三化湯的化學成分、人血原型成分及代謝成分分析

中圖分類號 R917;R284.1 文獻標志碼A 文章編號 1001-0408（2025）14-1760-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2025.14.12

ABSTRACTOBJECTIVETo studythechemical components，components migrating tothe bloodand metabolitesof Sanhua decoctioninrats.METHODS Male Wistarrats were divided intoadministration groupand blank group，with 6rats in each group. The rats in the administration group were given 13.3g/kg of Sanhua decoction lyophilized powder solution by gavage once a day in themorningandevening，and theratsinthe blank group weregivenanequalvolumeofsalinebygavageonceadayinthe morningand evening，both for3consecutivedays.Plasmasampleswerecolectedfromthetwogroupsofratsafterthe last administration.Thechemicalcomponents，prototypecomponentsmigrating tothe bloodand metabolitesof Sanhuadecoctionwere analyzedbyUHPLC-Q-TOF/MStechnique.Thestructureswereidentifiedcombinedwiththeself-builtnaturalproducthighresolutiomassspectrometrydatabaseandrelevant literature.RESULTSamp;CONCLUSIONSTotally69compounds wereidentified fromtheyophilizedpowderofSanuadecoction，incuding29componentsfromRheumoffcinale，16componentsfromMagnoliae OfficinalisCortex，22components from AurantiiFructus Immaturus，and1Ocomponents from NotopterygiihizomaetRadix. Amongthem，3components（citricacid，L-tyrosine，adenosine）werepresentinall4medicinal herbs.Anothercomponent （feruloylgluconicacid）stillneededtobespecificallyaributedAtotalof43prototyecomponentsmgratingtoteloodwere identified，incldingfavonoids，peols，ntaqnones，penylpropanoids，lkaloidsandtriterpeois.Atotalof6ablites wereidentified，predominantlyconsitingofflavonoids，anthraquinonesandphenylpropanoids.Themetabolicpathwaysmainly involved phaseImetabolicreactions such as demethylation and phase I metabolic reactions like sulfation and glucuronidation.

KEYWORDSSanhua decoction；chemicalcomponents；prototypecomponents migrating tothe blood；metabolites；UHPLC-Q TOF/MS technique

三化湯出自金代劉完素《素問病機氣宜保命集》，由厚樸、大黃、枳實、羌活組方而成，是2018年國家中醫藥管理局公布的《古代經典名方目錄（第一批）》中的名方之一。三化湯可調氣開通玄府，是治療中風之名方，用于臨床治療急性中風的效果良好2。現代藥理學研究表明，三化湯對腦缺血再灌注大鼠腦組織具有很好的保護作用[3-]，亦有防治肝纖維化抑制炎癥[等作用。

三化湯的給藥途徑以口服為主。藥物進入機體后，會通過血液循環分布至全身各組織器官，從而發揮相應的藥理作用。目前，關于三化湯的研究主要集中于藥理作用方面。由于中藥復方化學成分復雜，因此探討其具體成分及入血后的成分變化將有助于闡釋整方的藥效物質基礎、解釋其治療作用的內在機制。本研究擬借助超高效液相色譜-四極桿飛行時間串聯質譜（UHPLC-Q-TOF/MS）技術，以三化湯凍干粉、大鼠含藥血漿為對象，對該方的化學成分及人血成分（含原型成分及代謝產物）進行解析，以期為闡明三化湯的藥效物質基礎提供理論依據。

1材料

1.1主要儀器

主要儀器包括WatersH-Class型超高效液相色譜儀（美國Waters公司）、ABSCIEXTripleTOF？4600型高分辨質譜儀（美國ABSCIEX公司）、ME104型電子天平[梅特勒-托利多國際貿易（上海）有限公司]、KQ-300BD型超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）3K15型高速離心機（美國Sigma公司）LGJ-100F型真空冷凍干燥機（北京松源華興科技發展有限公司）等。

1.2主要藥品與試劑

藥用大黃、厚樸、積實、羌活飲片（批號分別為230407、230621、221208、220808）均購自上海康橋中藥飲片有限公司，經該公司質檢部門檢測，均符合2020年版《中國藥典》一部）有關規定。

乙腈、甲醇為質譜純，均購自美國Merck公司；甲酸為質譜純，購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；水為純凈水，購自廣州屈臣氏食品飲料有限公司。

