基于數據挖掘和網絡藥理學探析中醫內治法治療燒傷的用藥規律及其作用機制

[摘要]"目的"基于數據挖掘和網絡藥理學探討中醫內治法治療燒傷的用藥規律及其作用機制。方法"檢索中國知網、萬方數據知識服務平臺、維普和中華醫學期刊全文數據庫中醫內治法治療燒傷的相關文獻，檢索時間為數據庫建庫至2024年8月1日。通過Excel軟件統計中藥使用頻次并分析中藥性味；利用SPSS"Modeler"18.0軟件構建中藥關聯網絡并計算中藥間的關聯強度；利用SPSS"24.0軟件對高頻藥物進行聚類分析；利用中藥頻次和關聯網絡拓撲值并根據中藥作用篩選核心中藥。運用中藥系統藥理學數據庫和分析平臺（traditional"Chinese"medicine"systems"pharmacology"database"and"analysis"platform，TCMSP）、HERB數據庫獲取核心中藥的有效成分及其相關靶點；利用GeneCards和DrugBank數據庫獲取燒傷靶點，并篩選交集靶點。利用Cytoscape"3.9.1軟件構建并分析中藥-成分-靶點網絡及蛋白質-蛋白質相互作用網絡，通過網絡拓撲值確定核心成分與核心靶點。利用R對交集靶點進行富集分析。結果"最終納入文獻108篇，處方64首，涉及中藥121種。治療燒傷中藥的藥性以寒、溫為主，藥味以甘、苦為主。核心中藥為黃芪、地黃、黃芩、金銀花；核心成分為槲皮素、木犀草素、山柰酚、漢黃芩素、地萜薇酮B；核心靶點為白細胞介素-6、腫瘤壞死因子、絲氨酸/蘇氨酸激酶1、白細胞介素-1β、前列腺素內過氧化物合酶2；作用機制涉及調控血脂、高級糖基化終末產物-受體、白細胞介素-17、腫瘤壞死因子等信號通路；分子對接分析結果提示，其核心成分與核心靶點結合緊密。結論"中藥內治法治療燒傷多采用寒溫并用、補泄兼施的遣方思路，核心中藥可通過多成分、多靶點、多通路發揮作用。

[關鍵詞]"燒傷；中醫內治法；數據挖掘；網絡藥理學；分子對接

[中圖分類號]"R264""""""[文獻標識碼]"A""""[DOI]"10.3969/j.issn.1673-9701.2024.36.015

Analysis"of"medication"patterns"and"mechanisms"of"action"for"traditional"Chinese"medicine"internal"treatment"methods"for"burns"based"on"data"mining"and"network"pharmacology

DAI"Hesen，"LIN"Min，"CHEN"Feng，"CHEN"Fengjuan

Department"of"ICU，"Jiaxing"Hospital"of"Traditional"Chinese"Medicine，"Jiaxing"314001，"Zhejiang，"China

