C57BL/6小鼠急性潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型的對(duì)比及優(yōu)化

中圖分類號(hào)：R574 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1000-2367（2025）04-0124-08

潰瘍性結(jié)腸炎（UC）是一類炎癥性腸?。↖BD），屬于自身免疫性疾?。ˋID）范疇.該病癥缺乏特異性表現(xiàn)，其病因尚未被完全揭示，治療難度較大，通常存在腸黏膜炎癥的緩解與復(fù)發(fā)表現(xiàn)，始發(fā)部位多為直腸，且連續(xù)病變可累及至結(jié)腸[1-2].臨床癥狀包括：復(fù)發(fā)性或持續(xù)性腹瀉伴有腹痛，便血或黏液膿血便，病情嚴(yán)重時(shí)可引發(fā)局部或全身并發(fā)癥，并增加患癌的風(fēng)險(xiǎn)[3」.歷史數(shù)據(jù)顯示，歐洲與北美發(fā)生率較高.然而，近些年UC在亞洲、非洲和南美洲的患病率迅速上升，已成為遍及全球性的重大疾病[4-5].在探索發(fā)病機(jī)制、診斷和治療、新藥研發(fā)等方面的科學(xué)研究中，必須以動(dòng)物模型為基礎(chǔ)進(jìn)行臨床前研究.因此，理想的UC動(dòng)物模型至關(guān)重要.至今，科研人員已探索建立了諸多不同的UC動(dòng)物模型，包括化學(xué)誘導(dǎo)、微生物誘導(dǎo)、過繼性T細(xì)胞遷移、自發(fā)突變、基因工程等，在這些模型中，化學(xué)誘導(dǎo)模型具有低成本、可控性良好等多種優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用廣泛[6-7].本研究對(duì)常用的下述3類化學(xué)誘導(dǎo)UC的方法進(jìn)行了對(duì)比： ① 葡聚糖硫酸鈉（DSS）造模法； ②2，4，6- 三硝基苯磺酸-乙醇（TNBS）造模法; ③ 惡唑酮（OXZ）-乙醇造模法[8-10].為指導(dǎo)后期選擇UC 造模方法，研究發(fā)病病機(jī)與治療思路提供科學(xué)參考.

材料及方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇SPF級(jí)C57BL/6小鼠、雄性、 .6～8 周齡，共44只，均購自斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司，

實(shí)驗(yàn)單位使用許可證編號(hào)：SYXK（京）2022-0022.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均在附屬北京友誼醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心開展，飼養(yǎng)方法遵循國家衛(wèi)生研究院確立的《實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物指南》，正式實(shí)驗(yàn)前，先進(jìn)行7d適應(yīng)性飼養(yǎng).該研究經(jīng)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理批準(zhǔn)號(hào)：21-2015）.

1.2 主要試劑及儀器

DSS（MP Biomedicals，S8634）;4-乙氧基亞甲基-2-苯基-2-惡唑啉-5-酮（惡唑酮，Sigma 公司，862207）；TNBS（Sigma 公司，SLCG2384）;HE染液（武漢博爾夫生物科技有限公司，BH0001）;阿利新藍(lán)染色液（南京森貝伽生物科技有限公司，BP-DL242）;光學(xué)顯微鏡（尼康，ECLIPSE CI）;熒光定量 PCR 儀（ABI，QuantStudio 7 Flex）.

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 建立DSS誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎動(dòng)物模型

隨機(jī)將 16 只小鼠分為2組，每組8只，分別設(shè)為空白對(duì)照組（CON）和 DSS 模型組.稱取 DSS 粉末 30g ，置于 1L 蒸餾水中充分溶解，配制成 30g/L DSS溶液.對(duì)DSS組小鼠實(shí)施1周的 30g/L DSS溶液自由飲用處理，CON組則采取正常飲水.第8天，DSS組調(diào)整為正常飲水[1.第9天，采用經(jīng)腹腔注入戊巴比妥鈉的方式，對(duì)各組小鼠實(shí)施麻醉后安樂死處理，解剖獲取結(jié)腸，并對(duì)結(jié)腸狀況展開觀察和測(cè)量.通過預(yù)冷生理鹽水對(duì)結(jié)腸實(shí)施清洗處理，采集 1cm 與盲腸端接近的結(jié)腸組織放入RNA保存液內(nèi)， -20^°C 存儲(chǔ)，剩余結(jié)腸組織則先經(jīng)瑞士卷卷腸后，用 40g/mL 多聚甲醛浸泡 24h 后，再實(shí)施石蠟包埋與切片處理，并行蘇木精伊紅（HE）與阿利新藍(lán)（AB）染色處理，最后在顯微鏡下觀察并進(jìn)行圖像掃描.