1.3實驗動物

SPF級雄性Wistar大鼠12只，體重 （250±20）g ，由上海必凱科翼生物科技有限公司提供，生產許可證號為SCXK（滬）2023-0009。所有大鼠均飼養于室溫 21～ 26^°C 、相對濕度 40%～70% 、每 12h 明/暗交替的環境中。本研究方案已通過上海市浦東新區人民醫院醫學倫理委員會審批（批準文號2021-D-42）。

2 方法

2.1 三化湯凍干粉的制備

取枳實、羌活、厚樸飲片各 4kg ，混合，加水 128L 加熱回流提取1h（回流過程中，不斷翻轉，以保證飲片與水充分混合），待提取液冷卻至室溫后，加入藥用大黃飲片 4kg ，繼續加熱回流提取 20min ，待提取液冷卻后過濾，得濾液1；取藥渣，加水96L，同法加熱回流提取 1h 待提取液冷卻后過濾，得濾液2；合并濾液1、2，于 55^°C 下減壓濃縮后冷凍干燥，得三化湯凍干粉 3891g 。

2.2大鼠空白血漿及含藥血漿的制備

12只大鼠經適應性喂養3d后，隨機分為空白組和給藥組，每組6只。禁食、不禁水 12h 后，給藥組大鼠每天早晚各灌胃 13.3g/kg 的三化湯凍干粉藥液1次（以水為溶劑，日劑量參考本課題組前期預實驗結果設置，約為10倍成人臨床等效劑量），空白組大鼠每天早晚各灌胃等體積生理鹽水1次，連續 3d 。分別在末次給藥后0.5、1、2h時于眼眶靜脈叢取血 0.5mL 至抗凝管中，于室溫下以 3000r/mim 離心 10min ，取上層血漿。取同組大鼠各時間點的血漿樣品，等體積混合，即得空白血漿樣品和含藥血漿樣品。將上述樣品分裝至凍存管中，于-80^°C 下凍存，備用。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1三化湯凍干粉供試品溶液

稱取三化湯凍干粉 0.5g ，置于具塞錐形瓶中，加入50% 甲醇 10mL ，搖勻，超聲（功率300W，頻率 40kHz ）處理 30min 使溶解；取溶液 2mL ，置于離心管中，以12000r/min 離心 5min ，取上清液，即得。

2.3.2 空白血漿、含藥血漿供試品溶液

分別取“2.2”項下空白血漿樣品 1mL 、含藥血漿樣品 2mL ，加入3倍體積的甲醇以沉淀蛋白，渦旋混勻5min后于 4^°C 下靜置 20min ，再以 12000r/min 離心15min ，取上清液，濃縮干燥后于 -80^°C 下保存。分析前，取上述干燥物，以 50% 甲醇復溶，渦旋混勻 5min 后，以12000r/min 離心 15min ，取上清液，即得。

2.4 色譜與質譜條件

以WatersACQUITYUPLCHSST3 （2.1mm×150 mm，1.8μm 為色譜柱，以乙腈（A） .0.1% 甲酸溶液（B）為流動相進行梯度洗脫 （0～4min，3%A;4～7min，3%A? 10%A 7～13min ， 10%A?15%A 13～27min ， 15%A 25%A;27～40min， 25%A?40%A ： 40～46 min， 40%A? 90%A ;46～49min， 90%A ;49～49.1 min， 90%A?3%A ：49.1～52min，3%A） ；柱溫為 30^°C ；流速為 0.3mL/min 進樣量為 5μL 。

采用電噴霧電離源（electrosprayionization，ESI）進行正、負離子掃描；電離源溫度為 500^°C ；電離源電壓分別為 5000V （正離子） -4500V （負離子）；噴霧氣壓力為 50psi ；輔助加熱器壓力為 50psi ；氣簾氣壓力為35psi;一級質譜的掃描范圍為 m/z50～1 700 ，去簇電壓為100V ，碰撞電壓為 10V ；二級質譜的掃描范圍為 m/z 50～1250 ，去簇電壓為 100V ，碰撞電壓為 ±40V 。

2.5進樣分析與數據采集、處理

取\"2.3.1\"\"2.3.2\"項下各供試品溶液，按\"2.4\"項下條件進樣分析，記錄色譜圖及質譜信息。采用AnalystTF1.7.1軟件采集質譜數據，采用PeakView1.2軟件處理數據。結合自建的天然產物高分辨質譜數據庫進行質譜數據匹配，對各色譜峰對應的化合物進行初篩；再根據其一級、二級質譜信息對化合物結構進行確認；對于數據庫中未收錄的化合物，則根據相關文獻、質譜裂解規律等進行鑒定。