[Abstract]"Objective"To"explore"the"medication"rules"and"mechanisms"of"traditional"Chinese"medicine"（TCM）"internal"treatment"methods"for"burns"based"on"data"mining"and"network"pharmacology."Methods"To"retrieve"relevant"literatures"on"the"treatment"of"burns"using"TCM"internal"treatment"methods"from"China"National"Knowledge"Infrastructure，"Wanfang"Data"Knowledge"Service"Platform，"VIP"and"Yiigle."The"retrieval"time"was"from"the"establishments"of"the"databased"to"1"August"2024."Excel"was"used"to"calculate"the"frequencies"of"traditional"Chinese"medicine"usage"and"analyze"their"properties."SPSS"Modeler"18.0"software"was"employed"to"construct"a"network"of"herbal"associations"and"calculated"the"strengths"of"associations"between"traditional"Chinese"medicines."High-frequency"drugs"were"analyzed"using"data"clustering"in"SPSS"24.0"software."Core"herbs"were"selected"based"on"herbal"frequencies"and"network"topology"values."The"effective"components"and"related"targets"of"core"herbs"were"obtained"from"traditional"Chinese"medicine"systems"pharmacology"database"and"analysis"platform"（TCMSP）"and"HERB"database."Burn"targets"were"identified"using"GeneCards"and"DrugBank"databases，"and"overlapping"targets"were"screened."Cytoscape"3.9.1"software"was"used"to"construct"and"analyze"the"network"of"herbs-components-targets"and"protein-protein"interaction"networks，"with"core"components"and"targets"were"identified"through"network"topology"values."R"was"utilized"for"enrichment"analyses"of"overlapping"targets."Results"A"total"of"108"articles"were"included，"yielding"64"prescriptions"and"involving"121"herbal"medicines."The"properties"of"the"medicines"used"for"treating"burns"were"primarily"cold"and"warm，"with"flavors"were"mainly"sweet"and"bitter."The"core"herbs"were"milkvetch"root，"dihuang，"baical"skullcap"root，"and"Flos"Lonicerae."Core"components"were"quercetin，"luteolin，"kaempferol，"baicalin，"and"Diincarvilone"B."Core"targets"included"interleukin"（IL）-6，"tumor"necrosis"factor，"serine/threonine"kinase"1，"IL-1β，"prostaglandin"endoperoxide"synthase"2."Signaling"pathways"involved"regulating"blood"lipids，"advanced"glycation"end"product-receptor"of"advanced"glycation"end，"IL-17，"and"tumor"necrosis"factor，"etc."Molecular"docking"results"suggested"there"was"a"strong"binding"between"core"components"and"core"targets."Conclusion"The"internal"treatment"of"burns"with"TCM"reflects"a"strategy"of"combining"cold"and"warm"properties"and"balancing"supplementation"and"drainage."Core"herbs"may"exert"therapeutic"effects"through"multiple"components，"multiple"targets，"and"multiple"pathways.

[Key"words]"Burn;"Traditional"Chinese"medicine"internal"treatment;"Data"mining;"Network"pharmacology;"Molecular"docking

燒傷是指機體接觸致傷理化因素而造成以皮膚、黏膜甚至皮下組織損傷為表現的一種外傷性疾病[1-2]。當前燒傷的發病率及病死率較之前下降，但仍給患者家屬及全球醫療保健系統帶來沉重負擔[3-4]。傳統醫學將燒傷稱為“火燒傷”“湯火傷”“火燒瘡”“湯燙瘡”等，中醫內治法在燒傷的治療中應用廣泛。本研究采用數據挖掘方法探討中醫內治法治療燒傷的用藥特點及組方規律，利用網絡藥理學對核心中藥的成分靶點進行篩選，探究其在治療燒傷中可能的作用機制、作用靶點和作用通路，證明內治法治療燒傷的合理性及科學性，并為后續研究提供基礎。

1""資料與方法

1.1""資料來源

以“燒傷”“中醫”“中醫藥”“中藥”“中西醫”為主題詞在中國知網、萬方數據知識服務平臺、維普和中華醫學期刊全文數據庫中進行檢索，檢索時間為數據庫建庫至2024年8月1日。

1.2""文獻納入標準

①患者被確診為燒傷的文獻；②中醫內治法參與治療過程；③統計學表明中醫內治法在燒傷治療中有效；④藥物劑型和用量不限，但需通過口服或鼻飼給藥。

1.3""文獻排除標準

①名醫經驗、個案報道、動物實驗、體外細胞實驗、綜述等類型的文獻；②方劑重復的文獻；③治療無效或療效不明確的文獻；④重復方藥、方藥不全、中藥外治法治療、非藥物療法、針刺療法。

1.4nbsp;"文獻整理與數據規范

收集文獻經去重后采取雙人雙錄入方法，剔除重復方劑。參照《中華人民共和國藥典》[5]、《中華本草》[6]對方劑中的中藥名稱進行統一和規范。如“玄胡”統一為“延胡索”；“生地黃”“生地”“干地黃”統一為“地黃”等，同時收集所有中藥的性味。