1.3.2 建立OXZ誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎動(dòng)物模型

隨機(jī)將12只小鼠分為2組，每組6只，分別設(shè)為空白對(duì)照組（CON）和OXZ模型組，每組6只.OXZ組接受背部剃毛處理，面積約為 2cm×2cm ，剃毛處涂抹質(zhì)量分?jǐn)?shù) 3% 的OXZ（溶解于無水乙醇中） 200μL ，自然風(fēng)干，1d后重復(fù)1次，CON組采用生理鹽水對(duì)照處理.致敏后第5天造模，造模前 24h 禁食，抓握小鼠輕撫腹部誘導(dǎo)其排便，使用異氟烷輕度麻醉后，使小鼠頭朝下，用直徑 1.6mm 的無菌聚乙烯灌胃導(dǎo)管連接1mL 注射器，用甘油涂抹導(dǎo)管表面進(jìn)行潤滑，輕輕插入肛門，進(jìn)入約 4cm ，注射質(zhì)量分?jǐn)?shù) 1%OXZ （溶解于體積分?jǐn)?shù) 50% 乙醇溶液） 150μL ，并保持肛門高位至少 30s ，避免倒流，待清醒后正常喂養(yǎng).CON組小鼠采用生理鹽水對(duì)照處理.第7天采用經(jīng)腹腔內(nèi)注入戊巴比妥鈉的方式，對(duì)各組小鼠實(shí)施麻醉后安樂死處理，解剖獲取結(jié)腸，并對(duì)結(jié)腸狀況展開觀察和測(cè)量.通過預(yù)冷生理鹽水對(duì)結(jié)腸實(shí)施清洗處理，采集 1cm 與盲腸端接近的結(jié)腸組織放入RNA保存液內(nèi)， -20^°C 存儲(chǔ)，剩余結(jié)腸組織則先經(jīng)瑞士卷卷腸后，用 40g/mL 多聚甲醛浸泡24h 后，再實(shí)施石蠟包埋與切片處理，并行蘇木精伊紅（HE）與阿利新藍(lán)（AB）染色處理，最后在顯微鏡下觀察并進(jìn)行圖像掃描.

1.3.3 建立TNBS誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎動(dòng)物模型

隨機(jī)將16只小鼠分為2組，每組8只，分別設(shè)為空白對(duì)照組（CON）和TNBS模型組.造模前 24h 禁食處理，抓握小鼠輕撫腹部誘導(dǎo)其排便，使用異氟烷輕度麻醉后，使小鼠頭朝下，用直徑 1.6mm 的無菌聚乙烯灌胃導(dǎo)管連接 1mL 注射器，用甘油涂抹導(dǎo)管表面進(jìn)行潤滑，輕輕插入肛門，進(jìn)入約 4cm ，注射TNBS（質(zhì)量分?jǐn)?shù) 5% ）與無水乙醇體積比為 1：1 的溶液 100μL ，保持肛門高位至少30s防止倒流.待清醒后放入籠中，12h 后再灌注一次，具體操作同前，CON組小鼠則采用生理鹽水對(duì)照處理.第9天采用經(jīng)腹腔內(nèi)注入戊巴比妥鈉的方式，對(duì)各組小鼠實(shí)施麻醉后安樂死處理，解剖獲取結(jié)腸，并對(duì)結(jié)腸狀況展開觀察和測(cè)量.通過預(yù)冷生理鹽水對(duì)結(jié)腸實(shí)施清洗處理，采集 1cm 與盲腸端接近的結(jié)腸組織放人RNA保存液內(nèi)， -20^°C 存儲(chǔ)，剩余結(jié)腸組織則先經(jīng)瑞士卷卷腸后，用體積分?jǐn)?shù) 4% 多聚甲醛浸泡 24h 后，再實(shí)施石蠟包埋與切片處理，并行蘇木精伊紅（HE）與阿利新藍(lán)（AB）染色處理，最后在顯微鏡下觀察并進(jìn)行圖像掃描.

