血清APPL1和HDAC3水平對慢性心力衰竭病人心功能和預后的預測價值

摘要目的：探究血清脂聯素受體結合蛋白（APPL1）和組蛋白去乙酰化酶3（HDAC3）表達對慢性心力衰竭（CHF）病人心功能和預后的預測價值。方法：選取2020年3月—2022年3月我院收治的108例CHF病人作為研究組，根據紐約心臟病協會（NYHA）心功能分級將CHF病人分為Ⅱ級組（33例）、Ⅲ級組（47例）、Ⅳ級組（28例）。選取同期健康體檢者85名作為對照組。根據是否發生主要心血管不良事件（MACE）分為未發生MACE組（73例）和MACE組（35例）。采用酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測兩組血清APPL1和HDAC3水平。多因素Logistic回歸分析影響CHF病人預后的因素。采用受試者工作特征（ROC）曲線分析血清APPL1和HDAC3水平對CHF病人心功能分級和不良預后的預測價值。結果：與對照組比較，研究組CHF病人外周血HDAC3水平升高，APPL1水平降低（P＜0.05）。與Ⅱ級組比較，Ⅲ級、Ⅳ級組HDAC3水平升高，APPL1水平降低（P＜0.05）；與Ⅲ級組比較，Ⅳ級組APPL1、HDAC3水平升高，APPL1水平降低（P＜0.05）。HDAC3、LVEDD是影響CHF病人預后的危險因素（P＜0.05）。與未發生MACE組比較，MACE組血清HDAC3水平、LVEDD升高，APPL1水平、LVEF下降（P＜0.05）。APPL1、LVEF是CHF病人預后的保護因素（P＜0.05）。二者聯合預測CHF病人心功能Ⅳ級的ROC曲線下面積（AUC）優于APPL1單獨檢測（P＜0.05）。二者聯合預測CHF病人預后的AUC優于APPL1、HDAC3單獨檢測（P＜0.05）。結論：CHF病人血清APPL1和HDAC3水平與心功能和預后有關，可作為評估CHF病人預后及心功能的潛在標志物。

關鍵詞慢性心力衰竭；脂聯素受體結合蛋白；組蛋白去乙酰化酶3；心功能；預后

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.17.018

慢性心力衰竭（chronic cardiac failure，CHF）是持續存在的心力衰竭狀態，是心血管疾病發展的終末階段，對病人的生命健康造成了嚴重的影響［1-2］。流行病學研究表明，CHF的發病率為1.3%～5.6%，且隨著年齡的增長，CHF的發病率逐漸升高［3］。根據美國紐約心臟病協會（New York Heart Association，NYHA）標準對CHF病人進行心功能分級，CHF病人心功能分級的升高與發生主要不良心血管事件（major adverse cardiovascular events，MACE）的風險呈正相關［4］。脂聯素受體結合蛋白（APPL1）在人體不同組織和器官中均有表達，是脂聯素受體AdipoR1和AdipoR2下游重要的信號蛋白，能夠介導胰島素和脂聯素轉導通路［5-6］。APPL1還在細胞增殖、凋亡、存活、胞內運輸、染色質重塑等生物學過程中發揮著重要作用［7］。李波等［8］研究發現，過表達APPL1能夠降低脂多糖誘導的心肌細胞氧化損傷，減少細胞凋亡。組蛋白去乙酰化酶3（histone deacetylase 3，HDAC3）在人體幾乎所有組織中均有表達，其通過去乙酰化修飾影響心肌細胞收縮，促進心肌肥厚、纖維化、自噬和凋亡，與心血管疾病的發生發展密切相關［9-10］。孫傳奇等［11］研究發現，HDAC3與心房顫動的發生發展和心肌結構重構有相關性，是心房顫動發生的獨立危險因素。然而APPL1、HDAC3與CHF病人心功能和預后的關系還尚未明確，本研究探討血清APPL1、HDAC3水平與CHF病人心功能和預后的關系。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2020年3月—2022年3月我院收治的108例CHF病人作為研究組，其中，男52例，女56例，年齡44～76（57.50±3.62）歲。根據NYHA心功能分級標準［12］將CHF病人分為Ⅱ級組（33例）、Ⅲ級組（47例）、Ⅳ級組（28例）。選取同期健康體檢者85名作為對照組，其中，男40名，女45名，年齡42～75（56.80±2.08）歲。研究組與對照組一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。本研究經醫院倫理委員會批準。

