乙肝兩對半和DNA聯合檢驗在乙肝診斷中的價值劉金蘭

ValueofCombinedDetectionofHepatitisBVirusSerological Markers andDNA in theDiagnosisofHepatitisB

LIUJinlan

（DepartmentofClinicalLaboratory，TaiheCountyPeople'sHospital，Taihe3437Oo，Jiangxi，China

AbstractObeciestehfaiaigosfcpaitiepatiioalasdu Methodstotalof6OpatientsithhepatitisBadmitedtoTaieCountyPeople'sHsptalfroJanuaryO2OtoDcember23wereselecteds theresearcectsllpatitsstedfoatisBusroloalrkesdpoportoofdallei analyzdeaiisuiisipddaiie resultsfepatitisviusineentgeereopadsultseallositie（bHeb，ie accounted for the highest proportion（ 3 6 . 6 7 % ），followedby thebigthreepositive（HBcAb，HBeAg，HBsAg were positive）（ 1 6 . 6 7 % ；comparedwith othertypeoftnstantitaieecofepatitisBviusititsidalltositid difference was statistically significant（ Plt;0 . 0 5 .The DNA quantitative detection value of patients with mild damage was lower than that of patients withmoderatedamagandseveedamagendeDuantiativedetectionvalueofatientsitheveredmageashigherthantatfatients with moderate damage.The difference was statistically significant（ P=0 . 0 4 2 ）.Conclusion Hepatitis B virus serological markers combined with virus DNAquantificatiosiportantvaueintiagosisndevauatiofpatisBichcaniprovetedgosticccuracyroviden important basis forclinical diagnosis，and is worthy of application.

eywords：HepatitisB；HepatitisB virusserological markers；HBVDNA quantitative detectior

肝炎病毒中最常見的是乙型肝炎病毒（HBV），屬長度約為 3 . 2 k b 的DNA病毒，為小環狀病毒。目前，臨床用于檢測及確診HBV感染的方法主要是檢測血清中乙肝表面抗原（ H B s A g 的含量，與乙肝兩對半的其余4個項目聯合分析可了解患者的免疫現狀，但對病毒的傳染性強弱和復制情況并不清楚，因此當患者處于隱匿狀態時就容易發生漏檢[2，3]。由于分子診斷技術的發展，乙肝病毒DNA（HBV-DNA）定量檢測已普遍運用于臨床診斷，HBV-DNA的含量是HBV復制最直接、最有效的檢測指標，同時也可以用來判斷乙肝患者病情的嚴重程度[4，5]。基于此，本研究選取2020年1月-2023年12月縣人民醫院收治的60例乙肝患者為研究對象，對慢性乙肝患者的乙肝兩對半及乙肝病毒DNA定量檢測結果進行分析，現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選取2020年1月-2023年12月縣人民醫院收治的60例乙肝患者為研究對象，對所有患者實施乙肝兩對半和DNA聯合檢驗。60例患者中男31例，占比 5 1 . 6 7 % ，女29例，占比 4 8 . 3 3 % 年齡18＼～69歲，平均年齡（ （ 4 2 . 5 2 ± 1 3 . 0 4 ） 歲；病程6個月＼～4年，平均病程（ 年。所有患者一般資料比較，差異無統計學意義（ . Pgt;0 . 0 5 ） ，具有可比性。本研究經患者知情同意，并簽署知情同意書。1.2納入及排除標準納入標準：乙肝病毒性肝炎診斷以2019年版《中華醫學會肝病學分會慢性乙型肝炎防治指南》為標準；無乙肝病史者；非酒精因素、藥物因素所致慢性肝功能受損者；近期無抗病毒藥物使用史者。排除標準：檢查結果提示有甲型肝炎存在者；精神狀態異常或溝通交流能力異常，不利于研究工作開展者；臨床資料不完整者。

1.3方法

1.3.1主要儀器與試劑所有患者均行乙肝兩對半檢查和HBV-DNA定量檢查，其中，乙肝兩對半的檢測采用酶聯免疫法，測定試劑由上?？迫A生物工程股份有限公司提供。采用深圳市愛康生物科技股份有限公司生產的型號為AV-145的全自動酶聯免疫儀讀取和記錄結果，洗板機為該全自動酶聯免疫儀所附帶功能。AGS4800實時熒光定量PCR儀由杭州安譽科技有限公司提供。

1.3.2標本采集于早上空腹狀態下，抽取患者靜脈血 4 m l 與 3 m l ，分別置于免疫管中，放置在 溫育箱。溫育 5 m i n 將標本置于離心機中，轉速3 5 0 0 r / m i n ，時間 1 5 m i n ，高速離心后進行血清分離。血清標本按說明書直接上機進行檢測。

