柑橘褪綠矮縮病毒侵染尤力克檸檬誘導(dǎo)細(xì)胞自噬

摘要：自噬是寄主響應(yīng)病毒侵染的一種重要防御機(jī)制。為明確柑橘褪綠矮縮病毒（Citrus chlorotic dwarf-associated virus，CCDaV）侵染柑橘是否引起細(xì)胞自噬反應(yīng)，運(yùn)用透射電鏡、實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)、GFP-NbATG8f熒光標(biāo)記和蛋白印記等方法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CCDaV感染尤力克檸檬15 d后，在尤力克檸檬葉片細(xì)胞質(zhì)內(nèi)觀察到自噬小體結(jié)構(gòu)的形成，自噬相關(guān)基因（ClATG3、ClATG5、ClATG7、ClATG8a、ClATG8d、ClATG8f、ClATG8g、ClATG8i、ClBeclin1、ClPI3K和ClNBRI）的表達(dá)量顯著上調(diào)，且ATG8的含量是對(duì)照組的1.99倍。將CCDaV編碼的6個(gè)病毒蛋白分別與GFP-NbATG8f共表達(dá)于本生煙48 h后，通過(guò)共聚焦觀察到V3和V4蛋白分別與GFP-NbATG8f共表達(dá)時(shí)誘導(dǎo)產(chǎn)生的自噬小體數(shù)量顯著高于對(duì)照，且游離GFP的含量也顯著增加。表明CCDaV侵染可誘導(dǎo)尤力克檸檬產(chǎn)生細(xì)胞自噬反應(yīng)，且病毒編碼的V3和V4蛋白可能是誘導(dǎo)自噬的重要因子。

關(guān) 鍵 詞：柑橘褪綠矮縮病毒；尤力克檸檬；細(xì)胞自噬；病毒蛋白

中圖分類號(hào)：S436.66；S666.5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1673-9868（2025）03-0037-09

Infestation of Citrus chlorotic Dwarf-Associated Virus in Eureka lemon Induced Cellular Autophagy

YU Ling¹， SHEN Shikai¹， WANG Jiajun¹， BAI Ziqin²，CHEN Li³， HU Deyu³， ZHOU Yan¹

1. Citrus Research Institute，Southwest University/National Citrus Engineering Research Center，Chongqing 400712，China；

2. Fruit Research Institute，Guizhou Academy of Agricultural Sciences，Guiyang 550000，China；

3. Economic Crop Development Center of Wanzhou District，Wanzhou Chongqing 404100，China

Abstract：Autophagy is an important defense mechanism of host in response to virus infection．To clarify whether the infection of Citrus chlorotic dwarf-associated virus （CCDaV） could induce autophagic response in plant，in this study，transmission electron microscope （TEM），quantitative real-time PCR，confocal microscopy analysis of enhanced green fluorescent protein-tagged Nicotiana benthamiana ATG8f （GFP-NbATG8f） and western blot were used to investigate the formation of autophagic structure，the transcript levels of autophagy related genes and ATG8 content in CCDaV-infected Eureka lemon，respectively．The results showed that the formation of autophagic structure was observed in the cytoplasm of CCDaV-infected Eureka lemon leaf cell by TEM at 15 days post inoculation （dpi）．Compared with the healthy control，the expression levels of autophagy related genes （ClATG3，ClATG5，ClATG7，ClATG8a，ClATG8d，ClATG8f，ClATG8g，ClATG8i，ClBeclin1，ClPI3K and ClNBRI） in CCDaV-infected Eureka lemon leaves were significantly up-regulated，and ATG8 content was increased by 1.99 times．After co-expression of the six viral proteins encoded by CCDaV with GFP-NbATG8f in N. benthamiana for 48 h，the number of autophagosomes induced by co-expression of V3 and V4 proteins with GFP-NbATG8f was significantly higher than that of the control，and the content of free GFP was also significantly increased．These results indicated that CCDaV infection induced autophagic response in Eureka lemon，and V3 and V4 proteins may be important factors to induce autophagy．

