一例魚類細菌性敗血癥的病原菌及耐藥性分析

摘 要：為更好地應對大宗淡水魚養殖過程中的細菌性敗血癥，長期監控重慶市涪陵區兩家養殖場的情況，對患病魚和健康魚進行臨床診斷、解剖、鏡檢、致病細菌的分離鑒定以及耐藥性試驗，結果表明上述兩家養殖場出現的細菌性敗血癥主要致病菌為氣單胞菌屬（Aeromonas），且進一步通過藥敏試驗篩選到磺胺甲噁唑/甲氧芐啶對該致病菌高度敏感。

關鍵詞：魚類；細菌性敗血癥；氣單胞菌（Aeromonas）；耐藥性

中圖分類號：S943 """"文獻標志碼：A

文章編號：1004-6755（2025）01-0008-03

細菌性敗血癥也常稱為“細菌性出血病、出血性腹水病等”，是殃及的魚類品種最多，危害最重，流行最廣，周期最長，死亡率也最高的魚類疾病之一[1]。患此病的魚從發現癥狀到死亡僅3～5 d，短期內會造成大量魚類死亡，對水產養殖業的危害極大。水溫9～36 ℃ 之間均可發生流行，25～30 ℃ 為高峰；流行時間為3—11月[2-5]。細菌性敗血癥常常給養殖戶和養殖企業造成巨大的經濟損失。筆者于2023年5—10月在重慶市涪陵區某兩家養殖場進行長期監控，現將診斷和耐藥性情況作以下總結，旨在為大宗水產品養殖過程中應對魚類細菌性敗血癥提供一定的數據支撐和科學依據。

1 材料與方法

1.1 試驗用魚

2023年5—10月期間，涪陵區兩家養殖場均陸續出現魚吃食能力減弱，部分魚體表發紅出血，鱗片掉落等臨床癥狀。兩家漁場分別占地70畝（4.67 hm2）和60畝（4 hm2），均為養殖時間5年以上的精養池塘，水深約1.5 m，塘內主養草魚和鯽，搭配鰱、鳙、鯉等。

于2023年5—10月從重慶市涪陵區各水產養殖基地中采集常見發病或健康的水產養殖動物，主要為淡水品種的草魚和鯽。每份樣品單獨用無菌密封袋密封，低溫保存，快速運回實驗室進行細菌分離。

1.2 臨床診斷

現場通過肉眼觀察發現，病魚的體表、上下頜、口腔、鰓蓋、鰭條基部發紅充血，鱗片掉落，肛門紅腫外突，腹部膨大，解剖后發現腹腔內有大量腹水，鰓發白，肝、腎的顏色較淺，肌肉和鰾壁充血（見圖1）。

1.3 實驗室診斷

1.3.1 寄生蟲類病原診斷

剪下病魚部分鰓絲，刮取病魚鱗片脫落且出血的皮膚和腸道內容物，加入少量生理鹽水后混勻置于載玻片上，用光學顯微鏡鏡檢觀察，結果從魚鰓、皮膚和腸道中均未發現大量疑似寄生蟲卵或卵囊，排除其是引發病變的主要原因。

1.3.2 病原菌分離與篩選

取病灶部位和肝臟、脾臟、腎臟、鰓5種組織樣本，在超凈工作臺下，用霉菌接種環將樣品的組織樣本劃線接種于普通瓊脂平板中，28 ℃培育24 h（見圖2），挑取單菌落接種至BHI液體培養基中28 ℃培養24 h。

1.3.3 病原菌鑒定及保存

通過核酸提取試劑盒提取純化細菌的核酸，使用細菌通用引物擴增其16S rDNA，測序比對，確定種屬。2023年5月至10月在重慶市涪陵區2個水產養殖場收集樣品總共分離得到氣單胞菌屬（Aeromonas）細菌27株，其中維氏氣單胞菌（A. veronii）23株，占比85%；嗜水氣單胞菌（A. hydrophila）2株，占比7%；豚鼠氣單胞菌（A. caviae）1株，占比4%；簡氏氣單胞菌（A. jandaei）1株，占比4%。

1.3.4 藥敏試驗將分離鑒定后的病菌擴培養，適當稀釋后將其涂布在固體培養基上，貼上含抗生素的藥敏紙片，置于恒溫培養箱中，待恒溫孵育18 h后，測量各藥敏紙片對應抑菌圈直徑，根據各抑菌圈直徑大小判斷分離菌對相應抗菌藥的敏感性。

