轉導通路，為乳腺癌的驅動基因，HER2低表達乳腺癌因腫瘤不易轉移故預后較佳；目前，已知HER2低表達乳腺癌發生、發展與細胞、遺傳、代謝等存在聯系，隨著檢測技術進步及靶向藥物的應用，HER2低表達乳腺癌檢出率增加，其臨床特點及分子表達逐漸成為學者研究重點，可為未來臨床治療提供借鑒[2]。近年來，癌癥治療因分子生物學研究的進展而逐漸深入，故探討抗癌、促癌相關基因表達情況對乳腺癌臨床診治具有重要意義。p53為臨床常見抑癌基因，其失活或突變為腫瘤發生、發展的重要機制，在多數惡性腫瘤中p53出現基因突變[2-3]。基于此，本研究分析了HER2低表達乳腺癌組織中p53基因突變與臨床病理特征的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年8月—2023年8月廈門市第三醫院收治的112例HER2低表達乳腺癌患者為研究對象。所有患者均在廈門市第三醫院進行手術切除癌組織，并留取乳腺癌癌組織。納入標準：所有患者符合《中國抗癌協會乳腺癌診治指南與規范（2017年版）》[4]中的診斷標準，均經病理學檢查確診，免疫組織化學（immunohistochemistry，IHC）1+或2+且熒光原位雜交技術（fluorescence in situ hybridization technique，FISH）檢測陰性（免疫組織化學染色無染色或≤10%浸潤癌細胞呈微弱、不完整的細胞膜染色為IHC0；＞10%浸潤癌細胞呈微弱、不完整的細胞膜染色為IHC1+；＞10%浸潤癌細胞呈中等強度、完整的細胞膜染色或≤10%的浸潤癌細胞呈完整且強的細胞膜染色為IHC2+；＞10%的浸潤癌細胞呈完整且強的細胞膜染色為IHC3+）。排除標準：合并出血性相關病癥者；合并傳染性疾病者；術前接受過內分泌、放化療治療者；哺乳期女性；合并肝硬化者；合并精神障礙疾病者；乳腺組織存在皮膚性或炎癥性疾病者；合并其他惡性腫瘤者；合并心、肝、腎功能障礙者。患者男性3例，女性109例；年齡36～75歲，平均（56.72±7.42）歲。患者對本研究內容均已知情并簽署知情同意書。本研究經廈門市第三醫院倫理委員會批準。

1.2 p53基因突變檢測

通過銀染聚合酶鏈反應-單鏈構象多肽性分析法（polymerase chain reaction single strand conformation polymorphism，PCR-SSCP）對乳腺癌病理組織標本p53基因突變情況進行檢測，退火溫度：65、67、62、68 ℃，采用包含100 ng DNA模板（癌組織、癌旁組織）、2.5 μL 10×PCR緩沖液、0.6 mmol/L引物濃度、200 mmol/L dNTP混合物、0.75 Uampli Taq Gold的PCR反應體積，94、70 ℃均為1 min，共40個循環，8%～12%擴增物，十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳。250 V 12～15 h，銀染后行SSCP分析，檢測p53基因5，6，7，8外顯子突變情況。

1.3 觀察指標

（1）分析HER2低表達乳腺癌組織中p53基因突變情況。（2）分析p53基因突變與HER2低表達乳腺癌臨床病理特征的相關性。（3）多元線性逐步回歸分析p53基因突變與臨床病理特征的關系。

1.4 統計學處理

采用SPSS 19.0統計學軟件進行數據分析。計量資料以（）表示，組間比較采用獨立樣本均數t檢驗；計數資料以n（%）表示，采用χ2檢驗。采用Pearson相關性分析p53基因突變與HER2低表達乳腺癌臨床病理特征的相關性，采用多元線性逐步回歸分析p53基因突變與臨床病理特征的關系。檢驗水準α＝0.05。

2 結果

2.1 HER2低表達乳腺癌組織中p53基因突變情況分析

HER2低表達乳腺癌組織中p53基因未突變82例，占比為73.21%；p53基因突變30例，占比為26.79%。

2.2 p53基因突變與HER2低表達乳腺癌臨床病理特征的相關性

p53基因突變與HER2低表達乳腺癌腫瘤直徑、淋巴結轉移、脈管侵犯、臨床分期呈正相關（P＜0.05）。見表1。

表1 p53基因突變與HER2低表達乳腺癌臨床病理特征的相關性[例（%）]