Key words：Citrus chlorotic dwarf-associated virus；Eureka lemon；autophagy；viral proteins

自噬最早于1963年由De Duve等首次提出，用來(lái)描述細(xì)胞自身物質(zhì)的溶酶體降解途徑^［1］ 。隨后，Tsukada等在酵母上鑒定出第一個(gè)自噬基因APG^［2］ ，之后陸續(xù)在酵母、動(dòng)物和植物中鑒定出40多個(gè)自噬相關(guān)蛋白（ATGs）。早期對(duì)自噬的研究主要集中于其在癌癥、神經(jīng)退行性疾病等人類疾病中的功能^［3］ 。Liu等^［4］ 首次發(fā)現(xiàn)煙草花葉病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）的侵染能夠誘導(dǎo)自噬基因的表達(dá)。隨后，越來(lái)越多的研究表明，自噬反應(yīng)在植物應(yīng)對(duì)多種植物病毒感染時(shí)被激活，不僅能夠限制病毒的積累，還能促進(jìn)病毒的感染，是植物響應(yīng)病毒侵染的重要調(diào)控機(jī)制^［5-6］。在發(fā)生自噬反應(yīng)的植物細(xì)胞中可以觀察到自噬相關(guān)基因（ATGs）表達(dá)量顯著上調(diào)，以及自噬小體和自噬標(biāo)記物ATG8的大量積累^［7］ 。

雙生病毒（Geminiviruses）是一類在世界范圍內(nèi)廣泛發(fā)生的單鏈環(huán)狀DNA病毒，其寄主范圍廣泛，主要通過(guò)煙粉虱、葉蟬和蚜蟲(chóng)傳播，每年造成的經(jīng)濟(jì)損失達(dá)數(shù)百億美元。自噬現(xiàn)象在雙生病毒上也較為普遍，棉花木爾坦曲葉病毒（Cotton leaf curl Multan virus，CLCuMuV）編碼的βC1蛋白是第一個(gè)被鑒定的植物病毒自噬激活劑，通過(guò)阻止自噬相關(guān)蛋白3（ATG3）與胞質(zhì)自噬負(fù)調(diào)控因子3-磷酸甘油醛脫氫酶（GAPC）互作，從而激活植株的自噬反應(yīng)，抑制CLCuMuV侵染^［8］ 。隨后發(fā)現(xiàn)云南番茄曲葉病毒（Tomato leaf curl Yunnan virus，TLCYnV）、印度綠豆黃化花葉病毒（Mungbean yellow mosaic India virus，MYMIV）、甜菜嚴(yán)重曲頂病毒（Beet severe curly top virus，BSCTV）等多種雙生病毒都能激活細(xì)胞自噬途徑，上調(diào)自噬相關(guān)基因mRNA的表達(dá)^［9-10］。

柑橘褪綠矮縮病毒（Citrus chlorotic dwarf-associated virus，CCDaV）是近年來(lái)柑橘生產(chǎn)上出現(xiàn)的一種新病毒，自19世紀(jì)80年代在土耳其東部以及地中海地區(qū)默辛省被首次發(fā)現(xiàn)^［11］ ，目前在中國(guó)和泰國(guó)都有發(fā)生^［12-13］。CCDaV在檸檬、紅寶石柚等敏感品種上引起葉片褪綠、斑駁和扭曲（圖1a和1b）。CCDaV基因組為約3.64 kb的環(huán)狀單鏈DNA分子，可能含有6個(gè)開(kāi)放閱讀框（Open reading frames，ORFs），分別是V1、V2、V3、V4、RepA、Rep。其中，V1被認(rèn)為是外殼蛋白（CP）；V2含有雙生病毒V2蛋白的保守結(jié)構(gòu)域，具有保守的半胱氨酸殘基，該殘基對(duì)抑制番茄黃化曲葉病毒（Tomato yellow leaf curl virus，TYLCV）誘導(dǎo)的基因沉默至關(guān)重要^［14］ 。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)WRKY1正向調(diào)控CCDaV復(fù)制相關(guān)蛋白R(shí)epA在本生煙（Nicotiana benthamiana）中誘導(dǎo)細(xì)胞死亡^［15］ 。CCDaV編碼的V2蛋白可抑制GFP RNA引發(fā)的局部和系統(tǒng)RNA沉默，但不影響16c本生煙中RNA沉默信號(hào)的短距離移動(dòng)^［16］ 。目前國(guó)內(nèi)外尚未開(kāi)展關(guān)于CCDaV誘導(dǎo)寄主自噬的相關(guān)研究。

