牛病毒性腹瀉的流行病學特征、診斷技術及綜合防控策略研究

牛病毒性腹瀉又被稱為病毒性腹瀉黏膜病，是由牛病毒性腹瀉病毒感染所引發的一種接觸性傳染性疾病，屬于國家二類動物疫病，不同年齡階段的牛群都容易受到該種病毒的感染，尤其是對幼齡牛造成的危害最為嚴重，臨床上患病牛主要表現為腹瀉、胃腸炎、消化道黏膜糜爛，嚴重的壞死，對牛的正常生長發育造成嚴重威脅。西藏地處高海拔地帶，牦牛養殖業是當地的支柱性產業和主導產業，隨著牦牛產業結構調整力度的逐漸加大，牛養殖數量養殖規模逐漸增加和擴大，在此背景下以病毒性腹瀉為代表的傳染性疾病在養殖場中周期性傳播蔓延。

一、牛病毒性腹瀉的流行病學

1、病原特征

牛病毒性腹瀉病毒是一種屬于病毒科、腸道病毒屬的單股RNA病毒。BVDV病毒粒子呈球形，直徑約為 30～32nm 牛病毒性腹瀉病毒根據基因型和生物型的不同，可以分為不同的病毒株。BVDV基因型分為兩種，分別為NCP和SBP。這兩種基因型在病毒的生物學特性、流行病學特征和免疫原性方面存在一定差異。BVDV生物型分為三種，分別為BVDV-1、BVDV-2和BVDV-3。這三種生物型在病毒的抗原性、宿主范圍和臨床表現方面有所不同。BVDV-1引起病毒性腹瀉和呼吸道癥狀。病毒具有較高的變異性，可能導致不同程度的臨床癥狀。BVDV-2主要引起病毒性腹瀉。病毒在牛群中的傳播速度較慢，但可能導致較為嚴重的腹瀉癥狀。BVDV-3感染牛、羊、兔等多種動物，引起病毒性腹瀉。病毒顆粒的外部包裹有一層由宿主細胞膜組成的囊泡，使其能夠在宿主細胞間進行傳播。病毒主要感染牛，引起牛病毒性腹瀉。病毒可通過直接接觸、飛沫傳播和糞一口途徑傳播。病毒在牛體內的靶細胞為腸道上皮細胞，可導致腸道炎癥、糜爛和壞死。此外，BVDV還可以引起牛的先天性感染，導致胎兒發育異常、死亡或出生缺陷。BVDV的基因組為單股正鏈RNA，長度約為 11～12kb. 。病毒基因組編碼四種結構蛋白，包括衣殼蛋白(VP1、VP2和VP3）核衣殼蛋白(NP)以及一種非結構蛋白（NS2）。BVDV的復制過程主要發生在宿主細胞的核糖體中，病毒利用宿主細胞的生物合成機制合成自身蛋白和RNA。

牛病毒性腹瀉病毒對理化因素具有一定的抵抗力，可在室溫下長時間保持活性。病毒對酸、堿、洗滌劑等有一定的耐受性，但高溫、紫外線等條件可使其失活。

2、致病機理

BVDV通過直接接觸、飛沫傳播或糞一口途徑進入宿主牛的體內。病毒首先感染腸道上皮細胞，然后進入血液和淋巴系統，進一步擴散到其他組織和器官。BVDV進入宿主細胞后，其基因組RNA被釋放并翻譯成病毒蛋白。病毒蛋白的合成和組裝過程在宿主細胞的核糖體和內質網中進行。病毒基因組RNA在宿主細胞內進行復制，形成新的病毒基因組RNA。新合成的病毒基因組RNA通過宿主細胞的核糖體進行轉錄和翻譯，生成新的病毒蛋白。這些蛋白包括結構蛋白（如衣殼蛋白、核衣殼蛋白）和非結構蛋白（如NS2蛋白）。病毒蛋白在宿主細胞內組裝成完整的病毒粒子，并從細胞表面釋放到細胞外。釋放的病毒粒子可以進一步感染其他宿主細胞，引發病毒血癥和全身感染。BVDV病毒粒子表面的囊泡可以掩蓋病毒抗原，使其逃避免疫監視和清除。病毒在宿主細胞內繁殖過程中，會引發宿主細胞的炎癥、凋亡和壞死等病理損傷。炎癥反應和病理損傷可導致腸道黏膜糜爛、脫落，從而引起腹瀉等癥狀。BVDV感染可導致慢性病毒血癥和持續性感染。在持續感染期間，病毒可侵犯多個組織和器官，引起不同程度的病理損傷。病理損傷的累積可能導致牛生長發育受阻、繁殖障礙和死亡等嚴重后果。

