亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態性對腦卒中合并H型高血壓病人治療效果的影響

張馳 李靜 胡長闊 李敏 張云鵬 竇志杰

摘要 目的： 探討亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）基因C677T位點多樣性對腦卒中合并H型高血壓病人治療效果的影響。 方法： 納入2020年9月—12月承德醫學院附屬醫院收治的120例腦卒中合并H型高血壓病人，所有病人均給予高血壓常規治療及腦卒中二級預防治療，在此基礎上給予葉酸、維生素B 6和甲鈷胺片聯合治療。比較不同MTHFR C677T位點基因型病人臨床特征、治療后血清同型半胱氨酸（Hcy）水平變化及療效，分析MTHFR C677T位點T等位基因對病人的影響。 結果： 120例病人中MTHFR C677T位點CC、CT及TT基因型病人分別為27例（22.50%）、56例（46.67%）和37例（30.83%），TT基因型病人入院時美國國立衛生院卒中量表（NIHSS）評分、大腦中動脈（MCA）狹窄占比均高于CC基因型和CT基因型（ P ＜0.05）。治療3個月后，不同MTHFR C677T位點基因型病人血清Hcy水平均較治療前降低，TT基因型病人Hcy水平下降程度低于CC基因型和CT基因型（ P ＜0.05）。TT基因型病人腦卒中治療總有效率為72.97%，低于CC基因型病人的92.59%（ P ＜0.05）。攜帶MTHFR C677T位點T等位基因與血清Hcy水平升高密切相關（ P ＜0.05）。 結論： MTHFR基因C677T位點多態性與腦卒中合并H型高血壓病人血清Hcy水平密切相關，可對腦卒中癥狀的改善和MCA狹窄造成影響。

關鍵詞 ?腦卒中；H型高血壓；亞甲基四氫葉酸還原酶；基因多態性；C677T位點；同型半胱氨酸

doi： ?10.12102/j.issn.1672.1349.2024.09.026

腦卒中可由顱內外動脈閉塞引發，而亞洲人腦卒中多由顱內動脈閉塞造成，其中大腦中動脈（middle cerebral artery，MCA）是供血范圍最廣泛的顱內動脈。研究表明，MCA閉塞導致的腦卒中多預后不良、復發風險高 ?［1］ 。亞甲基四氫葉酸還原酶（methylene tetrahydrofolate reductase，MTHFR）是在機體葉酸代謝中發揮重要作用的蛋白酶，MTHFR C677T位點基因型是影響機體葉酸代謝的重要因素 ?［2］ ，而葉酸、B族維生素等攝入不足導致的同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）代謝障礙是引起Hcy水平升高的主要原因 ?［3］ 。H型高血壓是指伴Hcy水平升高的原發性高血壓，Hcy升高是多種心腦血管疾病的獨立危險因素 ?［4.5］ 。本研究旨在探究MTHFR C677T位點基因多樣性對腦卒中合并H型高血壓病人治療效果的影響，并分析其與MCA狹窄的關系，以期為腦卒中合并H型高血壓病人的預防和個體化治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2020年9月—12月承德醫學院附屬醫院收治的120例腦卒中合并H型高血壓病人，其中男72例，女48例；吸煙31例；年齡58～76（67.73±5.50）歲。本研究獲得承德醫學院附屬醫院倫理委員會批準（倫理審批號LL2021094）。所有受試者均被告知研究內容、注意事項，并自愿簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標準

納入標準：收縮壓（systolic blood pressure，SBP）≥ 140 mmHg和（或）舒張壓（diastolic blood pressure，DBP）≥90 mmHg，且血清Hcy水平≥10 μmol/L；符合缺血性腦卒中的相關診斷標準 ?［6］ ；發病時間＜6 h。排除標準：合并嚴重肝腎功能不全、惡性腫瘤及感染性疾病者；合并冠心病、心房顫動、心肌炎、風濕性心臟病等心臟疾病者；對本研究使用藥物存在禁忌證者。