2 結果與分析

如圖3所示，氣單胞菌屬對恩諾沙星、氟苯尼考、鹽酸多西環素、磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺甲噁唑/甲氧芐啶、硫酸新霉素、甲砜霉素的耐藥率分別為0%、7.41%、3.70%、59.26%、0%、0%、7.41%，其中對磺胺間甲氧嘧啶鈉的耐藥率最高，達59.26%；中介率分別為7.41%、0%、0%、0%、0%、3.70%、0%，其中對恩諾沙星的中介率最高，達7.41%；敏感率分別為92.59%、92.59%、96.30%、40.74%、100%、96.30%、96.30%、92.59%，其中對磺胺甲噁唑/甲氧芐啶的敏感率最高，達100%。結果發現，氣單胞菌屬對磺胺間甲氧嘧啶鈉的耐藥率最高，對恩諾沙星的中介率最高，對磺胺甲噁唑/甲氧芐啶的敏感率最高。

根據監測魚群臨床癥狀、病理性觀察和實驗室診斷結果，可判斷主要是氣單胞菌屬感染所致，通過藥敏試驗篩選出有效治療藥物，其中對磺胺甲噁唑/甲氧芐啶高度敏感。

3 討論與結論

目前，使用抗菌藥物仍是防控水產養殖細菌性病害的主要措施之一[6-8]。若濫用抗菌藥則會產生明顯的副作用，水生動物長期反復接觸某種藥物后，其體內敏感菌株會受到選擇性抑制，而耐藥菌株大量繁殖，甚至某些細菌會由單重耐藥性發展為多重耐藥性，從而影響水產品質量安全，對生態和公共衛生安全造成嚴重影響[9-11]。因此，通過藥物敏感性試驗，了解掌握病原菌耐藥性的變化規律，為指導水產養殖業主科學、規范地用藥提供有力支撐，保障水產品質量安全。本試驗通過臨床診斷結合實驗室診斷技術，確定該兩家養殖場出現的細菌性敗血癥主要致病菌為氣單胞菌屬，且進一步通過藥敏試驗篩選到對該致病菌敏感的抗菌藥，這為該兩家養殖場細菌性敗血癥的防治提供了科學依據。

近年來，國內大宗水產品養殖業深受魚類病害影響，要深入分析魚類細菌性敗血癥的致病原因和發病過程，盡力挽回經濟損失。魚群出現細菌性敗血癥的原因十分復雜，主要包括漁場管理水平較差、缺乏有效的飼養管理能力、水質差、魚類體質差、抗病能力弱、氣候變化和濫用抗菌藥物等因素[12]。此外，氣單胞菌屬廣泛分布于水源、土壤和養殖環境中，且屬于條件致病菌，在水溫變化、水質惡化和魚體免疫力下降等情況下會感染魚類，引起大規模死亡，所以該漁場的發病魚并非僅有單一病原，是各種條件下的混合病原導致發病。

建議該兩家漁場采取以防為主，防重于治的措施。目前對于細菌病的防治主要依賴于加強消毒和使用抗菌藥治療[13]，其中，消毒要做到以下幾方面：一是徹底清理魚塘，冬閑時進行清淤；二是魚塘和苗種消毒，在魚塘放苗前，用生石灰對池塘進行消毒，放魚苗前用適宜濃度的鹽水對魚體進行消毒；三是定期進行藥物預防，根據水質情況定期全池潑灑消毒和調水產品，定期使用藥物拌飼投喂，提高魚體免疫力；四是一旦發現發病魚塘，要及時隔離，同時注意網具和工具用后要進行消毒處理，死魚和病魚要無害化處理；五是發病魚塘不要動網，以免應激造成大批魚死亡；六是加強飼養管理，包括做好“四定”投飼，改善水體環境，細心操作，避免魚體受傷，勤巡塘等管理措施[14-16]。其次，使用抗菌類藥物時要注意，長期使用抗菌藥會導致耐藥菌株的出現，不利于疾病的有效防控，在本案例中發現的氣單胞菌屬對磺胺甲噁唑/甲氧芐啶敏感率最高，可優先選擇此類藥物進行治療，同時結合恩諾沙星、氟苯尼考、鹽酸多西環素、硫酸新霉素、甲砜霉素這些敏感性較高的藥物一并使用，合理控制、科學用藥，可提高治療效率。

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Analysis of the pathogen and drug resistance of a case of bacterial septicemia in fish

YANG Ling，YAN Mingyao，ZHU Yuanyuan，LIU Xiaohua

（Chongqing FulingDistrict Animal Husbandry Development Center， Chongqing 408099，China）

Abstract：In order to better deal with bacterial septicemia in conventional freshwater fish， long-term monitoring was conducted at two aquaculture farms in Fuling District， Chongqing. Clinical diagnosis， anatomical examination， microscopic examination， pathogenic bacteria isolation and identification， as well as antibiotic susceptibility tests were performed on both diseased fish and healthy fish. The results showed that the main pathogenic bacteria in the two farms with bacterial septicemia were Aeromonas， and furthermore， the highly sensitive antibiotic to the pathogenic bacteria was identified through antibiotic susceptibility tests， namely sulfamethoxazole/trimethoprim.

Key words：fish;bacterial septicemia; Aeromonas; drug resistance

（收稿日期：2024-11-08）