膠體金實驗 酶標法對人類免疫缺陷病毒抗體檢測的準確性分析

【摘要】 目的 探究膠體金實驗與酶標法在人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）抗體檢測中的應用價值。方法 選取2021年1月—2023年12月在資溪縣疾病預防控制中心進行HIV抗體檢測的2 000例患者，對初篩陽性的25例患者血清標本分別進行膠體金實驗與酶標法檢測，初篩陽性標本送市疾控確診。將免疫印跡（western blot，WB）診斷結果作為金標準，分析上述2種檢測方法診斷效能，對陽性樣本帶型分布情況進行統計分析。結果 在初篩陽性的25例患者中，WB診斷顯示陽性14例、陰性11例；酶標法與WB有著良好一致性，酶標法診斷靈敏度、準確率、陰性預測值高于膠體金實驗（Plt;0.05）；在酶標法診斷的HIV陽性患者中，gP120、gP160出現率最高，P55出現率最低。結論 在HIV抗體檢測中，酶標法有著比膠體金實驗更高的診斷效能，能為陽性樣本帶型分布提供指導。

【關鍵詞】 膠體金實驗；酶標法；人類免疫缺陷病毒；抗體檢測

文章編號：1672-1721（2024）25-0052-03" " "文獻標志碼：A" " "中國圖書分類號：R446.62；R512.91

獲得性免疫缺陷綜合征即艾滋病，因感染HIV所致。HIV主要作用于機體靶細胞和效應細胞。隨著HIV感染時間延長，患者免疫功能會遭到嚴重破壞，最終可出現多種感染性疾病而死亡[1]。目前，臨床尚缺乏治愈艾滋病的有效手段，但如果能盡早發現病情并展開抗逆轉錄病毒治療，可延緩病情進展，減少病毒傳播。想要盡早確診病情，臨床需要做出及時、準確的診斷。WB試驗操作簡單且靈敏度較高，被認為是HIV抗體初篩后的首選補充試驗，但需要花費較長的檢測時間且價格較高，很難大范圍推廣[2]。膠體金實驗操作簡單，可迅速得到檢驗結果，但容易受到外界因素影響且特異度較低。近年來，價格低廉且診斷準確率高的酶標法被應用于HIV抗體檢測中[3]。本研究將2 000例接受HIV抗體檢測的人員作為研究對象，就膠體金實驗與酶標法的診斷價值進行對比分析，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2021年1月—2023年12月在資溪縣疾病預防控制中心進行HIV抗體檢測的2 000例患者，其中男性1 249例，女性751例；年齡20～75歲，平均（41.28±7.54）歲；文化程度，小學/初中1 124例、高中/中專748例、大專及以上128例。本研究經資溪縣疾病預防控制中心批準。

納入標準：臨床資料完整；年齡≥18歲，具備生活自理能力；認知正常，可配合完成研究；簽署知情同意書。

排除標準：存在免疫系統疾病，正接受免疫治療者；妊娠期或哺乳期女性；存在精神系統疾病者；合并血液系統疾病者。

1.2 方法

標本采集：嚴格依照臨床技術要求采集患者5 mL空腹靜脈血，急診或特殊情況也可隨機采集。使用離心機以3 000 r/min離心處理15 min，分離血清后備用，盡快按照要求完成檢測。無法在24 h內完成檢測的樣本，在2～8 ℃的冰箱內保存。

篩查試驗：（1）如果HIV篩查試驗結果無反應，則報告為陰性。（2）在篩查試驗有反應后，不直接報告為陽性，需依據實驗室規定進行復檢試驗。2次檢查結果均無反應，報告為HIV陰性；至少1次結果為有反應，報告為待確定。

對初篩陽性患者分別進行膠體金實驗與酶標法檢測。利用膠體金實驗試劑盒以雙抗原夾心法測定樣本中是否存在HIV抗體，觀察有無紅色反應線產生，在檢測區與指控區均出現紅色反應線為陽性。使用酶標儀，應用HIV抗體診斷試劑盒進行酶標法檢測，依據抗原-抗體-酶標抗原復合物在酶標儀上顯示出的吸光度（optical density，OD）值判斷有無HIV抗體存在。

