SLPI在宮頸腺癌的表達及其與HPV感染相關性研究

[摘要] 目的 探討分泌型白細胞蛋白酶抑制因子（secretory leukocyte protease inhibitor，SLPI）在宮頸腺癌（cervical adenocarcinoma，CA）及宮頸原位腺癌（adenocarcinoma in situ，AIS）中的表達及臨床病理意義，分析SLPI表達與人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染的相關性。方法 選取南華大學附屬長沙中心醫院病理科2019年1月至2022年12月診斷的87例宮頸腺體病變患者，對其組織進行SLPI蛋白免疫組織染色及HPV基因檢測，探尋SLPI在CA、AIS及正常宮頸腺體中的表達情況，分析其表達水平與CA患者臨床病理特征及HPV感染之間的相關性。結果 SLPI蛋白在AIS及CA組織中的表達水平顯著低于正常宮頸組織（Plt;0.05）；SLPI的表達與HPV感染之間呈負相關（r=–0.353，Plt;0.05）；SLPI的表達與CA的HPV感染狀態、組織學分化、脈管侵犯情況、淋巴結轉移狀況、Silva分型及國際婦產科聯盟分期均存在顯著相關性（Plt;0.05）。結論 SLPI在CA中低表達，與侵襲性的生物學病理特征密切相關，且SLPI低表達狀態與HPV感染相關，提示SLPI可能作為抑癌因子參與CA的進展，SLPI表達下降可能提示HPV感染。SLPI有望發展為CA精準診療與預后評估的有效潛在生物標志物。

[關鍵詞] 分泌型白細胞蛋白酶抑制因子；宮頸原位腺癌；宮頸腺癌；人乳頭瘤病毒

[中圖分類號] R737.3" """"[文獻標識碼] A """""[DOI] 10.3969/j.issn.1673-9701.2025.24.005

Research on the expression of SLPI in cervical adenocarcinoma and its correlation with HPV infection

ZHOU Jing， JIANG Shali

Department of Pathology， the Affiliated Changsha Central Hospital， Hengyang Medical School， University of South China Changsha Central Hospital， Changsha 410004， Hunan， China

[Abstract] Objective To explore the expression and clinicopathological significance of secretory leukocyte protease inhibitor （SLPI） in cervical adenocarcinoma （CA） and adenocarcinoma in situ （AIS） of the cervix， and to analyze the correlation between SLPI expression and human papilloma virus （HPV） infection. Methods A total of 87 cases of cervical glandular lesions diagnosed in the Department of Pathology， the Affiliated Changsha Central Hospital， Hengyang Medical School， University of South China Changsha Central Hospital， from January 2019 to December 2022 were selected. Immunohistochemical staining of SLPI protein and HPV gene detection were performed on the tissues to explore the expression of SLPI in CA， AIS， and normal cervical glands， and to analyze the correlation between its expression level and the clinicopathological characteristics of CA patients and HPV infection. Results The expression of SLPI in AIS and CA tissues was lower than that in normal cervical tissues （Plt;0.05）. There was a negative correlation between the expression of SLPI and HPV infection （r=–0.353， P lt; 0.05）. The expression of SLPI was significantly correlated with histological differentiation， HPV infection， vascular invasion， lymph node metastasis， Silva classification， and International Federation of Gynecology and Obstetrics staging of CA （Plt;0.05）. Conclusion SLPI is low-expressed in CA， which is closely related to the invasive biological and pathological characteristics. The low expression of SLPI is related to HPV infection， suggesting that SLPI may participate in the progression of CA as a tumor-suppressor factor. The decrease in SLPI expression may indicate HPV infection. SLPI is expected to become a potential biomarker for the diagnosis， treatment， and prognosis of CA.

[Key words] Secretory leukocyte protease inhibitor; Adenocarcinoma in situ of cervix; Cervical adenocarcinoma; Human papilloma virus

