改進的QuEChERS結合高效液相色譜-串聯質譜法測定牛奶中麥草畏及代謝物殘留量

摘 要：目的：建立改進的QuEChERS-高效液相色譜-串聯質譜分析牛奶中麥草畏及代謝物殘留的檢測方法。方法：樣品采用乙腈-0.1%乙酸的混合溶液提取，無水硫酸鎂和C18凈化，高效液相色譜-串聯質譜儀的MRM模式進行測定。結果：在2.0～500.0 μg·L-1，3，6-二氯水楊酸和麥草畏的線性相關系數分別為

0.996 0和0.999 0，回收率分別為76.1%～98.5%和82.1%～103.9%，相對標準偏差分別為5.3%～7.3%和5.4%～8.6%，定量限為10 μg·kg-1。結論：該方法操作簡便、結果準確，適用于牛奶中麥草畏農藥殘留的檢測。

關鍵詞：高效液相色譜-串聯質譜法；牛奶；麥草畏

Determination of Dicamla and Its Metabolite Residues in Milk with Modified QuEChERS-HPLC-MS/MS

BAI Guotao， MA Caixia， REN Caixia， ZHANG Hui， CHEN Limei， WANG Jing

（Hohhot Customs Technical Centre， Hohhot 010020， China）

Abstract： Objective： To establish an improved QuEChERS high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method for the determination of dicamla and its metabolites in milk. Method： The samples were extracted with mixed solution of acetonitrile and 0.1% acetic acid， purified by anhydrous magnesium sulfate and C18， and determined by MRM mode of high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometer. Result： The linear correlation coefficients of dichlorosalicylic acid and trivaloba in 2.0～500.0 μg·L-1， 3，6-dichlorosalicylic acid and trivaloba were 0.996 0 and 0.999 0， respectively. The recoveries were 76.1%～98.5% and 82.1%～103.9%， and relative standard deviation were 5.3%～7.3% and 5.4%～8.6%， respectively. The limit of quantification was 10 μg·kg-1. Conclusion： The method is simple and accurate， and suitable for the determination of dicamla pesticide residues of dicamba in milk.

Keywords： high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; milk; dicamla

麥草畏屬安息香酸類除草劑，由美國威爾斯科爾化學公司研發[1]，適用于高粱和玉米等作物輪作中闊葉雜草的防治[2]。GONZALEZ等[3]通過對人類淋巴細胞進行體外培養發現，一定濃度的麥草畏可能會導致細胞中毒和干擾細胞循環進程。《食品安全國家標準 食品中農藥最大殘留限量》（GB 2763—2021）規定，麥草畏在動物源性食品中的殘留物為麥草畏和3，6-二氯水楊酸之和，牛奶中的最大殘留限量為0.2 mg·kg-1[4]。

麥草畏測定方法主要包括氣相色譜法[5]、氣相色譜-質譜法[6-7]、氣相色譜-串聯質譜法[8]、液相色譜法[9]和液相色譜-質譜/質譜法[10-14]等。采用氣相色譜檢測，前處理過程需要衍生化處理，液相色譜不適用于確證檢測，而應用液相色譜-串聯質譜儀進行測定，有前處理簡便、定量限低、測試時間短等優點。牟仁祥等[10]建立了稻米中13種苯氧羧酸類除草劑殘留檢測方法，樣品經乙腈提取，鹽酸酸化，SCX陽離子吸附劑分散固相萃取凈化，方法檢出限達0.01 mg·kg-1；王可等[11]建立了液相色譜-串聯質譜儀測定嬰幼兒谷物食品中苯氧羧酸類除草劑殘留檢測方法，采用2%甲酸的乙腈溶液提取，以PSA和MgSO4凈化，方法定量限為8.1 μg·kg-1；張立佳等[12]建立了牛乳中麥草畏殘留的高效液相色譜-串聯質譜測定方法，樣品通過0.5%甲酸的乙腈溶液提取，氯化鈉鹽析，方法定量限為10 μg·kg-1。這些方法均未包含麥草畏代謝物3，6-二氯水楊酸。本方法采用QuEChERS結合高效液相色譜-串聯質譜儀，建立了牛奶中麥草畏及其代謝物農藥殘留的檢測方法。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

麥草畏、3，6-二氯水楊酸標準品，純度均大于97.0%，阿爾塔科技公司；乙腈（色譜純），美國Fisher公司；甲酸（分析純），J.T.Baker公司；冰乙酸（分析純），天津市天大化工實驗廠；氯化鈉、無水硫酸鎂（分析純），福晨（天津）化學試劑有限公司；C18填料（粒徑40～63 μm），上海安普實驗科技股份公司。

Agilent 6495型液相色譜-三重四極桿質譜儀，配ESI源，美國安捷倫科技公司；渦旋振蕩器，日本EYELA公司；Thermo超純水發生器，美國Thermo Fisher公司；3K-15冷凍離心機，德國SIGMA公司。