WB診斷：未出現特異性條帶，診斷為陰性；有特異性條帶，同時出現2條及以上的env帶或出現1條及以上的env帶及1條及以上的gag帶或pol帶，診斷為陽性。對于出現特異性條帶但不具備判定陽性條件的人員，2～4周后隨訪，進行綜合判斷分析，得出結論。

1.3 觀察指標

（1）診斷效能。依據WB結果，對膠體金實驗與酶標法的診斷一致性進行分析，計算膠體金實驗與酶標法的診斷靈敏度、特異度、準確率、陽性預測值與陰性預測值。靈敏度=真陽性/（真陽性+假陰性）×100%。特異度=真陰性/（真陰性+假陽性）×100%。準確率=（真陽性+真陰性）/總人數×100%。陽性預測值=真陽性/（真陽性+假陽性）×100%。陰性預測值=真陰性/（真陰性+假陰性）×100%。（2）陽性樣本帶型分布情況。統計酶標法中不同HIV陽性樣本的帶型分布情況。

1.4 統計學方法

采用SPSS 21.0統計學軟件處理數據，計數資料以百分比表示，行χ2檢驗，一致性進行Kappa檢驗，Plt;0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 診斷效能

25例初篩陽性樣本中，WB診斷顯示陽性14例、陰性11例，見表1。酶標法診斷一致性Kappa值=

0.754，Plt;0.05。膠體金實驗診斷一致性Kappa值=

0.116，P=0.561。酶標法診斷靈敏度、準確率、陰性預測值高于膠體金實驗（Plt;0.05），見表2。

2.2 陽性樣本帶型分布情況

在酶標法診斷為真陽性的13例患者血清樣本中，gP120、gP160出現率最高，P55出現率最低，見表3。

3 討論

艾滋病是由HIV感染引起的傳染性極強的免疫缺陷性疾病。近年來艾滋病發生率持續上升是非常嚴重的公共衛生問題之一。HIV屬于反轉錄科慢病毒屬，進入機體后會通過逆轉錄形式形成雙鏈DNA并進入到細胞核中。人體在感染HIV后的1～2周，HIV大量復制，此時血液出現高滴度的病毒載量，還會出現相應的高濃度抗原。免疫系統識別HIV后，機體會啟動體液免疫與細胞免疫，HIV抗體水平會逐漸升高，能在感染后幾周內被檢測出來[4]。隨著抗原與抗體的結合，HIV抗原濃度逐漸下降，機體病毒滴度也會恢復至穩定水平。在無任何治療情況下，HIV抗體會持續處于較高水平，同時由于CD4+ T淋巴細胞水平處于正常范圍內，患者可能無任何癥狀表現。一旦CD4+ T淋巴細胞水平不足200個/μL時，病毒載量會持續增加，此時會進入到艾滋病期，患者會因免疫下降而感染疾病。HIV會不斷破壞機體免疫系統中的輔助T淋巴細胞，導致患者對外界環境失去抵抗能力，從而感染多種疾病，患者最終可因同時感染多種疾病而死[5]。HIV有著較多的傳播渠道，存在隱匿的窗口期，目前無法治愈，但通過早期治療能幫助患者恢復免疫功能，還能有效阻止病毒傳播。因此，如何做好疾病的早期診斷成為臨床關注的重點問題之一。實驗室診斷是識別與監測HIV感染的重要方法。通過獲取患者血液或體液進行檢測，可及早發現個體是否患病，從而展開針對性治療，控制病情進展，預防病毒傳播。

現階段，我國HIV實驗室檢測依據樣本情況選擇合適的初篩試劑，對于有反應的樣本進行復檢試驗，根據2次試驗結果決定是否要展開確認試驗。如果確認試驗結果為陰性，但由于存在流行病學史或確認試驗結果不準確，需要在后續進行隨訪，再次進行檢驗；如果確認試驗結果為陽性，則判斷患者存在HIV感