1.3.4 疾病活動(dòng)指數(shù)（diseaseactivity index，DAI）評(píng)分

在實(shí)驗(yàn)過程中，每日15：00對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重進(jìn)行監(jiān)測(cè)記錄，對(duì)基本狀況展開觀察，查看精神狀況、排便情況等，按照DAI評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[11]進(jìn)行疾病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分（見附錄表 S1），DAI總分為體質(zhì)量下降評(píng)分、糞便性狀評(píng)分、便血情況評(píng)分三者的合計(jì)值.

1.3.5 結(jié)腸黏膜組織學(xué)損傷評(píng)分[11]

此項(xiàng)評(píng)分涉及以下4個(gè)方面：是否發(fā)生炎癥、病變面積、病變深度、隱窩受損程度.評(píng)分范圍是 0～4 分.將病變結(jié)腸組織掃描圖像送至病理科，由2名病理專家負(fù)責(zé)查看組織學(xué)變化，根據(jù)組織病理評(píng)分相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)，采取盲法進(jìn)行評(píng)分（見附錄表S2）.

1.3.6 RT-qPCR檢測(cè)結(jié)腸細(xì)胞因子

通過Trizol試劑盒對(duì)結(jié)腸組織的總RNA進(jìn)行提取，再對(duì)RNA濃度展開測(cè)定，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄試劑盒完成cDNA 的逆轉(zhuǎn)錄，再借助實(shí)時(shí)定量PCR儀對(duì) IL–6、TNF–α、IL–1β 于組織內(nèi)的表達(dá)水平展開測(cè)定，內(nèi)參選擇GAPDH.序列IL-6寡核苷酸引物序列為上游 5^′ -AGCCAGAGTCCTTCAGAGAGA- 3^′ ；下游 5^′ -GC-CACTCCTTCTGTGACTCC- 3^′ ，IL-1β寡核苷酸引物序列為上游 5^′ -TGTGAAATGCCACCTTTTGA- 3^′ ;下游 5^′ -GTCAAAGGTTTGGAAGCAG- ?3^′ ， TNF-α 寡核苷酸引物序列為上游 5^′ -CTCCAGGCGGTGC-CTATGT- 3^′ ；下游 5^′ -GAAGAGCGTGGTGGCCC- 3^′ ，mGAPDH寡核苷酸序列為：上游 5^′ -AGGTCGGT-GTGAACGGATTTG- 3^′ ；下游 5^′ -GGGGTCGTTGATGGCAACA反應(yīng)條件為 95°C 預(yù)變性 2min，95° （204號(hào) 5s，60^°C30s ，共 40個(gè)循環(huán).結(jié)果采用 2^-ΔΔct 法進(jìn)行定量分析，計(jì)算目的基因的拷貝數(shù)并比較.

1.3.7 數(shù)據(jù)處理

采用GraphPad Prism 8軟件，各組所得數(shù)值皆為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（SE）.數(shù)據(jù)正態(tài)分布時(shí)，總體均數(shù)差異性對(duì)比所用方法為 Ψ_t 檢驗(yàn)與單因素方差分析（ANOVA）.進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，若具方差齊性，用ANOVA對(duì)總體均數(shù)差異性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，若缺乏方差齊性，則采取秩和檢驗(yàn).1組及以上數(shù)列若為偏態(tài)分布，選擇非參數(shù)檢驗(yàn) .Plt;0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物基本情況

