植物精油對(duì)煙草多種病原菌的抑制效果

中圖分類號(hào)S435.72文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

文章編號(hào) 0517-6611（2025）11-0126-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2025.11.027

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Inhibiting Effects of Plant Essential Oils on Multiple Pathogens of Tobacco

YANG Lei，WANG Cong，HU Xin-yu et al（Hunan Tobacco Industry Co. Ltd.，Changsha，Hunan 410014）

AbstracthissdysteloeteisofplateetialilsoneajoobothosFusoy（u singredstardase）iciliu（asingfrgeisease）dstosoace（usictealild， andtoprovideanewrategforteprevetioandcontrolofobaccodiseass5Otysofplantssetialilsweretestedundervariouso centrationsusingmetodsschsthemyelialgowthatesandantiicrobialsuseptibilitytestdisesultsinicatethatlrelil， thyme oil，cinnamon oil，myrrh oil，and cinnamic acid significantly inhibited the growth of F oxysporum （achieving a 100% inhibition rate） at both high （ 100μL/mL ）and low concentrations （2.0，1.0μL/mL ）.Similarly，these oils and acid also showed significant inhibition of V. dahliae，with a 100% inhibition rate at both concentrations. Cinnamon oil and myrrh oil were particularly effective against R . solanacearum， with their inhibitory effects intensifying as the concentration increased. At a low concentration of 10μL/mL ，cinnamon oil demonstrated a remarkable ability to reduce the growth of R solanacearum，with aninhibition zone diameter of 2.55 cm.Cinnamon oil and myrrh oil exhibited significant inhibitory effects on the growth of F oxysporum，V. dahliae，and R .solanacearum.Based on these findings，future research shouldfurtheritatetticoblhasoflantetialilsalidatetesultstouhfldalsdrgsety assessment efforts to more effectively enhance strategies for the prevention and control of tobacco diseases.

Key wordsPlant essential oil;Antibacterial;Tobaccobacterial wilt;Tobacco frog eye disease;Tobaccored stardisease

植物精油作為一種天然的、綠色環(huán)保的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)材料，近年來(lái)在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中得到了廣泛關(guān)注，特別是在生物防治領(lǐng)域中的應(yīng)用前景備受矚目[1]。研究植物精油對(duì)病原菌的抑制作用，對(duì)于推動(dòng)綠色、高效、環(huán)保、可持續(xù)的生物防治技術(shù)發(fā)展具有重要意義[2-3]。然而，盡管植物精油在多個(gè)領(lǐng)域展現(xiàn)出良好的抑菌效果，但關(guān)于其對(duì)煙草病原菌抑制作用及作用機(jī)制的研究仍相對(duì)匱乏。煙草作為全世界最古老且重要的經(jīng)濟(jì)作物之一，其產(chǎn)量和質(zhì)量因病原菌的侵害而遭受嚴(yán)重影響，使得煙草病原菌的防治成為煙草生產(chǎn)中的重要課題[4-5]。傳統(tǒng)的化學(xué)防治方法雖然能在一定程度上控制了病害，但環(huán)境污染和藥害累積等問(wèn)題日益凸顯，迫切需要尋找新的防治手段[。植物精油因其抑菌、殺蟲、促生等多種功能，被視為一種綠色、安全、高效的生物防治藥劑，對(duì)控制煙草病原菌具有廣闊的應(yīng)用前景[7-10]。研究表明植物精油在抑菌方面具有顯著效果，Barel等[11]發(fā)現(xiàn) 0.05mg/g 百里香油對(duì)草莓貯藏期病害有明顯抑制作用;劉海燕等[12]發(fā)現(xiàn)500μL/mL 細(xì)辛油對(duì)白菜葉斑病菌、煙草赤星病菌具有強(qiáng)抑制作用;馮俊濤等[13]研究表明 0.5mg/mL 的大花金挖耳花蕾精油對(duì)煙草赤星病菌、蘋果炭疽病菌的抑菌率在 60% 左右；姚雷等[4將肉桂精油、枯茗精油、檸檬草精油混配后，對(duì)煙草黑脛病的防治效果高達(dá) 81.2% ;楊若穎等[15]發(fā)現(xiàn)采用二倍稀釋法在 100mg/L 下，某些精油對(duì)煙草青枯病菌有顯著的抑菌作用。此外，研究表明植物精油對(duì)真菌的抗菌活性明顯高于細(xì)菌[16]，植物精油和化學(xué)抑菌劑相比，其特點(diǎn)是殘留的毒性和副作用小，使得農(nóng)藥研究領(lǐng)域日益關(guān)注植物精油對(duì)植物病原菌的防治，研究證實(shí)多種植物精油對(duì)病原菌的防御機(jī)制發(fā)揮作用[17]。筆者旨在探索植物精油對(duì)煙草鏈格孢菌（赤星病）尾孢菌（蛙眼病）和青枯雷爾氏桿菌（青枯病）的抑制作用，通過(guò)測(cè)定這3種常見煙草病原菌在不同濃度精油處理下的生長(zhǎng)速度指標(biāo)，分析植物精油的抑菌效果，以期為煙草病害防治提供更多有效的手段，提高煙草的產(chǎn)量和質(zhì)量。同時(shí)，該研究結(jié)果也為今后煙草病害治理工作提供參考，減少煙草病害的發(fā)生程度，為植物精油的應(yīng)用研究提供借鑒，進(jìn)一步發(fā)掘植物精油的功效。