1.2納入與排除標準

納入標準：1）符合《慢性心力衰竭基層診療指南（2019年）》［13］中CHF的相關診斷標準；2）NYHA心功能分級Ⅱ～Ⅳ級；3）相關臨床資料與實驗室資料完整；4）病人及其家屬知情同意并自愿簽署同意書；5）入組前3個月未服用相關治療藥物或進行相關治療手段干預；6）年齡≥18歲。排除標準：1）伴有嚴重肝腎功能不全、惡性腫瘤、感染、惡性血液病等；2）精神異常或意識障礙；3）合并其他心臟相關疾病者；4）合并自身免疫性疾病；5）不愿參加隨訪的病人；6）妊娠期或哺乳期女性。

1.3方法

1.3.1主要試劑與儀器

人血清APPL1酶聯免疫吸附試驗法（ELISA）試劑盒購自美國Ramp;D公司；人血清HDAC3 ELISA試劑盒購自武漢華美生物公司。酶標儀購自Thermo Fisher公司。

1.3.2隨訪

對所有病人出院后進行6個月的電話或門診隨訪。記錄病人隨訪期間是否發生MACE將研究組108例病人分為未發生MACE組（73例）和MACE組（35例）。

1.3.3一般資料收集

收集研究對象的年齡、性別、體質指數（body mass index，BMI）、心率、收縮壓、舒張壓、白細胞計數（white blood cell，WBC）、三酰甘油（triglycerides，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、血糖、高血壓史、糖尿病史、高脂血癥史、吸煙史、飲酒史等一般資料。

1.3.4血清采集與保存

采集對照組體檢當天空腹靜脈血、研究組次日清晨空腹靜脈血各4 mL。4 ℃下3 000 r/min離心10 min，取上清液置于－20 ℃保存。

1.3.5ELISA法檢測血清APPL1、HDAC3水平

取待測血清，根據APPL1、HDAC3 ELISA試劑盒說明書，檢測血清APPL1、HDAC3水平。

1.3.6超聲心動圖檢查

采用彩色多普勒超聲診斷儀對研究組病人進行超聲心動圖檢查，測定左室舒張末期內徑（left ventricular end-diastolic diameter，LVEDD）和左室射血分數（left ventricular ejection fraction，LVEF）。

1.4統計學處理

采用SPSS 25.0軟件進行數據分析。符合正態分布的定量資料以均數±標準差（x±s）表示，兩組間數據比較采用t檢驗，多組間數據比較采用單因素方差分析，多組間數據進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗。定性資料以例數、百分比（%）表示，采用χ2檢驗。Logistic回歸分析CHF病人預后的影響因素。受試者工作特征（ROC）曲線分析血清APPL1和HDAC3水平對CHF病人心功能和預后的預測價值。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1研究組與對照組一般資料比較

研究組與對照組一般資料比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。詳見表1。

2.2各組血清APPL1、HDAC3水平和心功能指標比較

與對照組比較，研究組血清HDAC3水平、LVEDD升高，APPL1水平、LVEF下降（P＜0.05）。詳見表2。與Ⅱ級組比較，Ⅲ級組、Ⅳ級組血清HDAC3水平、LVEDD升高，APPL1水平、LVEF下降（P＜0.05）；與Ⅲ級組比較，Ⅳ級組血清HDAC3水平、LVEDD升高，APPL1水平、LVEF下降（P＜0.05）。詳見表3。與未發生MACE組比較，MACE組血清HDAC3水平、LVEDD升高，APPL1水平、LVEF下降（P＜0.05）。詳見表4。

2.3多因素Logistic回歸分析CHF病人預后的影響因素

以病人是否發生MACE為自變量（發生MACE＝1，未發生MACE＝0），以APPL1、HDAC3、LVEDD、LVEF為因變量，多因素Logistic回歸分析結果顯示，HDAC3、LVEDD是CHF病人發生MACE的危險因素（P＜0.05），APPL1、LVEF是CHF病人發生MACE的保護因素（P＜0.05）。詳見表5。

2.4血清APPL1、HDAC3水平對CHF病人心功能的預測價值分析

APPL1、HDAC3單獨與二者聯合預測CHF病人心功能Ⅳ級的曲線下面積（AUC）分別為0.616，0.812，0.831，二者聯合優于APPL1單獨檢測（Z＝4.039，P＜0.001）。二者聯合與血清HDAC3水平單獨檢測無顯著性差異（Z＝1.004，P＝0.315）。詳見表6、圖1。