1.3 治療方法

病人入院后給予常規治療，符合溶栓適應證者給予靜脈溶栓治療，經顱多普勒超聲提示顱內動脈狹窄，并經血管造影明確狹窄程度＞70%的輕微神經癥狀病人和狹窄程度＞50%的明顯神經癥狀病人給予血管內介入治療。溶栓24 h內均給予常規調整血壓、血脂等治療，24 h后給予腦卒中二級預防治療，包括飲食運動指導及β受體阻滯劑、血管緊張素轉換酶抑制劑（ACEI）、血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑（ARB）、他汀類藥物、抗血小板凝集藥物等治療。在此基礎上給予葉酸片（遼寧格林生物藥業集團，國藥準字H2102104）每次0.8 mg，每日1次，口服；維生素B 6片（臨汾寶珠制藥有限公司，國藥準字H14021472），每次10 mg，每日1次，口服；甲鈷胺片（華北制藥股份有限公司，國藥準字：H20031126），每次0.5 mg，每日3次，口服，持續治療3個月。

1.4 MTHFR C677T位點基因多態性檢測

采集所有病人清晨靜脈血4 mL，采用Solarbio D1800.50全血基因組DNA提取試劑盒提取DNA。采用ABI 7700聚合酶鏈式反應（PCR）儀進行擴增阻礙突變系統PCR，擴增條件為94 ℃預變性10 min，之后以94 ℃ 45 s、62 ℃ 40 s、72 ℃ 45 s循環39次。擴增完成后加入Hinf Ⅰ內切酶，37 ℃水浴2 h，進行瓊脂糖凝膠電泳，加入溴乙啶急性染色，根據DNA條帶長度判斷基因型。

1.5 血清指標檢測

所有病人均于治療前及治療后3個月采集空腹靜脈血4 mL，采用酶聯免疫吸附法檢測血清Hcy水平，檢測試劑盒購于北京九強生物技術有限公司，檢測儀器為DG 022A型酶聯免疫檢測儀。采用Beckman AU5800自動生化分析儀檢測空腹血糖（fasting blood glucose，FBG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triglycerides，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL.C）及高密度脂蛋白膽固醇（high density ?lipoprotein cholesterol，HDL.C） 水平。

1.6 MCA狹窄評判標準

所有病人均于入院后行經顱多普勒超聲檢查，大腦MCA平均流速＞90 cm/s，且與對側MCA相比平均流速升高30%以上為MCA狹窄 ?［7］ 。

1.7 療效評價標準

高血壓療效評價標準 ?［8］ ：SBP下降≥20 mmHg或DBP下降≥10 mmHg，且SBP和DBP均恢復正常為顯效；SBP下降≥30 mmHg，SBP下降10～＜20 mmHg且恢復正常，或DBP下降0～＜10 mmHg且恢復正常均為有效；未達到上述標準則為無效。腦卒中療效評價標準 ?［9］ ：治療后美國國立衛生院卒中量表（NIHSS）減少＞50%，頭暈、運動障礙和語言功能障礙等癥狀明顯改善為顯效；NIHSS分數減少15%～50%，癥狀有所好轉為有效；未達上述標準為無效?？傆行剩剑郏@效例數＋有效例數）/總例數］×100%。

1.8 統計學處理

采用SPSS 22.0軟件進行數據分析。符合正態分布的定量資料以均數±標準差（ x ?± s ）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用 t 檢驗。定性資料以例數或百分比（%）表示，采用 χ ?2檢驗。采用Logistic回歸模型分析MTHFR C677T位點T等位基因與病人臨床特征的關系（因變量賦值方式：CC基因 型＝1；CT基因型＋TT基因型＝2）。雙尾檢驗，以 ?P ＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 MTHFR C677T位點等位基因分布情況

120例腦卒中合并H型高血壓病人中，MTHFR ?C677T位點CC、CT及TT基因型分別為27例（22.50%）、 56例（46.67%）和37例（30.83%），各基因型分布符合Hardy.Weinberg平衡（ P ＝0.805），具有群體代表性。不同MTHFR C677T基因型病人間年齡、性別、血糖、血脂、血壓及治療藥物等臨床資料比較，差異均無統計學意義（ P ＞0.05），TT基因型病人入院NIHSS評分和MCA狹窄病人占比均顯著高于CC基因型和CT基因型病人（ P ＜0.05）。詳見表1。

2.2 不同MTHFR C677T基因型病人治療前后血清Hcy水平比較

治療前后不同MTHFR C677T基因型病人血清Hcy水平比較，差異有統計學意義（ P ＜0.05）；治療3個月后，不同MTHFR C677T基因型病人的血清Hcy水平均較治療前減低，且TT基因型Hcy水平下降程度低于CC基因型和CT基因型，差異均有統計學意義（ P ＜0.05）。詳見表2。