3、流行特點

牛病毒性腹瀉病毒的傳染源主要是感染牛和隱性感染牛。病毒存在于感染牛的糞便、尿液、唾液、血液和生殖道分泌物中。隱性感染牛雖無明顯臨床癥狀，但仍然可以排毒，成為重要的傳染源。此外，病毒還可以通過胎盤傳播，導致胎兒感染。牛病毒性腹瀉病毒的傳播途徑主要有直接接觸、間接接觸、飛沫傳播和胎盤傳播。感染牛與易感牛直接接觸，病毒通過分泌物和排泄物傳播；病毒可以通過污染的飼料、飲水、環境等媒介傳播；另外，病毒隨感染牛的呼吸道分泌物形成的飛沫傳播；病毒也可以通過感染母牛的胎盤傳播給胎兒。牛病毒性腹瀉病毒主要感染牛，包括肉牛、奶牛和役牛等。不同品種和年齡的牛均易感，但以犢牛和青年牛的易感性較高。隱性感染牛和康復牛也可以成為傳染源，導致其他牛感染。牛病毒性腹瀉病毒在不同地區和季節的流行特點不同，通常呈現地方性流行。病毒在牛群中傳播速度較慢，但易造成持續性感染。流行季節主要與病毒在環境中的存活時間和牛的飼養管理有關。病毒在溫暖、潮濕的環境中存活時間較長，因此，春夏季和秋季是該病的高發期。

二、牛病毒性腹瀉的臨床癥狀

牛病毒性腹瀉可分為急性型和慢性型。病毒性腹瀉的潛伏期一般為2\\~14d，但也有報道稱潛伏期可長達 21d 潛伏期長短與病毒株、感染強度、宿主免疫狀態等因素有關。急性病毒性腹瀉的發病速度較快，病程較短。牛感染后，通常在24\\~48h內出現癥狀。患病牛體溫可達 40～42^°C ，持續 2～3d 出現嚴重腹瀉現象水樣便，惡臭，帶有大量黏液和泡沫。由于腹瀉導致水分丟失，病牛出現脫水癥狀，口渴、尿量減少。病牛精神沉郁，食欲減退或廢絕，反芻減少。部分病牛出現咳嗽、流鼻涕等呼吸道癥狀。病程中，病牛體重迅速減輕，消瘦。慢性型病毒性腹瀉的病程較長，通常在數周至數月內逐漸加重。病牛長期排出水樣便，帶有黏液和泡沫，導致脫水和營養不良。一段時間之后患病牛體重逐漸減輕，體質虛弱。慢性感染對犢牛和青年牛的生長發育影響較大，可能導致生長停滯、發育不良。此外，慢性感染可能導致母牛出現繁殖障礙，如受胎率降低、流產、產弱胎等。

三、牛病毒性腹瀉的病理變化

病毒主要侵犯牛的胃腸道和全身多個器官，導致病理組織學變化。病毒感染初期，腸黏膜上皮細胞變性、脫落，導致黏膜充血、水腫。病程中，腸黏膜出現糜爛、潰瘍，嚴重時可導致腸道出血。病毒感染導致淋巴濾泡和集合淋巴結充血、水腫，出現炎癥細胞浸潤。病毒感染還會導致肝細胞變性、壞死，出現肝細胞索紊亂、氣球樣變等。另外，病毒感染引起肝竇充血，伴有炎癥細胞浸潤。脾臟充血、腫大，邊緣鈍圓，脾髓充血，伴有點狀出血和炎癥細胞浸潤。肺泡充血、水腫，出現肺泡壁增厚、透明膜形成等。肺泡腔內有炎癥細胞浸潤，導致肺泡壁增厚、實變等。腎小球充血，伴有腎小球毛細血管內皮細胞增生和炎癥細胞浸潤。腎小管上皮細胞變性、壞死，出現腎小管萎縮、擴張等。