宮頸癌是威脅女性健康的第四大常見惡性腫瘤，據統計世界范圍內宮頸癌每年新發病患約66萬例，死亡病例約35萬例^[1]。在宮頸癌組織學類型中，宮頸鱗癌較為常見。隨著宮頸防癌篩查的普及，宮頸鱗狀上皮內病變及宮頸鱗癌的發病率呈顯著下降趨勢，與之形成鮮明對比的是宮頸腺癌（cervical adenocarcinoma，CA）發病率在過去30年間呈現持續上升趨勢，且發病年齡逐漸年輕化^[2]。病因學研究表明持續性高危型人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染是導致宮頸惡性腫瘤發生發展的關鍵因素，盡管大部分CA患者存在HPV感染的證據，但仍有10%～15%的CA患者呈HPV陰性狀態。在臨床診療方面，宮頸癌的診斷水平和治療方式已有所提高，但相較于宮頸鱗癌，CA患者的5年生存率仍較低，這與其獨特的生物學行為密切相關^[3]。CA具有更強的侵襲性和轉移潛能，易發生早期脈管浸潤、宮旁轉移及遠處轉移，且腫瘤細胞對傳統放化療方案敏感度較低。探尋與腫瘤增殖、侵襲及轉移相關的關鍵分子，有助于闡明CA的惡性機制，為優化診療及改善預后提供一定理論依據。

分泌型白細胞蛋白酶抑制因子（secretory leukocyte protease inhibitor，SLPI）是一種由上皮細胞分泌的多功能蛋白，廣泛分布于黏膜表面。SLPI作為免疫調節因子具有抗蛋白酶、抗炎、抗菌等作用，參與細胞增殖調控，且在不同惡性腫瘤中表達調控不同^[4]。目前尚無研究報道SLPI在CA及宮頸原位腺癌（adenocarcinoma in situ，AIS）中的表達情況。本研究運用免疫組織化學染色技術，檢測SLPI在CA及其癌前病變中的蛋白表達特征，通過深入分析SLPI表達水平與臨床病理參數的相關性，并結合HPV DNA分型檢測結果，初步探討SLPI在CA發生、發展進程中的潛在作用機制及其與HPV感染的內在關聯，旨在發現更多與CA惡性進展相關的關鍵因子，提供重要的實驗數據支撐與理論依據。

1" 材料與方法

1.1 "一般資料

選取南華大學附屬長沙中心醫院病理科2019年1月至2022年12月診斷的87例宮頸腺體病變患者并收集其標本。選取經病理確診的87個（CA72個，AIS 15個）石蠟組織，同步進行HPV基因分型檢測。按HPV分型將CA分為HPV相關腺癌（n=52）和非HPV相關腺癌（n=20）；AIS分為HPV陽性組（n=12）與陰性組（n=3），另取87個病變旁正常宮頸組織作對照。

收集患者的臨床資料：年齡、腫瘤直徑、HPV感染狀態、組織學分化、浸潤深度、脈管及神經侵犯、淋巴結轉移、Silva分型和國際婦產科聯盟（International Federation of Gynecology and Obste-trics，FIGO）分期。參照FIGO分期系統^[5]、女性生殖器官世界衛生組織腫瘤分類^[6]及Silva分型系統^[7]進行分類。

1.2" 免疫組織化學法及結果判讀

采用鼠抗人SLPI單克隆抗體（Abcom公司，ab17157），以1 ： 50比例用免疫組化抗體稀釋液配制一抗。將石蠟標本制成3μm厚切片，經二甲苯脫蠟及梯度乙醇水化后，以 Tris-EDTA堿性溶液修復抗原20min，過氧化物酶封閉10min。滴加一抗于37℃孵育1h，二抗室溫孵育30min，辣根過氧化物酶-二氨基聯苯胺（horseradish peroxidase-diaminobenzidine，HRP-DAB）顯色5min后水洗終止，隨后復染、脫水、封片。由2名病理醫師雙盲閱片，每例隨機選取5個高倍視野（×200，細胞數gt;500 /視野）。根據陽性細胞百分比（lt;5%計0分，5%～25%計1分，26%～50%計2分，51%～75%計3分，76%～100%計4分）和染色強度（無色計0分，淡黃計1分，棕黃計2分，棕褐計3分）評分，兩者乘積為最終得分，0～6分為低表達，7～12分為高表達。

1.3" HPV檢測和基因分型

采用亞能公司HPV檢測試劑盒，以聚合酶鏈反應–反向點雜交法檢測蠟塊標本。具體步驟：將石蠟標本制成4μm切片，經裂解液處理提取DNA，隨后進行聚合酶鏈擴增、雜交、孵育及洗膜顯色。質控點IC位點顯色為紫藍色斑點，根據膜條上顯色結果判讀HPV感染基因型。

1.4 "統計學方法

采用SPSS 26.0統計學軟件對數據進行處理分析。計數資料以例數（百分率）[n（%）]表示，比較采用c²檢驗，其中nlt;5使用Fisher確切概率法進行顯著性檢驗。運用Spearman 秩相關分析評估SLPI表達與HPV感染狀態的關聯強度。Plt;0.05為差異有統計學意義。