1材料與方法

1.1材料與儀器供試菌株為煙草鏈格孢菌、尾孢菌、青枯菌，均由貴州省煙草科學(xué)研究院植保團(tuán)隊(duì)從煙田采集感染病株分離純化獲得。

供試植物精油為50種植物精油，名稱見表1。

表1供試植物精油

主要儀器與設(shè)備為高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、移液槍、電熱恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)血等。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1對(duì)鏈格孢和煙草尾孢菌的抑制測(cè)定。

（1）精油培養(yǎng)基的制備。將滅好菌的PDA放置超凈臺(tái)，待其冷卻至 50^qC 左右后倒入直徑 90mm 的無(wú)菌培養(yǎng)皿，隨后用移液槍吸取不同體積的精油，加入培養(yǎng)血中，得到濃度分別為100、2和 1μL/mL 的精油培養(yǎng)基，每一種濃度備3皿，搖勻并編號(hào)標(biāo)記，備用。同時(shí)，制備不含精油的PDA培養(yǎng)平板作為對(duì)照。

（2）菌餅準(zhǔn)備。挑選出已培養(yǎng)好的鏈格孢和尾孢菌，用滅過(guò)菌的打孔器在超凈臺(tái)內(nèi)對(duì)其進(jìn)行打孔，打出大小、厚度均勻的菌餅，備用。待精油培養(yǎng)基完全凝固后，在無(wú)菌環(huán)境下用無(wú)菌牙簽將備好的鏈格孢菌餅和尾孢菌餅分別挑置精油培養(yǎng)基的正中央，每血一片，標(biāo)記并密封后置于 28^°C 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6＼～7d，采用十字交叉法測(cè)量抑菌圈直徑，取平均值，計(jì)算抑菌率[18-19] 。

對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑抑菌率 專 ×100% 對(duì)照菌落直徑

1.2.2對(duì)青枯菌的抑制測(cè)定。

1.2.2.1藥敏片法。用青鏈霉素混合液作為對(duì)照

（1）藥敏片的處理。將直徑 5mm 的濾紙片置于各個(gè)精油和青鏈霉素混合液中浸泡 2～3min ，備用。

（2）青枯菌液的制備。將保存的青枯菌種接種于TTC培養(yǎng)基中進(jìn)行活化， 35^°C 電熱恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)2d，挑取單菌落懸于無(wú)菌水中，于室溫下保存，備用。