四、牛病毒性腹瀉的實驗室診斷

1、病毒分離鑒定

牛病毒性腹瀉病毒分類培養常用的培養細胞有牛腎細胞（BHK-21）、犢牛睪丸細胞(MDTC）、人胚肺細胞(MRC-5)和豬腎細胞(LLC-MK2)等。這些細胞系對BVDV具有良好的生長特性，可以用于病毒的分離和培養。在操作過程中從病牛的腹瀉糞便、腸黏膜或血液等樣本中取樣，將樣本接種到培養細胞中，如BHK-21或MDTC等。在適當的溫度和濕度下，培養細胞一段時間(通常為3\\~7d)。通過顯微鏡觀察細胞病變特征，如細胞變性、壞死、凋亡等。收集培養后的細胞培養液，進行病毒濃縮和純化。通過血清中和試驗、免疫熒光抗體試驗、PCR等方法對病毒進行鑒定。病毒感染初期，細胞出現變性，細胞質濃縮，細胞核濃縮。病毒感染加重時，細胞出現壞死，細胞質溶解，細胞核碎裂。病毒感染導致細胞凋亡，出現凋亡小體，細胞核固縮，細胞質溶解。

2、熒光定量PCR檢測

熒光定量PCR檢測儀器通常包括熱循環儀、熒光檢測儀和電腦等。熱循環儀能夠進行PCR反應的加熱和冷卻循環，如95℃高溫滅活 ，55～60^°C 退火等。熒光檢測儀能夠檢測PCR反應中的熒光信號，并將其轉換為數據。電腦用于控制儀器設備，運行相關的軟件程序，對檢測數據進行處理和分析。從病牛的腹瀉糞便、腸黏膜或血液等樣本中提取病毒RNA。根據BVDV的基因序列，設計特異性引物。將病毒RNA、引物、dNTPs、MgCI2、緩沖液和熒光染料等混合，形成反應體系。將反應體系放入熱循環儀中，進行PCR反應，通常包括高溫滅活、變性、退火和延伸等步驟。將PCR反應后的產物進行熒光檢測，通過熒光檢測儀收集熒光信號。熒光信號轉換為Ct值，用于判斷樣本中病毒含量。Ct值小于30表示病毒含量較高，病?？赡芴幱诩毙愿腥酒凇t值在30\\~35之間表示病毒含量較低，病?？赡芴幱诼愿腥酒?。Ct值大于35表示病毒含量極低或檢測不到，病牛可能已經康復或未感染。

3、環介導等溫擴增

環介導等溫擴增技術是一種快速檢測BVDV的方法，適用于現場和實驗室診斷。從病牛的腹瀉糞便、腸黏膜或血液等樣本中提取病毒RNA。將病毒RNA、引物、dNTPs、MgCI2、緩沖液和熒光染料等混合，形成反應體系。將反應體系放入恒溫擴增儀中，進行LAMP反應，通常需要 1～2h LAMP反應后的產物進行熒光檢測，通過熒光檢測儀收集熒光信號。將熒光信號轉換為Ct值，用于判斷樣本中病毒含量。Ct值小于30可以判定病毒含量較高，病?？赡芴幱诩毙愿腥酒凇t值在30\\~35表示病毒含量較低，病?？赡芴幱诼愿腥酒凇t值大于35可以判定病毒含量極低或檢測不到，病牛可能已經康復或未感染。

五、牛病毒性腹瀉治療方案

1、西藥治療方案

牛病毒性腹瀉目前尚無特效治療方法，主要采取對癥治療和支持療法。緩解患病牛呼吸道癥狀，選擇使用氨茶堿每 10kg 體重使用 100mg ，一次用量。選擇使用藥用炭吸附毒素，緩解腹

118|農天致富液

瀉癥狀，每 10kg 體重使用5g，每天用藥一次連續使用2\\~3次。抗菌消炎，選擇使用磺胺類藥物和頭孢類藥物。常見的磺胺類藥物諸如復方磺胺嘧啶注射液，常用劑量為每 1kg 體重，家畜0.2\\~0.3mL ，每天肌內注射2次，連用 5d 磺胺類藥物具有抗菌和抗炎作用，可以預防或治療細菌感染。頭孢類藥物具有抗菌作用，可以預防或治療細菌感染。在采用上述治療，同時還需要加強支持治療，補充電解質推薦使用 5% 葡萄糖氯化鈉注射液500\\~1000mL ，并搭配使用 20% 的安鈉咖注射液 10mL，10% 的維生素C注射液 10mL ，用于補充病牛因腹瀉導致的電解質丟失。每天用藥一次，連續使用 3～5d