2.3 不同MTHFR C677T基因型病人療效比較

不同MTHFR C677T基因型病人腦卒中療效比較，差異有統計學意義（ P ＜0.05），TT基因型病人腦卒中治療總有效率為72.97%，顯著低于CC基因型病人的92.59%（ P ＜0.05）。詳見表3。

2.4 MTHFR C677T位點T等位基因與病人臨床特征的關系

Logistic回歸分析顯示，攜帶MTHFR位點T等位基因與Hcy水平升高密切相關（ P ＜0.05）。詳見表4。

3 討 論

高血壓是全球常見疾病，具有較高的發病率，并可導致心腦血管疾病、高血壓腎病等一系列疾病，嚴重影響病人的生命健康。近年來，隨著我國分子生物學領域的發展、基因測序等技術普及為高血壓的個體化治療提供了新的思路和依據 ?［10］ 。MTHFR是催化機體葉酸代謝及Hcy代謝的關鍵酶之一，研究表明，MTHFR C677T位點基因突變是MTHFR酶最常見的不耐熱基因突變位點，MTHFR C677T位點TT基因型及CT基因型的酶活性明顯低于CC基因型 ?［11］ 。本研究檢測了120例病人MTHFR C677T位點基因型，結果顯示CC、CT及TT基因型的例數分別占22.50%、46.67%和30.83%，與以往報道相近 ?［12.13］ 。

本研究結果顯示，不同MTHFR C677T基因型病人血清Hcy水平存在明顯差異，MTHFR C677T位點TT基因型病人治療前后血清Hcy水平均高于CC及CT基因型病人，且CC及CT基因型病人治療3個月后Hcy水平均顯著下調，而TT基因型病人治療3個月后Hcy水平下降程度低于CC及CT基因型病人，表明TT基因型病人應用葉酸、維生素B 6和甲鈷胺片聯合治療降低Hcy的效果差于CC及CT基因型病人。分析其原因在于，血清Hcy水平升高是葉酸攝入不足及葉酸代謝活性下調等多種因素綜合作用的結果。MTHFR酶可催化5，10.亞甲基四氫葉酸轉化為具有生物活性的5.甲基四氫葉酸，而5.甲基四氫葉酸可作為甲基供體向Hcy轉移甲基生成甲硫氨酸，進而完成機體Hcy代謝過程 ?［14.15］ 。MTHFR C677T位點TT突變型的酶活性低于CC及CT基因型，故TT基因型病人補充外源性葉酸的降低Hcy效果差于CC及CT基因型病人 ?［16.17］ 。

本研究還比較了不同MTHFR C677T基因型病人的臨床特征及葉酸聯合維生素B 6、甲鈷胺輔助降壓、改善腦卒中癥狀的效果，結果顯示，TT基因型病人入院NIHSS評分、MCA狹窄占比均顯著高于CC基因型和CT基因型病人，腦卒中治療總有效率顯著低于CC基因型病人。究其原因是：TT基因型病人由于MTHFR酶活性下調，Hcy水平顯著高于CC及CT基因型。既往研究表明，高水平Hcy與神經功能缺損程度密切相關，而NIHSS評分是評價神經功能的評分系統，故TT基因型病人入院NIHSS評分高于CC及CT基因型病人 ?［18.19］ 。TT基因型病人應用外源葉酸的降低Hcy效果較差，治療后Hcy水平仍顯著高于CC及CT基因型病人，動脈斑塊形成的風險更高，故治療后TT基因型病人的腦卒中癥狀改善效果差于CC及CT基因型病人 ?［20］ 。本研究Logistic回歸分析結果顯示，攜帶MTHFR C677T位點T等位基因與Hcy水平的密切相關，而入院NIHSS評分與MCA狹窄均被篩除。結果表明，攜帶MTHFR C677T位點T等位基因是高Hcy水平的獨立危險因素，攜帶MTHFR C677T位點T等位基因的腦卒中病人Hcy水平高于未攜帶病人，由于Hcy是心血管不良事件的高危因素，故其神經功能缺損、MCA狹窄風險高于未攜帶病人。

綜上所述，在臨床治療中，對于攜帶MTHFR C677T位點T等位基因的病人應密切關注其血清Hcy水平，預防MCA狹窄的發生。

MTHFR C677T基因多態性與腦卒中合并H型高血壓病人的Hcy水平密切相關，攜帶T等位基因是高Hcy水平的危險因素，而高Hcy水平可對腦卒中治療效果造成影響，并增加MCA狹窄的風險。

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（收稿日期：2022.07.13）

（本文編輯 鄒麗）