1.2 樣品前處理

準確稱取2 g牛奶（精確至0.01 g）樣品，置于50 mL塑料離心管中，加入10 mL含0.1%乙酸的乙腈溶液，渦旋振蕩提取10 min后，再加入2 g氯化鈉，振蕩混勻5 min，在4 ℃條件下10 000 r·min-1離心5 min。在10 mL離心管中分別加入C18填料150 mg、無水硫酸鎂250 mg，再加入2 mL上清液，渦旋振蕩凈化2 min，在4 ℃條件下5 000 r·min-1離心5 min，取上清液過0.22 μm濾膜，待高效液相色譜-串聯質譜儀測定。

1.3 LC-MS/MS檢測條件

（1）色譜條件。色譜柱：Agilent SB C18柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；柱溫箱溫度：35 ℃；進樣量：5.0 μL。流動相及線性洗脫梯度見表1。

（2）質譜條件。采用電噴霧離子源的負離子模式測定；離子源溫度：250 ℃；去溶劑氣溫度：350 ℃；去溶劑氣流量：11.0 L·min-1；四極桿溫度：100 ℃。質譜參數見表2。

2 結果與分析

2.1 質譜條件的優化

本文分別對3，6-二氯水楊酸和麥草畏標準溶液進行母離子正、負離子模式掃描，發現麥草畏、3，6-二氯水楊酸在負模式下均有較好的響應，正模式響應較差。麥草畏的二級碎片離子為m/z 175.0，其他離子響應較小；3，6二氯水楊酸的二級碎片離子為m/z 160.9和125.0，且m/z 160.9的響應值較高且穩定，因此選擇204.9/160.9為定量離子對。

2.2 提取條件的優化

本文考察了乙腈、甲醇對麥草畏及其代謝物在牛奶基質中的提取效果。結果表明，用甲醇進行提取時，基質的沉降蛋白效果較差，用乙腈提取時，基質的蛋白沉降較充分。此外，在樣品的提取體系中加入適量的酸可抑制羧酸類化合物的解離，增加有機相中的溶解度[10]。而負離子模式下，過多的酸會影響檢測靈敏度。故本文采用含0.1%乙酸的乙腈溶液進行提取，且麥草畏和3，6-二氯水楊酸的回收率均在85%以上。

2.3 線性范圍、相關系數、定量限和基質效應

采用空白牛奶基質溶液分別配制2.0 μg·mL-1、5.0 μg·L-1、10.0 μg·L-1、20.0 μg·L-1、50.0 μg·L-1、100.0 μg·L-1、250.0 μg·L-1和500.0 μg·L-1的麥草畏及3，6-二氯水楊酸溶液，并用液相色譜-串聯質譜儀進行分析。在上述測定條件下，以3，6-二氯水楊酸和麥草畏定量離子的色譜峰面積（Y）和相應的質量濃度（X）建立校準曲線。在2.0～500.0 μg·L-1，3，6-二氯水楊酸和麥草畏的線性相關系數分別為0.996 0和0.999 0。以10倍信噪比（S/N）得出麥草畏及3，6-二氯水楊酸在牛奶中的定量限均為10 μg·kg-1，結果詳見表3。

用體積分數為1∶9的乙腈和0.1%甲酸水溶液配制2.3相同濃度的麥草畏及3，6-二氯水楊酸標準溶液，液相色譜-串聯質譜儀分析，按照基質匹配校準曲線斜率與純溶劑標準曲線斜率的比值評估基質效應。結果表明，麥草畏的基質效應為106%，3，6-二氯水楊酸的基質效應為90.8%。兩者的基質效應不明顯，可以采用溶劑標準溶液進行定量。

2.4 方法的準確度和精密度

向空白牛奶樣品中分別添加10 μg·kg-1、100 μg·kg-1、200 μg·kg-1的麥草畏及3，6-二氯水楊酸標準工作溶液，每個水平重復測定6次，按照1.2和1.3進行樣品前處理以及液相色譜-串聯質譜儀測定，計算回收率以及相對標準偏差。由表4可知，3，6-二氯水楊酸的回收率為76.1%～98.5%，相對標準偏差為5.3%～7.3%，麥草畏的回收率為82.1%～103.9%，相對標準偏差為5.4%～8.6%。

2.5 實際樣品測定

按照本方法對市售的20批次牛奶樣品進行麥草畏及3，6-二氯水楊酸測定。結果表明，20批次樣品均未檢出麥草畏及3，6-二氯水楊酸。

3 結論

本文采用改進的QuEChERS前處理方法，建立了測定牛奶中麥草畏及3，6-二氯水楊酸農藥殘留的高效液相色譜-串聯質譜法。該方法的凈化效果優、重復性好、靈敏度高，適用于牛奶中麥草畏及3，6-二氯水楊酸的測定，具有廣泛的適用性。

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