染[6]。隨著臨床對HIV認識的加深，實驗室診斷方法也在改進。WB檢測HIV抗體的試劑盒在20世紀80年代面世。WB檢測有著較高的靈敏度與特異度，目前被用于HIV抗體的確認試驗中。WB檢測有統一的標準，是我國最常用的抗體確認試驗。WB有較長的檢測窗口期，不利于發現早期HIV感染，不作為臨床初篩方法[7]。膠體金實驗是以膠體金為追蹤標志物進行檢驗的免疫層析方法，當待檢測樣本中存在HIV或HIV抗原時，樣本墊的包被區就會出現顯色符合物線條。膠體金實驗在質控區顯色情況下才有意義，靈敏度與特異度都相對較低，更多被用于大數量、時間緊迫的檢查中。酶標法通過將待檢血清加入到固體承載物中并與吸附的抗體或抗原反應，酶標記的抗體會出現顯色變化，能幫助臨床判斷HIV是否存在，而且顏色的深淺程度還能為臨床定量分析提供指導[8]。在20世紀80年代，臨床出現了第1代可用于HIV抗體檢測的酶標法試劑，通過夾心法原理可在患者感染6～8周實現對抗體的檢測，但由于純度不高且夾雜抗原，診斷準確率較低。20世紀90年代后，臨床出現了第2代酶標法試劑，對包被蛋白進行改良后可更好檢測到HIV抗體，不僅提高了特異度與靈敏度，也可有效縮短檢測時間。1994年臨床出現了第3代酶標法試劑，利用“三明治”原理進一步縮短了獲得結果的時間，還進一步提高了試劑靈敏度。第4代酶標法試劑檢測方法采用雙抗原夾心與雙抗體夾心，能實現對抗原、抗體的一同檢測，但無法區分兩者的陽性結果。這就導致酶標法檢測雖然縮短了檢測時間，豐富了檢測信息，但由于抗體、抗原之間可能互相干擾出現多種假陽性情況。故臨床建議使用2種試劑進行聯合檢驗，從而減少漏檢情況的出現。目前，臨床已經基于化學發光技術開發出了第5代酶標法試劑，在充分利用多重流式免疫分析技術上，通過對總抗體與核心抗原進行檢測，可有效完成對抗體和抗原的區分，能為臨床提供更加明確的診斷信息，縮短了確診時間，患者也能盡早接受抗逆轉錄病毒治療[9]。

本研究結果顯示，在WB結果作為金標準情況下，酶標法診斷一致性Kappa值=0.836，Plt;0.05，提示酶標法檢測有著良好的一致性；酶標法診斷靈敏度、準確率、陰性預測值高于膠體金實驗（Plt;0.05），表明酶標法有著較高的診斷效能，可減少漏診誤診情況。與膠體金實驗相比，酶標法有著較高穩定性，在檢測過程中不會受到樣本中溶血及脂血等異常情況的影響，通過酶標儀來獲得數據，能減少認為因素對檢驗結果的影響，提升診斷準確率[10]。本研究結果還顯示，酶標法診斷為真陽性的13例樣本中，gP120、gP160出現率最高，P55出現率最低，提示該方法能幫助臨床了解抗體類型，完成對疾病傳播風險的評估，為后續個體化治療方案的制定提供指導。

綜上所述，在HIV抗體檢測中，酶標法有著比膠體金實驗更高的診斷效能，能顯示陽性樣本帶型分布情況，為患者后續治療提供精準、全面的指導。需要注意的是，酶標法在檢測中依舊會受到人為、環境、類風濕因子等干擾，可能導致假陽性、假陰性的出現。在檢測過程中應當加強質控，結合受檢人員流行病史、HIV感染不同進程，選擇合適的方法檢測，對反應性篩選實驗進行確認，以減少誤診、漏診情況。

參考文獻

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