（3）制備TTC雙層瓊脂平板。底層平板：將冷卻至 50^qC 左右的TTC固體培養(yǎng)基倒入 150mm 的無(wú)菌培養(yǎng)血中，每Ⅲ20～25mL ，水平放置，凝固后，備用。上層平板：用移液槍取200μL 青枯菌液加入 45°C 保溫的 10mL 0.6% 瓊脂糖，混勻，迅速倒入底層平板，晃動(dòng)平板，使瓊脂糖均勻鋪開覆蓋

（4）使用無(wú)菌鑷子將沾滿精油的藥敏片置于冷卻好的

TTC雙層瓊脂平板中（注意各個(gè)藥片中間留有間隙）。將接好藥敏片的培養(yǎng)板標(biāo)記并密封，置于 28^°C 的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h 。采用十字交叉法測(cè)量抑菌圈直徑，取平均值比較篩選出對(duì)青枯菌有抑制作用的精油。

1.2.2.2瓊脂餅法。考慮到精油的易揮發(fā)性，將培養(yǎng)基稀釋后加人精油做成精油-瓊脂圓餅，對(duì)9號(hào)、30號(hào)精油進(jìn)行抑菌測(cè)定。

（1）乳化精油。按照精油：乙醇：水：司盤 80=1：1：6：2 的比例 ，將9號(hào)、30號(hào)精油乳化成母液，備用。

（2）精油圓餅制備。配制NA培養(yǎng)基，滅好菌后將其放置超凈臺(tái)，待其冷卻至 50^qC 左右后倒入直徑 90mm 的無(wú)菌培養(yǎng)皿，隨后用移液槍吸取不同體積的精油，加入培養(yǎng)皿中，得到濃度分別為10、5、2和 1μUmL 的精油培養(yǎng)基，待其徹底凝固后用無(wú)菌打孔器打出大小、厚度均勻的精油圓餅，備用。

（3）制備CPG雙層瓊脂平板。底層平板：將在 50^cC 左 右的CPG 培養(yǎng)基倒入 90mm 的無(wú)菌培養(yǎng)皿，每皿約 10mL 水平放置，備用。上層平板：用移液槍取 200μL 青枯菌液加 人 45^°C 保溫的 10mL 0.6% 瓊脂糖，混勻，迅速倒入底層平 板，晃動(dòng)平板，使瓊脂糖均勻鋪開覆蓋

（4）使用無(wú)菌牙簽將精油圓餅挑置于凝固好的CPG雙層平板中（注意各個(gè)精油圓餅間留有間隙）。將接好精油圓餅的培養(yǎng)板標(biāo)記密封，置于 28^°C 的培養(yǎng)箱中培養(yǎng) ^12h 。

2 結(jié)果與分析

2.1不同植物精油對(duì)鏈格孢的抑菌效果采用直徑 5mm 的菌餅，將其置于 100μL/mL 精油的培養(yǎng)基上。通過(guò)菌絲生長(zhǎng)速率法，培養(yǎng)3d后進(jìn)行抑菌效果分析。結(jié)果顯示，共計(jì)36種精油對(duì)鏈格孢具有較好的抑菌效果，其中25種精油（編號(hào)分別為3、4、5、7、8、9、13、14、19、21、23、27、29、30、31、32、33、36、38、39、43、46、47、48、50） 表現(xiàn)出極佳的抑菌效果，菌落生長(zhǎng)抑制率達(dá) 100% 。為進(jìn)一步探究這些精油的抑菌效果是否受濃度影響，選取上述25種精油，并將其分別稀釋至2.0和1.0μL/mL 進(jìn)行培養(yǎng)測(cè)試。同時(shí)，設(shè)置空白CK作為對(duì)照，其抑菌圈直徑7d后達(dá) 4.7cm 。