CON組動(dòng)物毛發(fā)光亮，反應(yīng)靈敏，精神活躍，進(jìn)食無異常，大便為紡錘樣，無腹瀉，無便血，體質(zhì)量穩(wěn)定升高.DSS組小鼠毛發(fā)干燥，精神不活躍，反應(yīng)不敏捷，使用 30g/L DSS誘導(dǎo)的小鼠在 3～5 d開始顯示出明顯的飲食和飲水減少、腹瀉、肉眼可見的血便、體質(zhì)量下降等癥狀，分別在第6天和第7天死亡1只小鼠，死亡率為 25% .恢復(fù)正常飲水后2d體質(zhì)量稍有恢復(fù)，其他癥狀持續(xù).OXZ組：在模型建立的第2天，小鼠開始表現(xiàn)出各種程度的懶散、大便不成形、體質(zhì)量下降，實(shí)驗(yàn)期間未發(fā)生死亡.自第4天起，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體質(zhì)量慢慢回升，第7天左右病情開始好轉(zhuǎn).TNBS 組建模后的第2天，動(dòng)物出現(xiàn)腹瀉，且慢慢加劇，進(jìn)而出現(xiàn)黏液膿血便，飲食減少，體質(zhì)量降低，倦怠懶動(dòng)，見拖尾、拱背表現(xiàn).在第4天和第6天，分別有1只小鼠死亡.死亡率達(dá)到 25% ，從第4天開始，體質(zhì)量逐步增加，于第8天左右病情開始出現(xiàn)好轉(zhuǎn).體質(zhì)量變化率如圖1所示.

2.2 DAI評(píng)分

參照 Hamamoto標(biāo)準(zhǔn)對(duì)每只小鼠進(jìn)行評(píng)分，CON 組小鼠DAI評(píng)分基本為O分，DSS 組小鼠給藥期間DAI評(píng)分進(jìn)行性升高，第3天開始與CON組比出現(xiàn)顯著性差異，隨之逐漸加重，正常飲水后兩天仍保持較高評(píng)分.OXZ組造模后第2天DAI評(píng)分顯著升高，癥狀可維持 5～6d ，第7天左右可見癥狀緩解.TNBS組造模后第2天DAI評(píng)分顯著升高，癥狀可維持 6～7d ，第8天左右可見癥狀緩解，結(jié)果見圖2.

（a）DSS誘導(dǎo)急性UC造模期間小鼠DAI評(píng)分；（b）OXZ誘導(dǎo)急性UC造模期間小鼠DAI評(píng)分;（c）TNBS誘導(dǎo)急性UC造模期間小鼠DAI評(píng)分.不同 模型組與CON組比較.

2.3 結(jié)腸一般狀態(tài)及長度

正常小鼠結(jié)腸柔軟，無黏膜充血或者水腫的情況，結(jié)腸長度為 （7.038±0.672） ） cm ;DSS組小鼠平均結(jié)腸長度為 （4.467±0.333） cm ，與正常組比結(jié)腸長度顯著縮短，并且可以觀察到黏膜的充血、水腫以及炎癥病變（圖3）.TNBS組小鼠結(jié)腸平均長度為 （4.780±0.522） cm，與正常組比結(jié)腸長度顯著縮短，結(jié)腸柔軟度和彈性降低，可觀察到腸壁水腫、炎性病變.OXZ組小鼠結(jié)腸平均長度為 （5.525±0.719 ） cm ，與正常組比結(jié)腸長度顯著縮短，可觀察到腸壁水腫、炎性病變.

（a）為不同組別小鼠結(jié)腸狀態(tài)；（b）為不同組別小鼠結(jié)腸長度統(tǒng)計(jì);不同模型組結(jié)腸長度與CON組比較有顯著性差異;DSS組與OXZ組比較有顯著性差異，*表示 Plt;0.05 #

2.4 結(jié)腸組織病理學(xué)改變

結(jié)腸組織損傷評(píng)分：對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的結(jié)腸病理切片進(jìn)行組織學(xué)損傷評(píng)分，結(jié)果顯示3個(gè)模型組動(dòng)物結(jié)腸組織學(xué)損傷總評(píng)分皆出現(xiàn)一定升高表現(xiàn).CON組、DSS 組、OXZ組與TNBS 組的組織學(xué)損傷評(píng)分依次是0.125±0.231、2.417±0.917、2.000±0.886、2.400±1.025.OXZ、DSS、TNBS3組分別與CON組比較皆有顯著差異（ Plt;0.05），3 組間對(duì)比皆未見明顯差異 ?Pgt;0.05 （如圖4（b）所示）.