1.3.3乙肝兩對半檢測采用酶聯免疫法。 H B s A g 檢測過程中，每孔加入待測血清樣本 7 5 μ l ，其中，設陰性對照（3孔）陽性對照（1孔）以及質控管（1孔）；H B s A b ？ H B e A g ？ H B e A b ？ H B c A b 檢測過程中，設陰性對照（2孔）陽性對照（2孔）以及質控管（1孔）。H B s A g 檢測： 溫育 后每孔加入酶結合物5 0 μ l ，然后溫育 3 0 m i n ，洗板。洗板機洗板：選擇洗滌5次程序洗板后拍干。每孔加顯色劑A液、顯色劑B液各1滴，充分混勻，封板，置 孵育 3 0 m i n 每孔加入終止液1滴，混勻，上機。 H B s A b ， H B e A g 、HBeAb、HBcAg檢測：在相對應的孔加入待測血清和陽性陰性對照，質控品各 5 0 μ l ，再加相對應的酶5 0 μ l ，于 溫育 3 0 m i n ，洗板（和表面抗原一樣）拍干，每孔加顯色劑 A， B 各一滴，充分混勻，置 溫育 1 5 m i n ，然后再加終止液一滴，混勻，上機。用酶標儀讀數：取波長 4 5 0 n m （建議使用雙波長的酶標儀比色，參考波長 6 3 0 n m ），然后讀取各孔OD值。正常數值： 的結果判讀： S：待測樣本的OD值。 ⑥ S/COV：待測樣本和COV的比值。 當S/COV 大于或者等于1.0，說明該待測樣本 H B s A g 結果為陽性。 當S/COV小于1.0，說明該待測樣本HBsAg結果為陰性。 和HBeAg的結果判讀： 樣本的OD值小于COV值時，說明該樣本HBsAb檢測結果為陰性。 ⑥ 樣本的OD值大于或等于COV值時，說明該樣本HBsAb檢測結果為陽性。③ HBcAb和HBeAb的結果判讀： 樣本的OD值小于COV值時，說明該樣本HBcAb檢測結果為陽性。⑥ 樣本的OD值大于或等于COV值時，說明該樣本HBcAb檢測結果為陰性。研究中，上述指標數值超出常規數值上限或下限即為陽性。

1.3.4病毒DNA定量檢測以乙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒、熒光定量PCR檢測儀開展檢測工作。于試劑盒當中取出試劑，放置于室溫融化，以2 0 0 0 r p m 的條件開展為時10s的離心處理，將所需要管數設置為 n ，即為陰性對照（1管）標準管（4管）質控管（1管），各樣本測試反應體系配制 2 7 μ l PCR反應液， 3 μ l Taq酶。取DNA提取液（ ）、樣本上清液 （ 2 0 0 μ l） 依次加入至離心管當中，以 8 0 0 0 r / m i n 開展為時15s的震蕩混勻處理，于干式恒溫儀當中放置離心管，于 的條件下開展為時 1 0 m i n 的干浴處理，于 條件下開展為時 5 m i n 的離心處理。于PCR反應管當中加入經過處理的樣本上清液 2 0 μ l 加入反應管，以 8 0 0 0 r / m i n 開展為時1 5 s 的震蕩混勻處理后進行上機擴增。將PCR擴增循環的條件設置為 以及 ，循環為10個； s循環為30個。打開軟件后，選擇“NEWExperiment”，設置檢測模式為\"MultiClolrHydrolysis\"選取檢測通道FAM，于 狀態下，以電腦自動采集熒光信號開展數據分析處理，以獲取定量結果。陰性即為DNA定量檢測無數值/在 以下，陽性標準同其相反，指標值越大，則病毒復制活躍度和傳染性越強。

1.3.5檢測模式共6種檢測模式： ①H B s A g -乙肝病毒表面抗原為已經感染病毒的標志，并不反映病毒有無復制、復制程度、傳染性強弱。 ② HBsAb-乙肝病毒表面抗體為中和性抗體標志，是否康復或是否有抵抗力的主要標志。接種者，若僅此項陽性，應視為乙肝疫苗接種后正常現象。 ③ HBeAg-乙肝病毒e抗原為病毒復制標志。持續陽性3個月以上則有慢性化傾向。 ④ HBeAb-乙肝病毒e抗體為病毒復制停止標志。病毒復制減少，傳染性較弱，但并非完全沒有傳染性。 ⑤ HBcAb-乙肝病毒核心抗體為曾經感染過或正在感染者都會出現的標志。核心抗體IGM是新近感染或病毒復制標志，核心抗體 I g G 是感染后就會產生的，對于輔助兩對半檢查有一定意義。 ⑥ 前S1抗原（ ）主要存在血清中乙肝病毒表面，檢測前S1抗原主要是為了反映乙肝病毒感染與復制狀況，同時前S1抗原可作為藥物抗病毒療效的指標，是對HBV-DNA和HBeAg指標的補充和加強。

1.4觀察指標統計乙肝兩對半檢測結果大三陽（HBcAb、HBeAg、HBsAg均為陽性）、小三陽（HB-cAb、HBeAb、HBsAg均為陽性）占比。乙肝病毒DNA定量檢測結果大三陽患者的乙肝病毒DNA定量檢測數值。比較不同程度肝損害患者的乙肝病毒DNA定量檢測結果。