本研究以感染CCDaV的尤力克檸檬作為研究材料，探究CCDaV是否能誘導(dǎo)尤力克檸檬的自噬反應(yīng)，以及誘導(dǎo)自噬的病毒蛋白種類，以期為今后研究細(xì)胞自噬在CCDaV侵染寄主中的調(diào)控作用提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料

無(wú)病毒一年生尤力克檸檬實(shí)生苗和CCDaV毒株均保存于國(guó)家柑桔苗木脫毒中心。本生煙生長(zhǎng)條件為25 ℃，16 h光照，8 h黑暗處理。統(tǒng)一采用生長(zhǎng)至40 d的四至六葉期煙苗為試驗(yàn)材料。

1.2 主要試劑

植物蛋白提取試劑盒購(gòu)自北京索萊寶生物科技有限公司；IsoPlus、Prime STAR Max DNA Polymerase購(gòu)自寶生物工程（大連）有限公司；氯仿、乙醇、異丙醇等購(gòu)自北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司；反轉(zhuǎn)錄一步法試劑購(gòu)自ABM公司；實(shí)時(shí)熒光定量SYBR Prime qPCR Mix試劑購(gòu)自重慶葆光生物科技有限公司；Anti-Actin抗體、羊抗鼠二抗和羊抗兔二抗購(gòu)買于翌圣生物科技（上海）股份有限公司；GFP單克隆抗體、ATG8單克隆抗體購(gòu)自成都AlpVHHs有限公司。

1.3 透射電子顯微鏡檢測(cè)自噬

使用直徑5 mm打孔器在感染CCDaV 15 d后的尤力克檸檬嫩葉上取樣，使用透射電鏡觀察自噬結(jié)構(gòu)。統(tǒng)計(jì)超過(guò)50個(gè)細(xì)胞內(nèi)自噬小體的平均值，進(jìn)行3次重復(fù)試驗(yàn)。使用GraphPad Prism 8軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.4 實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)

稱取0.1 g感染CCDaV 15 d后的尤力克檸檬嫩葉，IsoPlus提取總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。使用SYBR Prime qPCR Mix進(jìn)行qRT-PCR反應(yīng)。以尤力克檸檬的ClActin作為內(nèi)參基因。采用2^-ΔΔct法分析相對(duì)表達(dá)量，GraphPad Prism 8軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)分析。

1.5 誘導(dǎo)自噬的病毒蛋白種類鑒定

利用Prime STAR Max DNA Polymerase，以CCDaV毒株為模板擴(kuò)增CCDaV的V1、V2、V3、V4、C1和C2基因，并將其分別構(gòu)建到pART27-Myc中。測(cè)序驗(yàn)證后，分別與GFP-NbATG8f轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌GV3101，并共注射于本生煙；48 h后使用Olympus FV3000進(jìn)行觀察；488 nm觀察綠色熒光（GFP），543 nm觀察紅色葉綠體自發(fā)光；浸潤(rùn)pART27-Myc-GUS的本生煙作為對(duì)照。

1.6 Western Blot檢測(cè)自噬

稱取0.2 g感染CCDaV 15 d后的尤力克檸檬嫩葉，使用植物組織蛋白提取試劑盒提取總蛋白，并進(jìn)行12.5% SDS-PAGE。分別使用CCDaV CP單克隆抗體和ATG8單克隆抗體作為一抗室溫孵育2 h，再分別以羊抗鼠二抗和羊抗兔二抗室溫孵育2 h，Myc直標(biāo)抗體室溫孵育2 h。使用IMAGEJ軟件分析蛋白條帶灰度值。