經(jīng)HE染色發(fā)現(xiàn)，各模型組動(dòng)物總體結(jié)腸組織學(xué)損傷均有不同程度的升高，阿利新藍(lán)染色結(jié)果顯示，各模型組動(dòng)物杯狀細(xì)胞（GC）皆有所減少（圖4和5）.具體情況如下：CON組動(dòng)物結(jié)腸組織細(xì)胞整齊排列，具完整結(jié)構(gòu)，未見炎性細(xì)胞入侵與GC缺失現(xiàn)象.DSS、OXZ、TNBS 各造模組病理結(jié)果中均可觀察到腸道組織水腫，炎癥細(xì)胞浸潤及潰瘍，杯狀細(xì)胞排列出現(xiàn)紊亂、變形及缺失.DSS 結(jié)腸炎病理可見炎癥細(xì)胞浸潤，潰瘍形成，腸壁增厚，隱窩變形或缺失，杯狀細(xì)胞數(shù)量均值與空白組比下降了 38.58% （ Plt;0.01） ；TNBS結(jié)腸炎模型病理顯示結(jié)腸壁增厚、腫脹，結(jié)腸病理改變易發(fā)生在遠(yuǎn)端結(jié)腸，炎癥的影響范圍在黏膜及其下層，其特點(diǎn)是炎癥細(xì)胞的浸潤和隱窩膿腫，杯狀細(xì)胞數(shù)量與空白組比下降了 33.86%（Plt;0.01） ;OXZ結(jié)腸炎小鼠病理征顯示局灶性淺潰瘍形成和炎癥細(xì)胞浸潤，隱窩缺失，杯狀細(xì)胞數(shù)量與空白組比下降了 39.7%（Plt;0.01）

2.5 結(jié)腸炎癥因子mRNA表達(dá)

RT-qPCR結(jié)果顯示DSS組、TNBS組、OXZ組小鼠結(jié)腸組織中 IL-6.IL-1β 在mRNA水平的表達(dá)與 CON組相比均有顯著提高.與CON組比，DSS 組、TNBS組小鼠結(jié)腸的 TNF-α 在mRNA水平的表達(dá)與 CON組比較均有顯著性增加，而OXZ組未有顯著增加，結(jié)果見圖6.

（a）為小鼠結(jié)腸HE染色（放大倍數(shù)200）， ▲ 標(biāo)注炎性細(xì)胞浸潤；→標(biāo)注隱窩變形缺失；（b）為小鼠結(jié)腸病理評(píng)分，不同模型組與CON組比較均有顯著性差異.

（a）為小鼠結(jié)腸組織阿利新藍(lán)染色（放大倍數(shù)200），杯狀細(xì)胞顯藍(lán)色，→標(biāo)注杯狀細(xì)胞缺失;（b）為杯狀細(xì)胞數(shù)量統(tǒng)計(jì)分析，不同模型組與CON組比較均有顯著性差異.

3 灌腸器材改良

TNBS和OXZ造模誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎均需要灌腸操作，傳統(tǒng)器材有PVC管或灌胃針.前期課題組采用PVC管連接 1mL 注射器自制灌腸管，但由于前方開口較鋒利，容易損傷腸壁造成腸漏，導(dǎo)致小鼠死亡.而灌胃針由于金屬材質(zhì)無法隨腸壁彎曲，給周齡較小的小鼠灌腸進(jìn)入 4～5cm ，容易造成腸漏，導(dǎo)致小鼠死亡.改良后灌腸器材選擇幼齡動(dòng)物灌胃管，為直徑 1.6～2.0mm 的PVC軟管，側(cè)方開口，可與 1mL 注射器連接緊密，有刻度標(biāo)記，操作方便，基本無溢液現(xiàn)象，造模效果良好，不易造成腸漏，安全性高，是比較好的造模器材（見圖7）.

