原發性干燥綜合征中TCRζ鏈及ZAP70的表達

[摘要] 目的 探討原發性干燥綜合征（primary Sj?gren syndrome，PSS）患者外周血T細胞受體（T cell receptor，TCR）ζ鏈及Zeta鏈相關蛋白激酶70（Zeta-chain-associated protein kinase 70，ZAP70）的表達水平。方法 選取2024年1月至6月于九江市第一人民醫院就診的PSS患者36例納入觀察組，同期健康體檢者30名納入對照組。采用實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測外周血單個核細胞中TCRζ鏈及ZAP70的表達水平，流式細胞術檢測外周血T細胞亞群。采用Pearson相關分析TCRζ鏈、ZAP70與其他檢測指標的相關性。結果 觀察組患者的TCRζ鏈、ZAP70相對表達量均顯著低于對照組（Plt;0.05），CD8+、白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6）均顯著高于對照組（Plt;0.05）。Pearson相關分析顯示：TCRζ鏈與CD4+呈正相關，與CD8+、IL-6呈負相關（Plt;0.05）；ZAP70與CD8+、IL-6呈負相關（Plt;0.05）。結論 PSS患者的TCRζ鏈及ZAP70表達均下調，可能通過T細胞信號傳導異常加劇PSS的免疫紊亂。

[關鍵詞] 原發性干燥綜合征；T細胞受體ζ鏈；Zeta鏈相關蛋白激酶70；T細胞亞群；發病機制

[中圖分類號] R446.62" " " [文獻標識碼] A" " " [DOI] 10.3969/j.issn.1673-9701.2025.22.004

Expression of TCRζ chain and ZAP70 in primary Sj?gren syndrome

SHI Zhen1， HAO Meng1， JIANG-FANG Tinghui1， XUE Guohui1， YU Le2

1.Department of Clinical Laboratory， Jiujiang NO.1 People’s Hospital， Jiujiang 332000， Jiangxi， China; 2.Department of Rheumatology and Immunology， Jiujiang NO.1 People’s Hospital， Jiujiang 332000， Jiangxi， China

[Abstract] Objective To investigate the expression levels of T cell receptor （TCR） ζ chain and Zeta-chain-associated protein kinase 70 （ZAP70） in peripheral blood of patients with primary Sj?gren syndrome （PSS）. Methods Thirty-six patients with PSS who were treated at Jiujiang NO.1 People’s Hospital from January to June 2024 were enrolled in observation group， and 30 healthy subjects during the same period were enrolled in control group. Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction was used to detect the expression levels of TCRζ chain and ZAP70 in peripheral blood mononuclear cells， and flow cytometry was used to detect peripheral blood T cell subsets. Pearson correlation was used to analyze the correlation between TCRζ chain， ZAP70 and other detection indicators. Results The relative expression levels of TCRζ chain and ZAP70 in observation group were significantly lower than those in control group （Plt;0.05）， while CD8+ and interleukin-6 （IL-6） were significantly higher than those in control group （Plt;0.05）. Pearson correlation analysis showed that TCRζ chain was positively correlated with CD4+， and negatively correlated with CD8+ and IL-6 （Plt;0.05）. ZAP70 was negatively correlated with CD8+ and IL-6 （Plt;0.05）. Conclusion The expressions of TCRζ chain and ZAP70 are down-regulated in PSS patients， which may exacerbate the immune disorder of PSS through abnormal T cell signal transduction.

[Key words] Primary Sj?gren syndrome; T cell receptor ζ chain; Zeta-chain-associated protein kinase 70; T cell subsets; Pathogenesis