1.5""數據錄入與分析

應用Excel"2021軟件對所收集處方進行中藥使用頻次統計和性味分析。利用SPSS"Modeler"18.0軟件構建中藥關聯網絡并計算關聯強度，將網絡參數導入Cytoscape"3.9.1軟件分析網絡拓撲結構并對其可視化呈現。采用SPSS"24.0軟件對高頻藥物進行聚類分析，得出核心藥物聚類譜系圖。根據藥物頻次及網絡拓撲強度，結合中藥在各方劑中的實際作用，篩選出核心中藥。

1.6""網絡藥理學分析

1.6.1""藥物有效成分及靶點獲取""在中藥系統藥理學數據庫和分析平臺（traditional"Chinese"medicine"systems"pharmacology"database"and"analysis"platform，TCMSP）、HERB數據庫中查找核心中藥化學成分及靶點信息，根據口服生物利用度≥30%、藥物相似性≥0.18對成分進行篩選[7-8]；并根據已發表文獻報道補充可能存在作用的成分。利用Swiss"Target"Prediction平臺對TCMSP中未收錄的成分靶點進行補充。通過UniProt數據庫將所得活性成分的蛋白靶點轉化為統一基因名。

1.6.2""燒傷靶點獲取及交集靶點篩選""以“burn”為檢索詞于GeneCards、DrugBank數據庫檢索并獲取“燒傷”相關靶點。將所有疾病靶點合并并去重后，與藥物成分靶點輸入Venny2.1網站獲取藥物-疾病交集基因，作為中藥治療燒傷的相關靶點。

1.6.3""中藥-成分-靶點網絡圖構建及核心成分篩選""將篩選中藥、化合物及共同靶點提交至Cytoscape"3.9.1軟件，構建中藥-成分-靶點網絡。利用Cytoscape"3.9.1中的分析工具“Network"analyzer”，對網絡拓撲屬性進行分析，預測核心中藥的主要活性成分。

1.6.4""蛋白質-蛋白質相互作用（protein-protein"interaction，PPI）網絡構建及核心基因篩選""將交集基因輸入String平臺，物種選擇“Homo"sapiens”，設置最低相互作用得分gt;0.4，獲取PPI網絡圖及網絡tsv文件，將tsv文件導入Cytoscape"3.9.1軟件中并進行拓撲學分析，通過介度、緊密度和度值篩選出核心靶點。

1.6.5""通路分析""將核心靶點導入R語言，進行基因本體論（gene"ontology，GO）和京都基因與基因組百科全書（Kyoto"Encyclopedia"of"Genes"and"Genomes，KEGG）富集分析。以Plt;0.05作為篩選標準，將GO和KEGG分析結果繪制氣泡圖。

1.6.6""分子對接""通過TCMSP檢索核心活性成分mol2格式文件作為受體；通過PDB數據庫獲取關鍵靶點，將其pdb文件作為配體。使用Autodock"1.5.6軟件計算受體與配體結合能，使用Pymol對配體和受體結合進行可視化分析。

2""結果

2.1""中藥使用頻次及性味歸經統計

共檢索到文獻1543篇，經納入和排除標準篩選后，最終納入文獻108篇。篩選出中藥方劑64首，涉及中藥121味。其中使用頻次較高的中藥為甘草、黃芪、地黃、黃芩、金銀花、當歸等，見表1。藥性多以寒為主，藥味以苦、甘為主，見表2和表3。

2.2""關聯分析與可視化呈現

將中藥使用數據導入SPSS"Modeler"18.0“源→類型→網絡”中構建Web網絡，網絡參數導入Cytoscape"3.9.1軟件分析其網絡拓撲結構，以節點度的度值為篩選條件，篩選出Nodes為20、Edges為178的關聯網絡圖，見圖1。圖中藥物節點大小及顏色與度值呈正相關，節點越大、顏色越深表示度值越高；線段粗細及顏色表示關聯強度，線段越粗、顏色越深表示關聯強度越高。其中，甘草、地黃、當歸、黃芩、黃芪、金銀花的節點度值較高，且相互間的關聯強度較大。運用SPSS"Modeler"18.0建立“源→類型→Apriori算法”數據流，當最小支持度設置為10.00%、最小置信度設置為80.00%、最大前項數設置為2時，獲得關聯規則共63條，其中支持度較高的有甘草-茯苓，甘草-黃芩、地黃，甘草-連翹，黃芪-麥冬。