2 結(jié)果與分析

2.1 透射電鏡觀察細(xì)胞自噬

CCDaV侵染尤力克檸檬15 d后，在透射電子顯微鏡下觀察到有雙層膜囊泡狀結(jié)構(gòu)的自噬小體（圖2a）。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，感病尤力克檸檬葉片中自噬結(jié)構(gòu)數(shù)量顯著高于無(wú)病毒尤力克檸檬（圖2b）。結(jié)果表明，CCDaV可能誘導(dǎo)尤力克檸檬葉片細(xì)胞內(nèi)的自噬反應(yīng)。

2.2 CCDaV侵染激活自噬相關(guān)基因的表達(dá)

進(jìn)一步qRT-PCR檢測(cè)尤力克檸檬嫩葉中自噬相關(guān)基因的表達(dá)量發(fā)現(xiàn)，感染CCDaV 15 d后，自噬相關(guān)基因ClBeclin1、ClPI3K、ClNBR1、ClATG3、ClATG5、ClATG7、ClATG8a、ClATG8d、ClATG8f、ClATG8i和ClATG8g的表達(dá)量與對(duì)照組相比均顯著上調(diào)。其中ClATG5、ClATG8g、ClNBR1、ClATG8i、ClPI3K的mRNA表達(dá)水平增長(zhǎng)最明顯，為對(duì)照組的6.64～10.52倍，另外ClBeclin1、ClATG3、ClATG7、ClATG8a、ClATG8d、ClATG8f的mRNA表達(dá)水平為對(duì)照組的2.64～5.24倍（圖3）。結(jié)果表明CCDaV侵染尤力克檸檬激活了自噬相關(guān)基因的表達(dá)。

2.3 CCDaV侵染誘導(dǎo)自噬體標(biāo)志蛋白 ATG8-PE表達(dá)

尤力克檸檬接種CCDaV 15 d后，蛋白印跡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)ATG8和ATG8-PE的積累量均顯著增加（圖4）。與對(duì)照組相比，感病葉片細(xì)胞內(nèi)ATG8-PE的積累增加了1.99倍。結(jié)果進(jìn)一步表明CCDaV侵染激活了尤力克檸檬中的細(xì)胞自噬反應(yīng)。

2.4 CCDaV編碼蛋白誘導(dǎo)細(xì)胞自噬能力鑒定

通過(guò)PCR擴(kuò)增分別得到CCDaV編碼的6個(gè)ORFs全長(zhǎng)序列：C1（810 bp）、C2（243 bp）、V1（765 bp）、V2（420 bp）、V3（300 bp）和V4（251 bp）。

將CCDaV編碼的各個(gè)蛋白分別與GFP-NbATG8f共表于本生煙48 h后，通過(guò)共聚焦觀察發(fā)現(xiàn)，V3和V4蛋白，分別與GFP-NbATG8f共表達(dá)時(shí)，自噬小體數(shù)量迅速增加。CCDaV編碼的其他蛋白分別與GFP-NbATG8f共表達(dá)時(shí)，本生煙中的自噬小體數(shù)量與對(duì)照（pART27-Myc-GUS）相似（圖5a、5b）。蛋白印跡分析的結(jié)果進(jìn)一步顯示，與對(duì)照組相比，V3和V4分別與GFP-NbATG8f共表達(dá)時(shí)，游離GFP的積累量分別增加了8.80倍和10.16倍（圖5c）。上述結(jié)果表明，V3、V4蛋白可能是CCDaV誘導(dǎo)自噬的重要因子。