原發性干燥綜合征（primary Sj?gren syndrome，PSS）是一種累及外分泌腺的慢性炎癥性自身免疫病，臨床上常見侵犯唾液腺和淚腺，表現為口眼干燥。PSS在人群中的發病率為0.3%～1.5%，女性群體更常見[1]。該病可累及肺臟、肝臟、腎臟、血液、神經等器官和系統，臨床表現多樣，嚴重時可因并發癥而危及生命[2]。PSS的發病主要與環境、內分泌、免疫和遺傳因素有關[3]。目前認為PSS早期以T細胞介導為主，T細胞的異常激活可誘發炎癥細胞浸潤[4]；" T細胞受體（T cell receptor，TCR）/CD3復合物與抗原呈遞細胞表面的主要組織相容性復合體抗原肽結合，是T細胞特異性識別抗原、進而活化細胞、傳導信號并激發抗原特異性免疫反應的重要起始途徑。T細胞的活化受TCRζ鏈數量影響。Zeta鏈相關蛋白激酶70（Zeta-chain-associated protein kinase 70，ZAP70）作為一種在TCRζ鏈下游信號傳導中發揮重要作用的酪氨酸蛋白激酶，與TCRζ鏈共同參與對T細胞免疫活化的調控，維持機體正常的免疫功能。目前關于TCRζ鏈及ZAP70表達缺失如何導致TCR/CD3復合物引起T細胞活化異常的機制尚不明確。TCRζ鏈與ZAP70在免疫缺陷疾病[5]、淋巴瘤[6]、關節炎[7]等疾病中異常表達，但關于TCRζ鏈與ZAP70在干燥綜合征中表達的研究較少。本課題通過檢測PSS患者外周血中TCRζ鏈及ZAP70表達水平，探索TCRζ鏈及ZAP70參與PSS發病的機制，為臨床診療提供新的思路和方向。

1" 資料與方法

1.1" 研究對象

選取2024年1月至6月于九江市第一人民醫院就診的PSS患者36例為觀察組。納入標準：①符合2016年美國風濕病學會/歐洲抗風濕病聯盟制定的PSS分類標準[8]；②至少有眼干或口干癥狀之一且持續3個月以上，或出現自身抗體陽性。排除標準：①合并其他自身免疫病；②近期患感染性疾?。? "③合并腫瘤。選取同期健康體檢者30名納入對照組。本研究經九江市第一人民醫院醫學倫理委員會審查批準（倫理審批號：JJSDYRMYY-YXLL-2025-055），所有研究對象均在充分了解研究相關事宜后簽署知情同意書，自愿參與本研究。

1.2" 檢測方法

1.2.1" TCRζ鏈、ZAP70的檢測" 采集受試者抗凝全血6ml，密度梯度離心法采集外周血單個核細胞，將其懸液轉移至2.0ml的離心管中，1500轉/min室溫離心5～10min；棄上清液，向剩余沉淀細胞中加1ml Trizol試劑，反復吹打直至沉淀細胞溶解；室溫靜置5min，預冷離心機4℃、2000轉/min離心30min；加入0.2ml氯仿至已裂解完全的細胞中，振蕩10～15s，室溫靜置5min；4℃、12 000轉/min離心15min；留取上層清液轉移至新的2.0ml離心管中（嚴禁吸取中下層），并向離心管中加入與上清液等體積的異丙醇，混勻，室溫靜置5～10min；4℃、12 000轉/min離心10min，棄去上清液；加入75%乙醇1ml混勻清洗沉淀物；4℃、12 000轉/min離心10min；棄去上清液，室溫下于超凈臺內干燥10～15min，溶于DEPC水中至20μl，振蕩器振蕩至完全溶解。

根據TCRζ鏈、ZAP70基因序列引物，應用Takara公司逆轉錄試劑盒進行逆轉錄。采用實時熒光定量聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）儀進行檢測。

1.2.2" T細胞亞群、超敏C反應蛋白、白細胞介素-6的檢測" 采用RaiseCyte 2L6C流式細胞儀檢測T細胞亞群CD4+、CD8+。采用貝克曼特定蛋白儀散射免疫比濁法檢測超敏C反應蛋白（hypersensitive C-reaction protein，hsCRP），采用羅氏化學發光儀檢測血清白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6）。

1.3" 統計學方法

采用SPSS 22.0統計軟件分析處理數據。符合正態分布的計量資料以均數±標準差（ ）表示，比較采用t檢驗。計數資料以例數（百分率）[n（%）]表示，比較采用χ2檢驗。采用Pearson相關分析各指標之間的相關性。Plt;0.05為差異有統計學意義。

2" 結果

2.1" 兩組研究對象的一般資料比較

觀察組男7例，女29例；年齡23～67歲，平均（40.3±8.4）歲；病程2.1～18.1年，平均（3.5±0.9）年。對照組男6例，女24例；年齡22～65歲，平均（39.9±8.2）歲。兩組研究對象的性別、年齡比較差異均無統計學意義（Pgt;0.05）。