4討論

C57BL/6小鼠屬于近交品系，基因組序列已清楚，與人的基因具有極高的相似度，是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用最廣泛的品系之一.本研究選取C57BL/6 小鼠作為建立急性結(jié)腸炎的動(dòng)物模型，DSS、OXZ、TNBS 3種化學(xué)誘導(dǎo)方法均成功建立了C57BL/6小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎模型，但各造模組小鼠癥狀、發(fā)病時(shí)間、恢復(fù)時(shí)間，病理特征存在一定差異，且C57BL/6 小鼠對(duì) DSS、OXZ、TNBS3 種藥物的敏感性存在較大差異[12].

C57BL/6小鼠對(duì)DSS誘導(dǎo)敏感性較高，本研究DSS誘導(dǎo)的小鼠均在 3～5 d開始出現(xiàn)以下表現(xiàn)：食欲減退、毛色干枯、腹瀉、倦怠懶動(dòng)、體質(zhì)量明顯降低、肉眼血便等.鏡下顯示多發(fā)性結(jié)腸潰瘍、GC受損或缺失、隱窩發(fā)生形變，主要表現(xiàn)為淋巴細(xì)胞（Lym）浸潤，結(jié)腸組織見IL-6、TNF- α 與IL-1βmRNA表達(dá)量增多表現(xiàn).然而此模型常會(huì)受到一些因素的干擾，諸如DSS批次不同、小鼠性別與周齡、飲水量和局部微生物組的變異性影響，小鼠個(gè)體差異較大，且停藥后恢復(fù)較快[13].DSS屬于硫酸化多糖，其相對(duì)分子質(zhì)量可變.研究證實(shí)，DSS自身非腸道炎癥的直接致因，DSS進(jìn)入體內(nèi)后，于結(jié)腸腔內(nèi)聯(lián)合中鏈長脂肪酸（MCFAs）產(chǎn)生復(fù)合物，形成納米囊泡，與結(jié)腸細(xì)胞膜融合，產(chǎn)生結(jié)腸上皮屏障功能的損傷，使固有層暴露于腸道細(xì)菌和管腔抗原，進(jìn)而引發(fā)炎癥[14-15].一般會(huì)明顯出現(xiàn)亞急性發(fā)炎、結(jié)腸腺體的損害或功能缺失、潰瘍形成、表層細(xì)胞過度增生以及黏膜下層出現(xiàn)水腫等病理現(xiàn)象，這些病變?cè)诮M織學(xué)上與人類潰瘍性結(jié)腸炎（UC）的病理特征相似.然而，DSS 模型是導(dǎo)致炎癥的化學(xué)誘導(dǎo)損傷模型，而不是疾病自發(fā)發(fā)展的模型.

TNBS 屬于一種半抗原類物質(zhì)，將以乙醇為溶劑的 TNBS 溶液通過灌腸的方式來誘發(fā)疾病，利用乙醇作為有機(jī)溶劑，可以有效地破壞腸道屏障并使半抗原與結(jié)腸組織蛋白相互作用，蛋白質(zhì)與半抗原分子的偶聯(lián)使這些蛋白質(zhì)具有免疫原性，從而觸發(fā)宿主先天性和適應(yīng)性免疫反應(yīng).通過灌腸操作，該模型一旦建立，會(huì)對(duì)遠(yuǎn)端結(jié)腸造成一致的局部損傷.然而C57BL/6小鼠對(duì) TNBS 具有一定的抵抗性，有研究采用預(yù)致敏的方法可以增加C57BL/6小鼠對(duì) TNBS 的敏感度，本研究采取2次灌腸法，可增加小鼠對(duì)藥物的敏感度，使癥狀明顯，維持時(shí)間增長，可見到明顯的結(jié)腸水腫及炎性浸潤，結(jié)腸組織可檢測(cè)到IL-6、IL-1β 和 TNF- α mRNA表達(dá)水平升高.因某些免疫學(xué)及組織病理學(xué)表現(xiàn)與克羅恩（CD）接近，在探究克羅恩（CD）相關(guān)因素方面應(yīng)用廣泛[16].