由表2可知，精油濃度為 2.0μL/mL 時(shí)，5、7、9、14、19、29、30、33和50號(hào)精油在 2.0μL/mL 濃度下表現(xiàn)出最佳的抑菌效果，菌絲生長(zhǎng)抑制率均為 100% ;31、38和48號(hào)精油的效果也較為明顯，抑制率分別為 70% ） 79% 和 57% ;而3、8、23、32、39、46 和47號(hào)精油的抑菌效果一般，抑制率在 36% ＼～53% ；其余精油在此濃度下的抑菌效果表現(xiàn)不佳，抑制率均低于 20% 。當(dāng)精油濃度降低至 1.0μL/mL 時(shí)，5、7、9、30和50號(hào)精油的抑菌效果保持不變，菌絲生長(zhǎng)抑制率仍為 100% ：而14、29、33號(hào)精油在此濃度下的抑菌效果有所下降，但仍明顯，抑制率分別為 62%.53%.77% ：48號(hào)精油的抑菌效果不變，其余精油在此濃度下的抑菌效果表現(xiàn)較差，抑制率低于 50% 。表明5、7、9、30和50號(hào)這5種精油在不同濃度下均表現(xiàn)出較好的抑菌效果，對(duì)鏈格孢菌絲的生長(zhǎng)具有顯著的抑制作用。這些精油具有進(jìn)一步開發(fā)和應(yīng)用的潛力，為煙草赤星病的防治提供新的思路和策略。

2.2不同植物精油對(duì)煙草尾孢的抑菌效果將直徑 5mm 的尾孢菌餅置于 100μL/mL 的精油培養(yǎng)基上，采用菌絲生長(zhǎng)速率法，6d后進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，3、4、5、7、9、14、19、23、29＼～33、36、38、39、43、46、47、48和50號(hào)精油能夠?qū)ξ叉卟【M(jìn)行完全抑制，抑制率為 100% 。為進(jìn)一步研究這些精油的抑制效果，將上述具有完全抑制效果的精油分別稀釋至2.0和 1.0μL/mL ，并再次進(jìn)行培養(yǎng)測(cè)試。培養(yǎng)7d后，對(duì)照組（CK）的抑菌圈直徑達(dá) 2.0～3.0cm 。

由表3可知，精油濃度為 2.0μL/mL 時(shí)，4、5、7、9、14、19、30、33、47和50號(hào)精油對(duì)尾孢病菌的抑制率為 100% ；3、29、31、32、38、43和46號(hào)精油的抑制效果較好，其抑制率為52%～64% ；其余精油對(duì)尾孢病菌的抑制效果較差，抑制率均低于 50% 。當(dāng)精油濃度降低至 1.0μL/mL 時(shí)，5、7、9、19、30和50號(hào)精油對(duì)尾孢病菌的抑制率仍為 100% ;4和33號(hào)精油對(duì)尾孢病菌的抑制效果較好，分別為 52% 和 64% ；其余精油對(duì)尾孢病菌的抑制效果較差，抑制率均低于 50% 。表明5、7、9、19、30和50號(hào)精油在不同濃度下均能對(duì)尾孢菌絲的生長(zhǎng)產(chǎn)生顯著的抑制作用，其中包含對(duì)鏈格孢菌絲有顯著抑制效果的5、7、9、30和50號(hào)精油。

2.3不同植物精油對(duì)青枯雷爾氏桿菌的抑菌效果將直徑5mm 的藥敏片置于TTC雙層瓊脂培養(yǎng)基上， 12h 后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，CK抑菌圈直徑為 6.0cm 。9號(hào)和30號(hào)精油對(duì)青枯雷爾氏桿菌的抑制效果最為明顯，其抑菌直徑為 8.0～9.0cm ，抑菌率達(dá) 100% ;5、6和7號(hào)精油對(duì)青枯雷爾氏桿菌的抑制效果較差，其抑菌圈直徑為 4.0～5.0cm ，抑菌率為 25% ；其余精油對(duì)青枯雷爾氏桿菌的抑制效果均表現(xiàn)不佳，抑制率均低于25% 。