1.5統計學方法數據處理采用SPSS25.0統計學軟件，計量資料采取Kolmogorov-Smirnov（K-S）檢驗方法分析數據的正態性，滿足于正態性、方差齊性的條件下以 表示，對比行 t 檢驗。計數資料用 和（ % 表示，采用 檢驗， 為差異有統計學意義。

2結果

2.1乙肝兩對半以及乙肝病毒DNA定量檢測結果小三陽（HBcAb、HBeAb、HBsAg均為陽性）占比最高（ 3 6 . 6 7 % ），其次是大三陽（ 1 6 . 6 7 % ；與其他類型患者相比，大、小三陽患者的乙肝病毒DNA定量檢測值更高，差異有統計學意義（ Plt;0 . 0 5 ） ，見表1。

2.2不同程度肝損害患者的乙肝病毒DNA定量檢測結果比較輕度損害患者的DNA定量檢測值低于中度損害、重度損害患者，重度損害患者的DNA定量檢測值高于中度損害患者，差異有統計學意義 ，見表2。

3討論

臨床診斷肝炎的重要評價依據為血清轉氨酶水平升高。但是，結合臨床實踐，除該病以外的其他肝臟病變患者，其體內的血清轉氨酶也會升高，因此限制了這一指標在肝炎診斷中的臨床應用8。隨著醫療技術的進步，免疫學、生物學技術在肝炎病毒的發現過程中得到廣泛應用，為慢性乙肝的診斷開辟了全新的途徑。早期疾病檢驗與預防的目的是為了把握疾病不嚴重或對發展較慢的階段盡早展開針對性的治療，減緩疾病的進展以保證患者的生存質量。目前，乙肝兩對半、乙肝病毒DNA定量均為臨床診斷慢性乙肝的常用技術[10]。乙肝兩對半也就是乙肝五項，是使用范圍最廣的慢性乙型肝炎臨床診斷方法，同時，也為該疾病的血清指標以及實驗室科學指標[1]。五項指標包含：HbsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb[12]。其中，根據不同指標的陽性組合可以大致判斷病毒感染情況，了解疾病的治療進展以及患者的轉歸情況，對于慢性乙型肝炎疾病的預防與控制有深遠的臨床價值[13]。但對于乙肝病毒造成的肝損害程度評估能力不足，借助乙肝病毒DNA定量檢測與肝損害程度的關系分析，有利于進一步評價慢性乙肝患者的狀態[14，15]。

本研究結果顯示，60例患者中，大三陽10例（ 1 6 . 6 7 % ，小三陽22例 3 6 . 6 7 % 0。常規而言，乙肝病毒感染5個月后，患者體內會出現血清 H b s A g （ + ） 。乙肝病毒或乙肝疫苗對人體產生刺激而形成的抗體就是乙肝表面抗體，可以特異性與 H B s A g 結合，具有理想的病毒清除作用，為乙肝病毒的保護性抗體[。檢驗結果顯示，HBsAb陽性，則表示存在乙型肝炎病毒感染史，或接種過乙型肝炎病毒疫苗并產生抗體。乙肝病毒e抗原HBeAg源于病毒核心，在被分泌至細胞外之前會經基因組表達蛋白加工，可用于表示患者體內乙肝病毒復制較為活躍，傳染性較強[。如果這一指標持續陽性，超過90d，則表示患者疾病存在慢性轉變趨勢[5。HBeAg刺激所產生的特異性抗體就是HBeAb，可特異性與 H B e A g 結合。病毒復制是否被良好抑制的判斷性指標為HBeAb，若該指標數值陽性，說明病毒感染復制率較低，傳染性減少。乙肝病毒核心抗體HBcAb，是由于患者血清中的核心抗原短時間內裂解，但是依然會對機體產生刺激，形成特異性抗體，是慢性乙型肝炎侵入機體后，機體血液中最早存在的特異性抗體，對于乙型肝炎的診斷具有重大的臨床意義[18。大三陽提示傳染性較強的急性或慢性乙肝，小三陽提示傳染性較弱的急性或慢性乙肝。同時，與其他類型患者相比，大三陽患者的乙肝病毒DNA定量檢測數值比其他類型患者更高（ Plt;0 . 0 5 ） ，輕度損害患者的DNA定量檢測結果低于中度損害、重度損害患者，重度損害患者的DNA定量檢測結果高于中度損害患者（ Plt;0 . 0 5 ）。認為乙肝病毒DNA定量檢測可用于評估乙肝病毒的傳染性強弱[。而從不同程度肝損害與乙肝病毒DNA定量檢測結果的關系可以看出，輕度損害的DNA定量檢測結果偏低，而重度損害的DNA定量檢測結果偏高，在乙肝兩對半檢測的基礎上聯合使用乙肝病毒DNA定量檢測，對于進一步掌握患者感染后的狀態具有更加準確、便捷的作用。

綜上所述，乙肝兩對半聯合病毒DNA定量在乙肝診斷及評估中具有重要價值，能夠提高診斷準確率，為臨床診斷提供重要依據，值得應用。

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收稿日期：2024-04-18；修回日期：2024-05-28

編輯/肖婷婷