3 討論與結(jié)論

3.1 討論

自噬是一種真核生物中的重要保護(hù)過(guò)程，當(dāng)植物受到特定信號(hào)刺激，如營(yíng)養(yǎng)匱乏、溫度脅迫、滲透脅迫或病原物侵染時(shí)，自噬會(huì)被大量誘導(dǎo)以清除受損細(xì)胞器或異常蛋白^［17-18］。前期研究顯示，柑橘黃化脈明病毒（Citrus yellow vein clearing virus，CYVCV）編碼的病毒蛋白TGB2、TGB3和CP分別與GFP-ATG8f共表于本生煙48 h后自噬相關(guān)基因表達(dá)顯著上調(diào)^［19］ 。本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照相比，CCDaV侵染尤力克檸檬15 d后，在葉肉細(xì)胞中出現(xiàn)了明顯的雙層膜囊泡結(jié)構(gòu)，液泡中也出現(xiàn)了類似自噬小體的結(jié)構(gòu)。此時(shí)，ClATG3、ClATG5、ClATG7、ClATG8a、ClATG8d、ClATG8f、ClATG8g、ClATG8i、ClBeclin1、ClPI3K和ClNBR1等自噬相關(guān)基因的表達(dá)量顯著上調(diào)。由此證明CCDaV可誘導(dǎo)植株發(fā)生細(xì)胞自噬反應(yīng)。

自噬在植物響應(yīng)病原菌侵染中發(fā)揮了重要作用。例如，自噬相關(guān)蛋白ATG2負(fù)調(diào)控?cái)M南芥對(duì)白粉病的抗性和白粉菌誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡^［20］ 。灰霉菌（Botrytis cinerea）誘導(dǎo)擬南芥自噬基因ATG18a的表達(dá)和自噬體的形成^［21］ 。柑橘黃龍病菌（Candidatus liberibacter asiaticus）分泌蛋白SDE3抑制寄主自噬促進(jìn)黃龍病菌侵染^［22］ 。此外，自噬在植物抵御病毒侵染中也發(fā)揮了重要的作用。Jiang等^［23］ 研究發(fā)現(xiàn)水稻條紋病毒（Rice stripe virus，RSV）的P3蛋白可以與本生煙中的NbPI3P相互作用，從而抑制P3作為沉默抑制子的活性，并誘導(dǎo)P3被自噬降解，進(jìn)而提高植株對(duì)RSV的抗性。此外，煙草鈣調(diào)蛋白樣蛋白rgs-Ca可通過(guò)與煙草蝕紋病毒（Tobacco etch virus，TEV）編碼的HC-Pro，以及黃瓜花葉病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）和番茄不孕病毒（Tomato aspermy virus，TAV）編碼的2b蛋白結(jié)合，從而誘導(dǎo)自噬，限制病毒侵染。為成功侵染植物，病毒也進(jìn)化出多種手段來(lái)抑制植物的自噬反應(yīng)^［24］ 。Yang等^［25］ 發(fā)現(xiàn)，大麥條紋花葉病毒（Barley stripe mosaic virus，BSMV）的γb蛋白可以通過(guò)阻止ATG7與ATG8的互作，從而抑制自噬體的形成。此外，CLCuMuV、TLCYnV、中國(guó)番茄黃化曲葉病毒（Tomato yellow leaf curl China virus，TYLCCNV）等雙生病毒編碼的βC1、C4、C1蛋白也可誘導(dǎo)自噬反應(yīng)^［26-28］。雖然前期研究顯示，TYLCV的V3蛋白參與了病毒的移動(dòng)，并具有沉默抑制子的功能^［29-30］，但關(guān)于雙生病毒V3和V4蛋白功能的研究較少，也尚無(wú)其參與細(xì)胞自噬反應(yīng)的報(bào)道。本研究發(fā)現(xiàn)，CCDaV編碼的V3和V4蛋白能夠誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的發(fā)生，但V3和V4蛋白如何與寄主蛋白互作，從而調(diào)控寄主的抗/感病反應(yīng)的機(jī)理還不清楚，今后將進(jìn)一步開(kāi)展相關(guān)研究。