OXZ造模法是一種較新的造模方法，屬于半抗原類物質(zhì)，經(jīng)OXZ能夠誘發(fā)小鼠結(jié)腸炎.前期相關(guān)研究結(jié)果顯示，此模型炎癥需通過Th2細(xì)胞誘發(fā)的體液免疫活動(dòng)生成大量IL-4，同時(shí)此炎癥活動(dòng)可被 TGF- ?β 抑制，使得炎癥具有自限性，持續(xù)時(shí)間較短[17].研究發(fā)現(xiàn)，OXZ 建模動(dòng)物相較于 DSS、TNBS 組癥狀較輕，且恢復(fù)用時(shí)較短，故而此模型的觀察期較短，結(jié)腸組織存在IL-1β、IL-6 mRNA 表達(dá)量增多表現(xiàn)，然而沒有發(fā)現(xiàn)TNF-α 表達(dá)的大幅上調(diào).相關(guān)研究證實(shí)，SJL/J與C57BL/1O小鼠皆具備較高的敏感度，但C57BL/6對(duì)OXZ所致的結(jié)腸炎存在一定抵抗性，因此需要提前進(jìn)行預(yù)致敏，之后再進(jìn)行直腸灌腸給藥.

TNBS 和OXZ造模誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎均需要灌腸操作，本研究改良后的灌腸器材造模效果良好，安全性高.潰瘍性結(jié)腸炎模型以膿血便為典型特征，在實(shí)驗(yàn)過程中，發(fā)現(xiàn)小鼠的稀便容易堵塞肛門，導(dǎo)致排便困難，因此在過程中應(yīng)每日觀察和及時(shí)清理肛門部位，保證實(shí)驗(yàn)小鼠排便通暢.結(jié)合動(dòng)物模型研究是中西醫(yī)探索UC疾病的發(fā)病機(jī)制和開發(fā)治療方法的關(guān)鍵.本研究在機(jī)制研究中僅對(duì)部分炎癥因子的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)，3種模型對(duì)炎癥因子的影響存在一定差異，但對(duì)于3種模型的免疫學(xué)機(jī)制仍需進(jìn)一步深人研究，以探索最優(yōu)的UC動(dòng)物模型，為今后的相關(guān)實(shí)驗(yàn)提供更有針對(duì)性的動(dòng)物模型選擇.

附錄見電子版（DOI：10.16366/j.cnki.1000-2367.2024.03.27.0002）.

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Comparison and optimization of acute ulcerative colitis animal models induced in C57BL/6 mice

Li Mengl，Ma Fuzhi ² ，Tang Zewei ² ，Zhang Congen ?¹ ，Ma Zhijie3，Rao Quan1 （1.BejingFriendshipHospital，apitalMedicalUniversityBeijingOoo，China；.ColegeofraditionalChineseMedici Yunnan University of Chinese Medicine，Kunming 6505oo，China；3. Department of Pharmacy of Beijing Ditan Hospital，Capital Medical University，Beijing loool5，China）

Abstract：[Objective]To compare and optimize three commonly used methods（DSS，TNBS，OXZ） for inducing acute ulcerative colitis（UC）animal models in C57BL/6 mice.[Methods]General condition，weight change rate，DAI score，colon length，colonichistopathologicaldamageandinflammatryfactors wereselected toevaluatethe modelingefect.[ResultsMice in allthreemodel groups exhibitedvaryingdegreesofweightloss，diarrheaandrectal bleeding，typicalclinicalsymptomsof acute UC.Compared with the control group，mice in each model group showed significantly elevated DAI scores（ Plt;0.01 ）and noticeably shortened colon lengths（ Plt;0.05 ）.Histopathological examination revealed ulceration and inflammatory cell infiltrationin thecolonsof model group mice.[Conclusion]Allthree modeling methodssuccessullyestablishedacute experimentalulcerative colitis models in C57BL/6 mice，butthere were certain diferences among the model groupsintermsof symptoms，onset time，recovery time，athology and the immunological results.

Keywords： inflammatory bowel disease;ulcerative colitis;animal model; C57BL/6 mice

[責(zé)任編校 劉洋 趙曉華]