2.5血清APPL1、HDAC3水平對CHF病人預后的預測價值分析

采用ROC曲線分析血清APPL1、HDAC3水平與CHF病人預后的關系。血清APPL1、HDAC3水平與二者聯合預測CHF病人預后的AUC分別為0.832，0.905，0.951，二者聯合優于APPL1、HDAC3單獨檢測（Z二者聯合-APPL1＝3.193，P＝0.001；Z二者聯合-HDAC3＝2.667，P＝0.008）。詳見表7、圖2。

3討論

CHF是臨床常見的心血管疾病，病人的心肌出現損傷，心功能失調，若不及時診斷和治療，可能引起身體其他系統的代償性增加，進一步加重病情［14］。因此，尋找檢測方便、敏感性高的標志物準確評估CHF病人的心功能和預后對治療措施的采取和制定具有重要意義。血清標志物易于檢測，病人接受性強，可以被臨床廣泛應用。本研究根據NYHA心功能分級對108例CHF病人進行了分組，并進行了心功能相關指標LVEDD和LVEF的檢測，結果顯示，NYHA心功能Ⅱ級病人33例，占30.56%；NYHA心功能Ⅲ級病人47例，占43.52%；NYHA心功能Ⅳ級病人28例，占25.93%。與對照組比較，研究組病人LVEDD升高，LVEF降低，且Ⅱ級、Ⅲ級、Ⅳ級病人LVEDD逐漸升高，LVEF逐漸降低，提示CHF病人的心功能出現障礙，且分級越高，這種心功能障礙越嚴重。

APPL1是通過酵母雙雜交技術發現的第一個與脂聯素受體直接結合的蛋白，APPL1不僅參與胰島素信號傳導通路，還與心血管疾病密切相關。Liu等［15］研究發現，脂聯素通過AdioR1/APPL1信號通路在D-半乳糖誘導的心肌細胞衰老中發揮抑制作用。唐健文等［16］研究發現，艾司氯胺酮通過上調APPL1表達改善了脂多糖誘導的心肌細胞損傷。Dadson等［17］研究發現，脂聯素信號傳導通路在心臟成纖維細胞中通過APPL1介導5-單磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）活化，導致細胞上皮間質轉化結構成分減少，成纖維細胞遷移增加，在肥胖和糖尿病相關的心力衰竭中具有重要意義。本研究結果顯示，與對照組比較，研究組血清APPL1水平降低，且隨著心功能分級越高，病人血清APPL1水平逐漸降低。這些結果提示，血清APPL1水平可能與CHF病人心功能相關，對CHF有抑制病情發展的作用，其水平降低能反映病人患CHF的可能性增加。

HDAC3是調控心血管疾病的重要因子，屬于組蛋白去乙酰化酶，與心血管疾病的發生和發展密切相關［10］。Zheng等［18］研究發現，通過抑制HDAC3減輕心肌缺血再灌注損傷小鼠心肌組織的炎癥和凋亡，改善心臟功能，在心肌缺血再灌注中發揮保護作用。Chen等［19］研究發現，瑞芬太尼后處理通過下調HDAC3介導的糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）減輕缺氧再氧合后H9c2細胞的凋亡。本研究探究了血清HDAC3水平與CHF的相關性，結果顯示，與對照組比較，研究組血清HDAC3水平升高，且隨著心功能分級越高，病人血清HDAC3水平逐漸升高。說明血清HDAC3水平與CHF和心功能密切相關，且水平越高，CHF病人的病情和心功能障礙越嚴重。

多因素Logistic回歸分析結果顯示，HDAC3、LVEDD是CHF病人發生MACE的危險因素，APPL1、LVEF是CHF病人發生MACE的保護因素；ROC曲線分析顯示，血清APPL1、HDAC3水平聯合預測CHF病人心功能Ⅳ級的AUC高于APPL1單獨預測；血清APPL1、HDAC3水平聯合預測CHF病人預后的AUC高于二者單獨預測。結果提示，血清APPL1、HDAC3水平能夠評估CHF病人心功能和預后，能在臨床上為CHF的治療提供一定價值，臨床應密切關注CHF病人的血清APPL1、HDAC3水平，以便及時采取必要的治療手段，抑制病情發展和惡化。

綜上所述，CHF病人血清HDAC3水平呈高表達，APPL1水平呈低表達，是評估CHF病人心功能和預后的潛在標志物。本研究還存在不足之處，血清APPL1、HDAC3水平對CHF病人心功能的影響機制還尚不明確，還需進一步設計研究進行深入探究。

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（收稿日期：2023-02-22）

（本文編輯鄒麗）