3.2 結(jié)論

本研究首次證實(shí)CCDaV侵染的尤力克檸檬能誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞自噬反應(yīng)，其編碼的V3、V4蛋白可能是引起細(xì)胞自噬的關(guān)鍵因子。本研究結(jié)果為今后深入研究CCDaV與寄主的互作機(jī)制提供了重要參考。

致謝：感謝西南大學(xué)孫現(xiàn)超研究員提供的pART27載體。

參考文獻(xiàn)：

［1］DE DUVE C，WATTIAUX R．Functions of Lysosomes ［J］．Annual Review of Physiology，1966，28（1）：435-492．

［2］ TSUKADA M，OHSUMI Y．Isolation and Characterization of Autophagy-Defective Mutants of Saccharomyces Cerevisiae ［J］．FEBS Letters，1993，333（1-2）：169-174．

［3］ HEYDRICK S J，LARDEUX B R，MORTIMORE G E．Uptake and Degradation of Cytoplasmic RNA by Hepatic Lysosomes．Quantitative Relationship to RNA Turnover ［J］．Journal of Biological Chemistry，1991，266（14）：8790-8796．

［4］ LIU Y L，SCHIFF M，CZYMMEK K，et al．Autophagy Regulates Programmed Cell Death during the Plant Innate Immune Response ［J］．Cell，2005，121（4）：567-577．

［5］ LI F F，ZHANG C W，LI Y Z，et al．Beclin1 Restricts RNA Virus Infection in Plants through Suppression and Degradation of the Viral Polymerase ［J］．Nature Communications，2018，9（1）：1268．

［6］ NIU E B，LIU H，ZHOU H S，et al．Autophagy Inhibits Intercellular Transport of Citrus Leaf Blotch Virus by Targeting Viral Movement Protein ［J］．Viruses，2021，13（11）：2189．

［7］ LAMB C A，YOSHIMORI T，TOOZE S A．The Autophagosome：Origins Unknown，Biogenesis Complex ［J］．Nature Reviews Molecular Cell Biology，2013，14（12）：759-774．

［8］ NIU E B，YE C Z，ZHAO W Y，et al．Coat Protein of Chinese Wheat Mosaic Virus Upregulates and Interacts with Cytosolic Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase，a Negative Regulator of Plant Autophagy，to Promote Virus Infection ［J］．Journal of Integrative Plant Biology，2022，64（8）：1631-1645．

［9］ CAO B W，GE L H，ZHANG M Z，et al．Geminiviral C2 Proteins Inhibit Active Autophagy to Facilitate Virus Infection by Impairing the Interaction of ATG7 and ATG8 ［J］．Journal of Integrative Plant Biology，2023，65（5）：1328-1343．

［10］TONG X，ZHAO J J，F(xiàn)ENG Y L，et al．A Selective Autophagy Receptor VISP1 Induces Symptom Recovery by Targeting Viral Silencing Suppressors ［J］．Nature Communications，2023，14（1）：3852．

［11］GARNSEY S M．Citrus Chlorotic dwarf，a New Whitefly-Transmitted Disease in the Eastern Mediterranean Region of Turkey ［J］．International Organization of Citrus Virologists Conference Proceedings （1957-2010），1996，13（13）：220-225．

［12］GUO J，LAI X P，LI J X，et al．First Report on Citrus Chlorotic dwarf Associated Virus on Lemon in Dehong Prefecture，Yunnan，China ［J］．Plant Disease，2015，99（9）：1287．

［13］YANG Z，ZHANG L，ZHAO J F，et al．First Report of Citrus Chlorotic dwarf-Associated Virus on Pomelo in Nakhon，Thailand ［J］．Plant Disease，2020，104（4）：1262．

［14］ZRACHYA A，GLICK E，LEVY Y，et al．Suppressor of RNA Silencing Encoded by Tomato Yellow Leaf Curl Virus-Israel ［J］．Virology，2007，358（1）：159-165．

［15］QIN Y Y，ZHAO J F，WANG J J，et al．Regulation of Nicotiana benthamiana Cell Death Induced by Citrus Chlorotic Dwarf-Associated Virus-RepA Protein by WRKY 1 ［J］．Frontiers in Plant Science，2023，14：1164416．