2" 結果

2.1" HPV感染的宮頸腺體病變組織中的SLPI表達呈顯著降低趨勢

對87個宮頸病變組織標本行免疫組化及HPV檢測，結果顯示HPV陽性組（n=63）中 SLPI低表達43個（68.3%），高表達20個（31.7%）；HPV陰性組（n=24）中SLPI低表達7個（29.2%），高表達17個（70.8%）。Spearman相關性分析顯示SLPI表達與HPV感染呈顯著負相關（r=–0.353，P=0.001）。

2.2" SLPI在CA及原位腺癌中表達下調

對87個宮頸病變組織及病變旁組織行免疫組化染色，觀察SLPI蛋白的表達情況。結果顯示SLPI定位于細胞胞漿，病變組織中，低表達18個（20.7%），高表達69個（79.3%）；病變旁正常組織中，低表達50個（57.5%），高表達37個（42.5%）；SLPI在病變組織中的表達顯著低于正常組織（c²=16.795，Plt;0.05），見圖1。HPV相關腺癌中SLPI表達低于非HPV相關腺癌，且隨組織學分化程度降低，SLPI蛋白表達呈下降趨勢。

A.SLPI在正常宮頸腺體中表達（×200）；B.SLPI在原位腺癌及周圍正常腺體中表達（×200）；C.SLPI在HPV相關型腺癌（普通型）中表達（×200）；D.SLPI在非HPV相關型腺癌（胃型）中表達（×200）；E.SLPI在非HPV相關型腺癌（透明細胞型）中表達（×200）；F.SLPI在CA（高分化）中表達（×200）；G.SLPI在CA（中分化）中表達（×200）；H.SLPI在CA（低分化）中表達（×200）

2.3" CA患者臨床病理參數與SLPI之間的相互關系

SLPI蛋白的表達與HPV感染、組織學分化程度、脈管侵犯、淋巴結轉移情況、HPV相關性腺癌的Silva分型、FIGO分期顯著相關；與年齡、腫瘤直徑、浸潤深度、神經侵犯之間無顯著相關性，見表1。

3 "討論

SLPI屬于乳清酸性蛋白家族，基因定位于20q12-13.2號染色體區域，由4個外顯子和3個內含子構成，跨度約2.6kb^[8]；SLPI由多種上皮細胞分泌，廣泛分布于呼吸道、消化道及泌尿道等黏膜表面，及皮膚表皮細胞和唾液腺、腮腺、乳腺等腺上皮細胞。檢測顯示其血漿濃度較黏膜分泌液低，提示功能主要體現于局部組織^[9]。作為蛋白酶抑制劑，SLPI具有抗菌、抗病毒及調控炎癥的特性，主要機制為抑制核因子-κB（nuclear factor-kappaB，NF-κB）通路阻斷促炎基因轉錄。此外，還可促進細胞增殖分化，調節凋亡相關蛋白活性抑制凋亡，對維持細胞正常生長和內環境穩態至關重要^[10]。

研究證實SLPI是陰道與宮頸黏液防御核心。其抗菌抗病毒活性可抑制陰道毛滴蟲、淋球菌、沙眼衣原體及人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）、單純皰疹病毒、HPV等病原體。在抗病毒機制上，SLPI通過與膜聯蛋白Ⅱ（annexin Ⅱ，AnxA2）和膜相關蛋白Scramblase1結合，阻斷HIV與宿主細胞膜融合，進而抑制HIV感染^[11]。研究表明SLPI的抗HPV功能同樣也是通過競爭性結合AnxA2，阻止HPV與宿主細胞之間的結合^[12]。Quabius等^[13]發現在頭頸部鱗狀細胞癌（head and neck squamous cell carcinoma，HNSCC）領域HPV感染狀態與SLPI表達存在明顯負相關特性：HPV陽性組織中的SLPI表達顯著降低，AnxA2表達則上調，提示SLPI低表達可促進HPV感染，高表達可防御HPV入侵。本研究結果與之一致，HPV感染組織SLPI表達顯著低于未感染組，宮頸腺體發生病變時SLPI低表達或可作為HPV感染的潛在標志物。