為進(jìn)一步探究9號(hào)和30號(hào)精油在不同濃度下對(duì)青枯雷爾氏桿菌抑制作用，將濃度分別為10、5、2和 1μL/mL 的5mm 精油圓餅（9、30號(hào)）置于CPG雙層瓊脂培養(yǎng)基上，培養(yǎng)12h 后測(cè)量抑菌圈大小。由表4可知，在 1～10μL/mL 濃度范圍內(nèi)，隨著9號(hào)和30號(hào)精油濃度的逐步上升，其對(duì)青枯雷爾氏桿菌的抑制效果也逐漸增強(qiáng)。在相同濃度條件下，9號(hào)精油相較于30號(hào)精油表現(xiàn)出更為明顯的抑制效果，尤其是在精油濃度為 10μL/mL 時(shí)，9號(hào)精油抑菌圈直徑最大，為2.55cm 。表明9號(hào)和30號(hào)精油均能對(duì)青枯雷爾氏桿菌產(chǎn)生抑制作用， 10μL/mL 下9號(hào)精油對(duì)青枯雷爾氏桿菌的抑制作用更強(qiáng)，且9號(hào)和30號(hào)精油對(duì)煙草鏈格孢菌和尾孢菌均有較好的抑制效果。

3結(jié)論與討論

該研究探索不同植物精油對(duì)鏈格孢菌（赤星病）尾孢菌（蛙眼病）和青枯雷爾氏桿菌（青枯病）這3種煙草病害主要病原菌的抑菌效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在 100μL/mL，25 種精油對(duì)鏈格孢具有較好的抑制效果，特別是5（月桂油）、7（牛至油）9（肉桂油）30（沒(méi)藥油）和50號(hào)（肉桂酸）精油，在低濃度（2.0和 1.0μL/mL ）下也表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑菌能力，抑制率達(dá) 100% ，表明這些精油能顯著抑制鏈格孢菌的生長(zhǎng)。同樣，在 100μL/mL 下，多種精油對(duì)尾孢菌表現(xiàn)出完全抑制效果，且在進(jìn)一步稀釋后，月桂油、牛至油、肉桂油、乳香油、沒(méi)藥油和肉桂酸仍保持高抑制率（ 100% ），說(shuō)明它們對(duì)尾孢病菌的生長(zhǎng)也具有強(qiáng)烈的抑制作用。在對(duì)青枯雷爾氏桿菌的研究中，肉桂油和沒(méi)藥油在TTC雙層瓊脂培養(yǎng)基上表現(xiàn)出明顯的抑制效果，抑菌率達(dá) 100% ，且這種抑制作用隨著濃度的增加而增強(qiáng)，在相同濃度下，肉桂油的抑制效果更突出。綜合各項(xiàng)評(píng)估結(jié)果，月桂油、牛至油、肉桂油、沒(méi)藥油和肉桂酸因在不同濃度下對(duì)鏈格孢和煙草尾孢病菌均顯示出顯著的抑菌效果，而被認(rèn)為具有進(jìn)一步開發(fā)和應(yīng)用的潛力。尤其是肉桂油和沒(méi)藥油，它們不僅對(duì)上述2種病原菌有較好的抑制效果，還對(duì)青枯雷爾氏桿菌具有明顯的抑制作用，這為煙草病害的防治提供了全新的視角和策略。該研究篩選出的部分植物精油表現(xiàn)出對(duì)煙草病害主要病原菌的顯著抑菌效果，預(yù)示著它們?cè)诓『Ψ乐晤I(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景，值得進(jìn)一步深人研究并推廣使用。下一步應(yīng)深入研究其抑菌作用機(jī)理、殺菌效果以及環(huán)境安全等方面，并開展田間試驗(yàn)，驗(yàn)證防病效果。此外，對(duì)不同來(lái)源的植物精油進(jìn)行抑菌活性研究，建立一種更可靠有效的篩選方法也是今后研究的方向之一。

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