3 結果與分析

3.1 三化湯化學成分鑒定

3.1.1 凍干粉化學成分

三化湯凍干粉供試品溶液的總離子流圖見圖1。根據其質譜信息，結合天然產物高分辨質譜數據庫、相關文獻及裂解規律[8-19]，從該方中鑒定出69個成分，29個成分來源于藥用大黃（如大黃素、大黃素-8 ?β -D-葡萄糖苷），16個成分來源于厚樸（如木蘭花堿、厚樸酚），22個成分來源于積實（如辛弗林、柚皮苷），10個成分來源于羌活（如歐前胡素），其中3個成分（檸檬酸、L-酪氨酸、腺苷）在4味藥材中均存在；另有1個成分（阿魏酰葡萄糖酸）尚需確定具體歸屬。結果見表1。

圖1三化湯凍干粉供試品溶液的總離子流圖

表1三化湯化學成分及入血成分分析結果

a：入血原型成分。

3.1.2入血原型成分

空白血漿和含藥血漿供試品溶液的總離子流圖見圖2。對比兩者色譜圖，將同時存在于空白血漿和含藥血漿中的成分判定為入血原型成分。根據其質譜信息，結合\"3.1.1\"項下三化湯化學成分分析結果，參照二級質譜裂解規律，共鑒定出43個入血原型成分，其中14個原型成分來源于藥用大黃，7個來源于厚樸，17個來源于枳實，4個來源于羌活，另有1個成分待確定歸屬；主要包括黃酮類、酚類、蔥醌類、苯丙素類、生物堿類和三萜類成分。結果見表1。

圖2空白血漿和含藥血漿供試品溶液的總離子流圖

3.1.3 三化湯代謝產物分析

對比空白血漿和含藥血漿供試品溶液色譜圖，將在含藥血漿中存在而在空白血槳中不存在的非原型成分判定為代謝產物。結合其質譜信息、成分潛在代謝途徑及參考文獻[20一22]，共推測得到61個代謝產物，其中29個來源于藥用大黃、5個來源于厚樸、19個來源于枳實、8個來源于羌活，以黃酮類、蒽醌類、苯丙素類成分為主。結果見表2。

表2三化湯代謝產物分析結果

3.2 成分質譜裂解規律示例

3.2.1 入血原型成分

黃酮類成分是藥用大黃和枳實的主要活性成分，根據母核結構可分為黃酮類和黃酮苷兩大類。以保留時間為 43.81min 的色譜峰對應的成分為例，其準分子離子峰為 m/z403.1410[M+H]⁺ ，預測分子式為 C₂₁H₂₂O₈ 。準分子離子峰丟失1分子 CH₃ 得 m/z388.1177[M+H- CH₃]⁺ ；或丟失1分子 OCH₂ 得 m/z 373.094 1[M+H- OCH₂]⁺ ，再丟失1分子 H₂O 得 m/z 355.083 4[M+H- OCH₂-H₂O]⁺ ，再繼續丟失1分子CO得 m/z327.0880 Δ[M+H-OCH₂-H₂O-CO]⁺ 。結合相關文獻23并比對自建數據庫，初步鑒定該成分為川陳皮素。

生物堿類成分主要來源于厚樸和枳實。厚樸中主要含有芐基異喹啉類生物堿和阿樸菲類生物堿，其二級碎片離子以丟失 （CH₃）₂NH，CH₃OH 等基團為主。以保留時間為 15.01min 的色譜峰對應的成分為例，其準分子離子峰為 m/z342.1699[M]⁺ ，預測分子式為 C₂₀H₂₄NO₄₀ （20準分子離子峰丟失1分子 （CH₃）₂NH 得 m/z 297.113 1 [M-NH（CH₃）₂]⁺ ，再進一步丟失1分子 CH₃ 或1分子CH₃OH ，分別得 m/z 282.0895[M-（CH₃）₂NH-CH₃]⁺，m/z 265.0865[M-（CH₃）₂NH-CH₃OH]⁺ 。結合相關文獻[并比對自建數據庫，初步鑒定該成分為木蘭花堿。