2.3""藥物聚類分析

利用SPSS"24.0軟件對使用頻次gt;10的中藥進行聚類分析，采用組間鏈接，測量選擇二元杰卡德，獲得中藥聚類譜系圖。根據譜系圖結果并結合中醫基礎理論知識，將功效相同或相近的藥物聚為同一類，結果可分為4類：C1（清熱解毒）：黃柏、黃連、梔子、黃芩、金銀花、連翹；C2（益氣滋陰）：茯苓、白術、甘草、地黃、黃芪、麥冬；C3（補血活血）：當歸、川芎、紅花；C4（清熱涼營）：大黃、丹參、牡丹皮、石膏，見圖2。

2.4""網絡藥理學結果

2.4.1""核心中藥有效活性成分及靶點篩選結果""雖然甘草的使用頻次及度值較高，但其在中藥處方中常起調和諸藥的作用，故選取核心中藥為黃芪、地黃、黃芩、金銀花。經TCMSP、HERB數據庫查找及文獻補充，合并去重后共獲得92種有效成分，涉及靶點426個。其中，黃芪成分20種，靶點206個；地黃成分17種，靶點254個；黃芩成分36種，靶點121個；金銀花成分23種，靶點209個。

2.4.2""中藥與燒傷靶點共建結果""在GeneCards數據庫中共獲得3357個燒傷靶點，以相關性評分gt;4倍中位數作為篩選條件，篩選出靶點247個。在DrugBank數據庫中共獲得87個燒傷靶點，經合并去重后，共獲得304個靶點。將426個藥物靶點和304個疾病靶點導入Venny2.1中，獲得中藥-疾病靶點韋恩圖，二者共75個交集靶點，這些靶點即為核心中藥治療燒傷的潛在治療靶點，見圖3。

2.4.3""中藥-成分-靶點網絡構建""利用Cytoscape"3.9.1軟件構建中藥-成分-靶點網絡，可得到一張Nodes為144、Edges為478的網絡，見圖4。其中，中藥成分共65種。通過網絡拓撲屬性分析，中藥成分網絡度值較高的成分包括槲皮素、木犀草素、山柰酚、漢黃芩素、地萜薇酮B、β-胡蘿卜素、黃芩素、芒柄花黃素、千層紙素A、β-谷甾醇，這些成分與燒傷的交集靶點較多，可能為治療燒傷的關鍵成分，見表5。

2.4.4""PPI網絡""將共同靶點錄入String數據庫，獲取PPI網絡圖數據，將數據導入Cytoscape"3.9.1，經拓撲分析后，連續卡取介度、緊密度和度值中位數，獲得Notes為12、Edges為66的網絡，見圖5。在該PPI網絡中，白細胞介素（interleukin，IL）-6、腫瘤壞死因子（tumor"necrosis"factor，TNF）、絲氨酸/蘇氨酸激酶（serine/threonine"kinase"，AKT）1、IL-1β、前列腺素內過氧化物合酶2（prostaglandin"endoperoxide"synthase"2，PTGS2）等拓撲屬性較高，可能為核心中藥治療燒傷的關鍵靶點。

2.4.5""GO、KEGG富集分析結果""通過R對75個交集靶點進行富集分析。GO富集分析結果表明，處方的核心化學成分主要參與對外源性刺激反應、調節平滑肌細胞增殖、肌細胞增殖等；主要作用位置為膜筏、膜微區、含有膠原蛋白的細胞外基質等；可能影響細胞因子受體結合、細胞因子活性、血紅素結合等，見圖6。KEGG分析結果表明，主要通路有血脂與動脈粥樣硬化、晚期糖基化終末產物（advanced"glycation"end"product，AGE）-AGE受體（receptor"of"AGE，RAGE）、IL-17、TNF等，見圖7。