2.2" 兩組研究對象的TCRζ鏈、ZAP70、CD4+、CD8+、hsCRP、IL-6比較

觀察組患者的TCRζ鏈、ZAP70相對表達量均顯著低于對照組（Plt;0.05），CD8+、IL-6均顯著高于對照組（Plt;0.05），兩組研究對象的CD4+、hsCRP比較差異均無統計學意義（Pgt;0.05），見表1。

2.3" 觀察組TCRζ鏈、ZAP70與CD4+、CD8+、hsCRP、IL-6的相關性

TCRζ鏈與CD4+呈正相關，與CD8+、IL-6呈負相關（Plt;0.05），與hsCRP無明顯相關性（Pgt;0.05），見表2。ZAP70與CD8+、IL-6呈負相關（Plt;0.05），與CD4+、hs-CRP均無明顯相關性（Pgt;0.05）。

3" 討論

PSS是一種由多種因素共同作用致使機體細胞免疫和體液免疫出現異常復雜的自身免疫病；主要特征為唾液腺和淚腺遭受免疫介導損傷，進而引發口干、眼干等癥狀。在PSS患者的血清中可檢測到多種自身抗體、炎癥因子、免疫復合物及高水平的類風濕因子和免疫球蛋白G[9]。免疫功能失調在多種自身免疫病發病機制中起重要作用，特別是T細胞免疫功能異常。研究表明T細胞在PSS組織損傷進程中扮演關鍵角色，參與對唾液腺、淚腺等組織的破壞，影響疾病的發生、發展。T細胞信號傳導異常是T細胞免疫功能障礙的基礎[10]。研究發現PSS的發病與T細胞亞群表達失調有關。T細胞可通過分泌IL-6等細胞因子實現免疫調節功能。具體而言，T細胞分泌的細胞因子參與誘導B細胞活化、促進其增殖，還可促使B細胞產生抗體，并推動免疫球蛋白的類別轉換等一系列免疫反應，參與PSS的發病進程[11]。TCRζ鏈作為受體激活的蛋白酪氨酸激酶底物，在受體與配體結合后發生酪氨酸磷酸化，參與淋巴細胞活化信號的轉導。研究發現TCRζ鏈表達和功能改變與慢性炎癥及自身免疫病密切相關，其表達降低可能削弱TCR信號傳導，導致T細胞異?；罨痆12]。在類風濕關節炎患者中，外周血T細胞中的TCRζ鏈表達明顯降低甚至缺失，與疾病活動度相關[13]。ZAP70蛋白在免疫細胞的生理活動中扮演重要角色，其存在于T細胞的細胞質內，一旦細胞信號通路被激活，ZAP70蛋白被募集至細胞膜上，對胸腺細胞的活化、成熟、細胞間黏附及細胞因子分泌等方面產生影響。正常生理狀態下，ZAP70在T細胞和自然殺傷細胞中普遍表達，在B細胞內卻不表達。研究發現ZAP70下調影響T細胞功能，加劇B細胞過度活化，被認為是判斷慢性淋巴細胞白血病預后的獨立指標[14]。

本研究發現PSS患者外周血TCRζ鏈和ZAP70表達均下調，與類風濕關節炎、系統性紅斑狼瘡、腫瘤等疾病中TCRζ鏈和ZAP70表達下調的研究結果基本一致[13]；可能與PSS中抗炎因子減少抑制TCRζ鏈及ZAP70的表達水平有關[15]。TCRζ鏈及ZAP70的表達與CD8+、IL-6水平存在負相關，提示其表達下調或缺失可能導致機體免疫功能進一步紊亂。TCR/CD3復合物是T細胞信號傳導的重要結構，TCRζ鏈是一種跨膜信號蛋白，受體與配體結合后，TCRζ鏈發生酪氨酸磷酸化，參加淋巴細胞活化；ZAP70作為與TCRζ鏈密切相關的蛋白酪氨酸激酶，在眾多下游靶基因信號傳導的起始、激活及磷酸化環節中，均承擔舉足輕重的作用[16]。

綜上，TCRζ鏈和ZAP70在PSS患者中低表達，與T細胞亞群有相關性，可為PSS發病機制的研究提供線索，為臨床診療提供新的思路和方向。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

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（收稿日期：2025–03–01）

（修回日期：2025–06–25）