2.3 多元線性逐步回歸分析p53基因突變與臨床病理特征的關系

將年齡、BMI、Ki-67指數、ER指數等因素控制后p53基因突變與HER2低表達腫瘤直徑、淋巴結轉移、脈管侵犯、臨床分期相關，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 多元線性逐步回歸分析p53基因突變與臨床病理特征的關系

3 討論

乳腺癌患者以女性人群為主，其發病率呈上升趨勢且趨于年輕化，雖然患者預后因治療水平的提升及治療手段的綜合運用而有所提升，但患者5年生存率仍較低，故尋找乳腺癌的新型治療手段具有關鍵意義[5-7]。乳腺癌發生、發展涉及多個步驟及基因，與腫瘤細胞自身生長優勢、癌細胞對細胞外基質的降解及破壞、細胞間黏附能力降低、淋巴管生成等存在聯系[8-10]。

HER2為乳腺癌發生、發展中重要的基因，HER2是與乳腺癌患者臨床分期、生存期聯系密切的人類表皮生長因子受體家族成員，屬于原癌基因，HER2可通過異源或同源二聚體的形式發生耦聯，使下游絡氨酸酶被激活并發生磷酸化，以此對腫瘤細胞增殖起到調節作用[11-13]。臨床多依照免疫組織化學對乳腺癌組織進行定分型，根據HER2不同表達情況可分為HER2零表達、低表達及過表達3種，其過表達提示乳腺癌患者預后差、易轉移及復發、生存率低，而零表達、低表達均依照HER2陰性進行治療，預后較佳，曲妥珠單抗對癌細胞生長、遷移、繁殖具有抑制作用，不僅治療HER2高表達乳腺癌療效顯著，且對部分HER2低表達患者同樣有較為理想的治療效果，但因相關研究較少，其作用機制尚未完全明確[14-16]。現階段癌癥治療因分子生物學的發展由原先的細胞水平進展至分子水平，對乳腺癌分子水平進行分析具有重要意義，故本研究對HER2低表達乳腺癌組織中p53基因突變低表達情況進行分析，以期為HER2低表達乳腺癌患者的臨床治療提供借鑒。

p53是一種與原癌基因共同在體內發揮調控癌基因表達的抑癌基因，p53對乳腺癌細胞的正常生長、分裂具有維持作用，DNA在細胞經受外來傷害時會發生分裂，p53基因在細胞進行自動修補時可使其終止在G1/S期，從而限制了細胞的無限增殖，若細胞無法自我修復則會出現程序性死亡，導致癌細胞無法持續增殖，最終發揮了抑癌作用[17-19]。正常情況下p53以細胞周期素依賴激酶、細胞周期素、增殖細胞核抗原的形式存在，在組織、細胞中半衰期較短，故表達水平較低，體內癌細胞活化后p53磷酸化并聚集以發揮其生物學作用，故表達水平上升，p53的體細胞突變在乳腺癌中較為常見，與患者轉移、復發等聯系密切[20]。本研究發現，HER2低表達乳腺癌組織中p53基因未突變82例，占比為73.21%；p53基因突變30例，占比為26.79%，提示HER2低表達乳腺癌患者p53基因突變率較低，且p53基因突變與HER2低表達乳腺癌腫瘤直徑、淋巴結轉移、脈管侵犯、臨床分期均相關，表明p53基因突變與乳腺癌患者病情進展密切相關。分析其原因為：當p53基因突變后則無法發揮誘導癌細胞凋亡、調節細胞生長周期的作用，且對廣泛使用的抗癌藥物及電離輻射具有更強的抵抗力，從而造成乳腺癌患者腫瘤直徑、臨床分期增加，淋巴結轉移、脈管侵犯發生風險增大[21]。

綜上所述，本研究發現，HER2低表達乳腺癌組織p53基因突變率較低，且p53基因突變與腫瘤直徑、淋巴結轉移、脈管侵犯、臨床分期相關。但因樣本量過少，且未對其作用機制進行分析，因此還需后續進一步分析p53基因突變參與HER2低表達乳腺癌發生、發展的具體機制，造福于更多的HER2低表達乳腺癌患者。