2.4.6""分子對接結果""選取核心中藥治療燒傷度值前5位中藥成分與PPI網絡度值前4的靶點進行對接，分子對接靶點為：TNF（PDB"ID：2e7a）、IL-6（PDB"ID：1alu）、AKT1（PDB"ID：1unq）、IL-1β（PDB"ID：8rys），對接結果見圖8。應用PyMOL軟件以地萜薇酮B為例對成分與靶點對接結果進行可視化展示，見圖9。

3""討論

本研究通過對64首方劑的121味中藥進行分析發現，治療燒傷常用的中藥有甘草、黃芪、地黃、黃芩、金銀花、當歸等。在中藥關聯網絡中，甘草、地黃、黃芪、金銀花、黃芩度值及相互之間關聯強度較高，提示這些中藥不僅使用頻次高，還常常配伍使用，可能為治療燒傷的核心中藥。燒傷發病迅猛，“邪實”與“正虛”往往同時并見。因此常加以甘草調和諸藥，且其出現頻次較高并與各類中藥均有關聯，也符合作為“調和藥”的特點。故本研究選取黃芪、地黃、黃芩、金銀花作為核心中藥，探討中藥治療燒傷的作用機制。其中，黃芪作為補氣要藥，具有補氣固表、托毒排膿、斂瘡生肌之功。李莉[9]研究表明，對深Ⅱ度燒傷大鼠注射黃芪多糖可促進其創面愈合。地黃為清熱涼血之要藥，同時滋陰生津，尤宜治療嚴重燒傷患者[10]。現代藥理學研究表明，地黃中多種成分具有保護心肌細胞、抗炎、抗過敏、提高免疫力、改善腎功能等作用[11]。黃芩苦寒，有清熱燥濕、瀉火解毒之功。徐俊濤等[12]研究發現，黃芩素可通過抑制核因子κB信號通路抑制組織中的炎癥反應和細胞凋亡，緩解熱刺激對小鼠皮膚成纖維細胞的損傷，促進燒傷小鼠創面愈合。

通過對燒傷治療藥物性味進行分析，藥性以寒為主，其次為溫平，藥味以苦、甘為主。因燒傷為“火毒”侵襲所致，故用苦寒藥以清瀉火毒、瀉火存陰。火毒之邪，一方面損傷皮毛，致正氣耗傷、津液外泄；另一方面蒸騰于內，消爍津液，津液虛少無以化氣，使人體津傷氣耗。因此，以甘溫平藥物益氣生津，同時和中補虛，顧護胃氣。

燒傷常見證型主要為火盛傷陰證、火毒熾盛證、火毒內攻證、陰損及陽證、氣血兩虛證、陰傷胃敗證六類[13]。本研究聚類分析結果表明，在燒傷內治法中常用中藥可分為清熱解毒、益氣滋陰、補血活血、清熱涼營五類，根據不同證型選擇不同類別進行治療，燒傷早期以火盛傷陰證、火毒熾盛證為主，可選擇清熱解毒、益氣滋陰類藥物治療；疾病進展為火毒內攻證，則可使用清熱涼營類藥物治療；疾病后期出現陰損及陽證、氣血兩虛證、陰傷胃敗證時則可使用益氣滋陰、補血活血類藥物治療。