2、中藥治療方案

在中醫治療方面，主要采取辨證施治的原則，根據病牛的不同癥狀和體質，采取相應的中藥組方進行治療。首先，濕熱內蘊證。病牛表現為腹瀉、糞便呈水樣或糊狀，有腥臭味，食欲不振，口渴，舌苔黃厚。治療原則為清熱利濕。其次，脾胃虛弱證。病牛表現為腹瀉、食欲不振、精神不振、消瘦，舌質淡、舌苔白。治療原則為健脾和胃。再次，氣血兩虛證。病牛表現為腹瀉、消瘦、乏力、食欲不振，舌質淡、舌苔白。治療原則為益氣補血。濕熱內蘊證推薦使用黃連 10g 黃芩 15g 黃柏 10g 厚樸 10g 、陳皮 10g 澤瀉15g 、車前子 15g 茯苓 15g_? 脾胃虛弱證推薦應用黨參 20g 、白術15g 茯苓 15g 炙甘草 山藥 20g 砂仁 10g 薏苡仁 20g 、陳皮10g_? 。氣血兩虛證推薦使用當歸 15g 熟地黃 20g 川芎 10g 、白芍15g 黨參 20g 、白術 15g 茯苓 15g 炙甘草 6g_? 上述中藥組方加水 1500～2000mL ，文火煎煮 40～50min ，剩余藥液 1000～1200mL 每頭病牛每天口服中藥煎劑 500mL ，分2次喂服，連用5\\~7d。在使用中藥治療時，應根據病牛的體重、年齡、病情等因素調整藥物劑量和周期。同時，注意中藥的副作用和相互作用，遵循獸醫規范，綜合采取多種治療措施，以提高病牛的康復率。

六、牛病毒性腹瀉的預防措施

1、加強檢疫

在預防期間，對牛群進行檢疫檢驗是關鍵環節。對牛群進行臨床檢查，觀察動物的精神、食欲、體溫等狀況，發現疑似病例要及時隔離、檢測和治療。血清學檢測是檢測牛群BVDV感染的主要方法，包括酶聯免疫吸附試驗(ELISA)和病毒中和試驗等。血清學檢測的優點是操作簡便、結果快速，但可能會出現假陰性或假陽性結果。病毒核酸檢測是檢測牛群BVDV感染的金標準方法，可以直接檢測病毒的RNA，包括實時熒光定量PCR(qPCR)和巢式PCR等。病毒核酸檢測的優點是靈敏度高、特異性強，但需要專業設備和較長時間。檢疫檢驗工作開展過程中應該著重收集牛群的基本信息、來源、免疫記錄等，對牛群進行臨床檢查，發現疑似病例及時隔離。采集血清樣本，進行血清學檢測，采集疑似病例的樣本(如血液、乳汁等），進行病毒核酸檢測。對于病毒核酸檢測陽性的樣本，進行病毒分離培養。根據檢測結果，分析牛群的感染狀況，制定相應的預防和控制措施。將檢測結果報告給養殖場主，指導其進行疫病防控。

2、強化免疫接種

根據當地疫病、疫苗供應情況和牛群狀況，制定合理的免疫接種程序。一般來說，初次免疫接種應在牛出生后3\\~5周進行，之后間隔3\\~4周進行一次強化免疫接種。對于已經感染的牛群，可以根據抗體檢測結果，制定相應的免疫接種計劃。目前市場上常用的BVD疫苗有多種，劑量和免疫程序也有所不同。一般而言滅活疫苗每頭牛初次免疫接種劑量為 2～4mL ，之后每次接種劑量為 1～2mL 對于懷孕母牛，可在產前1\\~2個月選擇滅活疫苗進行免疫接種，以保護新生犢牛。肌肉注射是最常用的接種方法，適用于各種年齡段的牛。皮下注射和口服接種方法適用于犢牛和懷孕母牛。疫苗接種之后要加強抗體檢測，對于多次免疫接種不達標的牛群作為帶毒牛淘汰處理。

牛病毒性腹瀉是一種由病毒性腹瀉病毒引起的常見牛類傳染病，對養殖業和畜牧業造成了嚴重影響。牛病毒性腹瀉是影響牛群健康和生產性能的重要因素之一，造成重大經濟損失?；疾∨Ｖ簧a力下降，生長發育延遲，乳量減少，肉牛肉質下降，導致養殖業主遭受經濟損失。疫病暴發會給農牧民造成心理壓力，增加養殖業主的經營難度和負擔。由于該種疾病對養殖業造成極大威脅，防控疾病有助于保護養殖業可持續發展，維護農牧業的經濟收益和社會穩定。為此在養殖管理期間，就需要加強對疾病的針對性防控。通過科學的預防和控制措施，減少疾病發生率，促進牛群生長發育，提高乳量和肉產量，增加養殖業主的經濟利益。同時，政府也應加強對畜牧業的指導和支持，持續推動養殖業的整體防控水平的提升。

（作者單位：851100西藏自治區浪卡子縣農業農村局）