3.2.2 代謝產物

三化湯藥物成分進入體內后主要發生I相代謝反應（如去甲基化等反應）和 I 相代謝反應（如硫酸化、葡萄糖醛酸化等反應）。下文以大黃素的硫酸化產物及葡萄糖醛酸化產物為例，進行代謝產物分析。

（1）硫酸化產物：從三化湯代謝產物中檢出3個大黃素的硫酸化產物，保留時間分別為35.85、40.94、43.56min，其準分子離子峰均為 m/z349.0032[M-H]^- ，預測分子式均為 C₁₅H₁₀O₈S ，均存在丟失1分子 SO₃ 的分子離子峰 m/z269.0496[M-H-SO₃]^- 。結果見圖3。

圖3大黃素的硫酸化、葡萄糖醛酸化、二葡萄糖醛酸化裂解途徑

（2）葡萄糖醛酸化產物：大黃素的葡萄糖醛酸化產物包括大黃素葡萄糖醛酸化產物和大黃素二葡萄糖醛酸化產物。其中，2個大黃素葡萄糖醛酸化產物的保留時間分別為 31.48，32.77min ，其準分子離子峰均為 m/z ，預測分子式均為 C₂₁H₁₈O₁₁ ，均存在丟失1分子 C₆H₈O₆ 的分子離子峰 m/z269.0445[M-H- C₆H₈O₆]^- 。3個大黃素二葡萄糖醛酸化產物的保留時間分別為 15.90、20.95、24.31min ，其準分子離子峰均為 m/z 621.1132[M-H]^- ，預測分子式均為 C₂₇H₂₆O₁₇ ，均存在丟失2分子 C₆H₈O₆ 的分子離子峰 m/z269.0445[M-H- C₆H₈O₆-C₆H₈O₆]^- 。結果見圖3。

4討論

中藥人血成分分析對闡明中藥藥效物質基礎具有重要作用。UHPLC-Q-TOF/MS技術具有高分辨率、高靈敏度等優點，可用于化學成分的快速鑒定，以解決血清藥物化學的人血原型成分及代謝產物的鑒定問題。本研究采用UHPLC-Q-TOF/MS技術對三化湯凍干粉樣品、空白血清及含藥血清進行成分分析，結果顯示，從三化湯凍干粉樣品中鑒定出69個化合物，主要有蒽醌類、酚類、黃酮類、苯乙醇苷類、苯丙素類、三萜類、生物堿類等；從三化湯含藥血清樣品中鑒定出104個成分（43個入血原型成分、61個代謝產物）。在43個入血原型成分中，14個來自藥用大黃、7個來自厚樸、17個來自積實、4個來自羌活，還有1個成分尚待確定歸屬，主要是黃酮類、酚類、蒽醌類、苯丙素類、三萜類、生物堿類成分。

三化湯代謝以Ⅱ相代謝反應為主，主要包括葡萄糖醛酸化、硫酸化反應；同時，其代謝還涉及I相代謝反應，主要為去甲基化反應。在鑒別出的61個代謝產物中，29個產物由藥用大黃中的蒽醌類成分代謝而成，代謝反應以葡萄糖醛酸化、硫酸化反應為主；18個產物由積實中的黃酮類成分代謝而成，代謝反應以去甲基化、葡萄糖醛酸化、硫酸化反應為主；11個產物由羌活（8個）厚樸（3個）中的苯丙素類成分代謝而成，代謝反應以硫酸化、葡萄糖醛酸化反應為主；2個產物由厚樸中的生物堿類成分代謝而成，代謝反應為葡萄糖醛酸化反應；1個產物由積實中的酚類成分代謝而成，代謝反應為硫酸化反應。相關研究表明，苯丙素類成分厚樸酚、黃酮類橙皮苷等均具有抗炎、抗氧化的作用[24-25];蒽醌類成分具有瀉下的作用，可緩解卒中后便秘，可能與三化湯減輕炎癥反應、抑制氧化應激、改善腦缺血再灌注致腦損傷、保護神經的作用有關[2]。可見，上述入血原型成分及代謝產物可能是三化湯發揮相應藥理作用的物質基礎。

綜上所述，本研究對三化湯的化學成分及人血原型成分、代謝產物進行了鑒定，為闡明該方藥效物質基礎提供了一定的科學依據，也為其進一步開發奠定了基礎。但本研究并未對三化湯的揮發性成分進行鑒定，后續將采用氣質聯用技術對此類成分進行研究，以更全面地闡釋三化湯的藥效物質基礎。

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