SLPI作為腫瘤調節因子有雙向調控作用：在卵巢癌、結腸癌、胃癌及甲狀腺癌等腫瘤中，SLPI表達呈上調趨勢，有促進腫瘤的作用；在乳腺癌、肝癌、HNSCC及宮頸鱗狀細胞癌中，SLPI表達水平下調，發揮抑癌功能^[14]。在口腔鱗狀細胞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）及其癌前病變白斑組織中，SLPI表達低于正?？谇簧掀ぃ襉SCC中更低。功能實驗結果顯示SLPI可抑制口腔白斑及OSCC的細胞增殖，并誘導細胞凋亡，這一作用機制可能與抑制NF-κB通路密切相關^[15]。Jin等^[16]研究發現 HNSCC中HPV E6癌基因通過激活NF-κB和蛋白激酶B途徑加速腫瘤惡化，而SLPI可逆轉此過程，且HPV陽性HNSCC中SLPI表達更低。本研究表明SLPI 在CA及AIS組織中的表達顯著低于正常宮頸組織，結合SLPI與HPV感染之間的負相關性，推測SLPI可通過抑制HPV E6癌基因激活發揮抑癌效應，表達下調或可作為宮頸腺體病變的潛在標志物。

腫瘤大小、組織學分級、浸潤深度、淋巴結轉移、脈管侵犯及FIGO分期等是影響宮頸癌預后的主要因素。Silva分型對HPV相關浸潤性CA的淋巴結轉移判斷及預后評估意義重大^[17]。本研究證實SLPI表達與CA患者的組織學分化、HPV感染、脈管侵犯、淋巴結轉移、Silva分型及FIGO分期顯著相關。Wen等^[18]研究表明在HNSCC中SLPI與腫瘤入侵參數呈反向關聯，SLPI抗蛋白酶活性可阻斷腫瘤細胞突破基底膜，阻礙腫瘤細胞在遷移中借助纖溶酶及基質金屬蛋白酶重塑周圍組織，進而抑制侵襲和轉移，并建議其作為術后無淋巴結轉移患者的預后標志物。肝癌體外實驗表明SLPI可通過增強絲裂原活化蛋白激酶信號通路介導的內質網應激誘導肝癌細胞凋亡，因此SLPI可作為一種潛在的預后生物標志物^[19]。本研究中脈管浸潤及淋巴結轉移患者的SLPI表達顯著降低，提示可作為CA預后評估的潛在指標，與FIGO分期及Silva分型的相關性或為預后評估提供關鍵參考。本研究雖初步揭示SLPI在CA中的蛋白表達特征，但基因轉錄調控機制及參與CA發生發展的分子路徑仍需深入研究。

SLPI與HPV感染及宮頸病變演變過程緊密相關，其低表達狀態或可作為HPV感染的潛在預警信號。在CA演變過程中，SLPI發揮腫瘤抑制因子功能，其表達下調與腫瘤分化程度降低、脈管侵襲性增強、淋巴結轉移風險升高相關。SLPI表達水平與FIGO分期及非HPV相關腺癌的Silva分型存在顯著相關性，這一發現為今后研究CA發病機制提供實驗依據，也為臨床精準評估患者預后提供參考方向。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

[參考文獻]

[1]"" BRAY F， LAVERSANNE M， SUNG H， et al. Global cancer statistics 2022： GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries[J]. CA Cancer J Clin ， 2024， 74（3）： 229–263.

[2]"" LIU P， JI M， KONG Y， et al. Comparison of """"survival outcomes between squamous cell carcinoma and adenocarcinoma/adenosquamous carcinoma of the cervix after radical radiotherapy and chemotherapy[J]. BMC Cancer， 2022， 22（1）： 326.

[3]nbsp;" 吳錦科， 曾超. 宮頸腺癌相關預后生物標記物特異性表達與臨床研究進展[J]. 醫學理論與實踐， 2021， 34（8）： 1291–1293.

[4]nbsp;" ZHANG X， LIU S S， MA J， et al. Secretory leukocyte protease inhibitor （SLPI） in cancer pathophysiology： Mechanisms of action and clinical implications[J]. Pathol Res Pract ， 2023， 248： 154633.

[5]"" 李靜， 索紅燕， 孔為民. 《國際婦產科聯盟（FIGO）2018癌癥報告： 宮頸癌新分期及診治指南》解讀[J]. 中國臨床醫生雜志， 2019， 47（6）： 646–649.

[6]"" MCCLUGGAGE W G， SINGH N， GILKS C B. Key changes to the World Health Organization （WHO） classification of female genital tumours introduced in the 5th edition （2020）[J]. Histopathology， 2022， 80（5）： 762–778.

[7]"" CHEN M， HAN L， WANG Y， et al. Association between Silva pattern-based classification and endocervical adenocarcinoma： A systematic review and Meta-analysis[J]. Int J Gynecol Cancer， 2024， 34（11）： 1704–1710.