通過對中藥-成分-靶點網絡進行拓撲分析結果表明，度值較高的中藥成分有槲皮素、木犀草素、山柰酚、漢黃芩素等，提示這些成分可能在治療燒傷中發揮關鍵作用。研究表明槲皮素具有多種生物活性作用[14]。Mi等[15]研究表明槲皮素可通過增強成纖維細胞的增殖和遷移有效促進皮膚傷口愈合。Wang等[16]通過動物實驗發現腹膜內注射木犀草素可通過IL-1β信號通路改善大鼠堿燒傷引起的角膜混濁、角膜上皮缺損、膠原蛋白降解、新血管形成和炎癥細胞浸潤。山柰酚存在于許多常見的植物中，具有抗氧化、抗炎和心臟保護作用[17]。Park等[18]研究發現山柰酚可降低燒傷誘導TNF-α的表達，緩解小鼠燒傷誘導的真皮炎細胞浸潤和表皮增厚，發揮治療燒傷皮損的作用。漢黃芩素是一種天然的多酚類物質，具有抗病毒、抗感染、抗炎、神經保護等作用，存在治療各類炎性疾病的可能[19]。

PPI網絡分析顯示IL-6、TNF、AKT1、IL-1β、PTGS2拓撲屬性較高。其中IL-6、TNF、IL-1β是一類經典的促炎因子，可能與燒傷后炎癥反應、疼痛、能量代謝、臟器功能、血流動力學等方面相關。Barayan[20]研究表明利用IL-6阻斷劑可抑制燒傷小鼠關鍵免疫代謝器官的病理改變，使得小鼠全身代謝亢進獲得顯著改善，表明IL-6阻斷劑在燒傷中存在治療潛力。燒傷后TNF的過表達可導致炎癥風暴的發生，大量炎癥因子作用下患者常出現急性腎損傷、急性呼吸窘迫綜合征、心臟收縮功能障礙等嚴重并發癥[21]。AKT1在胰島素的代謝作用中起核心作用，是調節骨骼肌代謝的關鍵因子，燒傷會下調胰島素對AKT/蛋白激酶B的刺激，造成代謝紊亂和肌肉萎縮[22]。PTGS2可通過催化花生四烯酸轉化為前列腺素H2，進而參與炎癥反應、疼痛感知、發熱以及血小板聚集等多種生物過程，通過抑制PTGS2減少過度炎癥、疼痛和發熱等反應，同時還可減少致命血栓事件的發生[23]。

通過對交集靶點進行富集分析，推測中藥主要通過血脂與動脈粥樣硬化、AGE-RAGE、IL-17、TNF等信號通路發揮作用。脂肪組織是嚴重燒傷誘導的代謝亢進中心調節因子之一，燒傷后的脂肪三酰甘油脂肪酶顯著表達升高，促進儲存脂肪溶解釋放，降低創傷后血糖水平并增加胰島素敏感度[24-25]。燒傷應激下高血糖環境可使AGE異常增加，AEG可通過與RAGE結合激活多種信號通路，從而導致炎癥反應、氧化應激、血管內皮細胞功能異常、細胞凋亡等不良影響[26]。IL-17、TNF信號通路在宿主免疫中起關鍵作用，在燒傷早期需抑制IL-17、TNF信號通路，減少炎癥因子產生，減輕炎癥風暴造成的臟器損傷，而在病程后期需該通路適度表達，以促進創面預后及對抗病原微生物的感染[27-28]。分子對接結果顯示，核心成分與關鍵靶點結合能均小于–5.0kcal/mol，提示化合物與靶點間有較好的結合活性，其中地萜薇酮B與靶點結合能均小于–7.0kcal/mol，提示有強烈的結合活性。

綜上所述，本研究總結分析中醫內治法治療燒傷處方用藥規律，通過頻次分析、關聯分析、聚類分析得出核心中藥。利用網絡藥理學方法推測核心中藥可從多成分、多靶點、多通路達到抗炎、調節免疫、改善代謝、保護臟器功能、促進創面預后等治療效果。可為中醫內治法治療燒傷提供理論基礎，同時為研究新型治療燒傷的中成藥、中藥成分制劑等產品提供思路借鑒。但本研究仍存在不足，如很多治療燒傷的有效方劑未被數據庫收錄導致納入文獻資料偏少，復方煎煮過程中發生的反應以及與人體的相互作用未能計算在內等。后續在條件允許的情況下可開展動物實驗和中藥藥學質量控制來進一步驗證本研究結論。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

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（下轉第122頁）