［16］YE X，DING D D，CHEN Y，et al．Identification of RNA Silencing Suppressor Encoded by Citrus Chlorotic dwarf-Associated Virus ［J］．Frontiers in Microbiology，2024，15：1328289．

［17］KUSHWAHA N K，HAFRéN A，HOFIUS D．Autophagy-Virus Interplay in Plants：From Antiviral Recognition to Proviral Manipulation ［J］．Molecular Plant Pathology，2019，20（9）：1211-1216．

［18］HUANG X Q，CHEN S P，YANG X R，et al．Friend or Enemy：A Dual Role of Autophagy in Plant Virus Infection ［J］．Frontiers in Microbiology，2020，11：736．

［19］高海馨．柑橘黃脈病毒誘導(dǎo)細(xì)胞自噬機(jī)制的初步研究 ［D］．重慶：西南大學(xué)，2023．

［20］WANG Y P，NISHIMURA M T，ZHAO T，et al．ATG2，an Autophagy-Related Protein，Negatively Affects Powdery Mildew Resistance and Mildew-Induced Cell Death in Arabidopsis ［J］．The Plant Journal，2011，68（1）：74-87．

［21］LAI Z B，WANG F，ZHENG Z Y，et al．A Critical Role of Autophagy in Plant Resistance to Necrotrophic Fungal Pathogens ［J］．Plant Journal，2011，66（6）：953-968．

［22］SHI J X，GONG Y N，SHI H W，et al．‘Candidatus Liberibacter Asiaticus’ Secretory Protein SDE3 Inhibits Host Autophagy to Promote Huanglongbing Disease in Citrus ［J］．Autophagy，2023，19（9）：2558-2574．

［23］JIANG L L，LU Y W，ZHENG X Y，et al．The Plant Protein NbP3IP Directs Degradation of Rice Stripe Virus P3 Silencing Suppressor Protein to Limit Virus Infection through Interaction with the Autophagy-Related Protein NbATG8 ［J］．New Phytologist，2021，229（2）：1036-1051．

［24］NAKAHARA K S，MASUTA C，YAMADA S，et al．Tobacco Calmodulin-Like Protein Provides Secondary Defense by Binding to and Directing Degradation of Virus RNA Silencing Suppressors ［J］．Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2012，109（25）：10113-10118．

［25］YANG M，ZHANG Y L，XIE X L，et al．Barley Stripe Mosaic Virus Γb Protein Subverts Autophagy to Promote Viral Infection by Disrupting the ATG7-ATG8 Interaction ［J］．The Plant Cell，2018，30（7）：1582-1595．

［26］ZHOU T T，ZHANG M Z，GONG P，et al．Selective Autophagic Receptor NbNBR1 Prevents NbRFP1-Mediated UPS-Dependent Degradation of βC1 to Promote Geminivirus Infection ［J］．PLoS Pathogens，2021，17（9）：e1009956．

［27］YANG M，ISMAYIL A，GAO T，et al．Cotton Leaf Curl Multan Virus C4 Protein Suppresses Autophagy to Facilitate Viral Infection ［J］．Plant Physiology，2023，193（1）：708-720．

［28］LI F F，ZHANG M Z，ZHANG C W，et al．Nuclear Autophagy Degrades a Geminivirus Nuclear Protein to Restrict Viral Infection in Solanaceous Plants ［J］．New Phytologist，2020，225（4）：1746-1761．

［29］GONG P，TAN H，ZHAO S W，et al．Geminiviruses Encode Additional Small Proteins with Specific Subcellular Localizations and Virulence Function ［J］．Nature Communications，2021，12（1）：4278．

［30］GONG P，ZHAO S W，LIU H，et al．Tomato Yellow Leaf Curl Virus V3 Protein Traffics along Microfilaments to Plasmodesmata to Promote Virus Cell-to-Cell Movement ［J］．Science China Life Sciences，2022，65（5）：1046-1049．

責(zé)任編輯 王新娟