頻繁飲食對人體糖脂代謝及生物節(jié)律表達(dá)的影響研究

【摘要】背景糖脂代謝相關(guān)疾病發(fā)病率逐年上升，飲食模式被普遍認(rèn)為與其發(fā)生密切相關(guān)。飲食不當(dāng)會導(dǎo)致生物節(jié)律紊亂，這一過程又受到多種基因的調(diào)節(jié)。明確不同飲食方式的作用，對預(yù)防代謝疾病的發(fā)生至關(guān)重要。但是目前相關(guān)流行病學(xué)資料和人群研究的證據(jù)較少。目的探討頻繁飲食對人體糖脂代謝及生物節(jié)律表達(dá)的影響，為健康人群飲食頻率與疾病風(fēng)險研究提供思路。方法于2022年4—5月招募作息規(guī)律、飲食規(guī)律、零食攝入適中的18～29歲健康志愿者作為研究對象。將篩選出的20名健康志愿者簡單隨機(jī)分為三餐組（10名）和六餐組（10名）進(jìn)行交叉干預(yù)。三餐組攝入3頓主食，進(jìn)食時間分別為7：00、12：00、18：00；六餐組在三餐進(jìn)食時間點之外，分別在10：00、15：00、20：00給予口服溶有 75g 無水葡萄糖粉的 300mL 糖水。兩組單次干預(yù)時間為1d，分別于8個時間點（7：00、8：00、10：00、12：00、13：00、16：00、20：00、次日2：00）采血樣，檢測血清中糖脂代謝相關(guān)指標(biāo)［總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、血糖、胰島素、瘦素］及各節(jié)律基因（Clock、Bmal1、Per2、Cry1、Ppar ∝ 和 Sirt 1 ）的mRNA表達(dá)水平并比較。結(jié)果組別和時間對 TG水平存在交互作用（ ， P_☉m=0.032 ），組別在LDL-C水平上主效應(yīng)顯著（ F_?[?]=4.803 ， P_?Hfal=0.030 ），時間在 TC水平上主效應(yīng)顯著（ ， ）；兩組各時間點TC、TG、LDL-C、HDL-C水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（ Pgt;0.05 ）。組別和時間對血糖水平存在交互作用（ ），組別在胰島素水平上主效應(yīng)顯著 （ ， P_ΠΞ[i]lt;0.001 ），時間在血糖、胰島素、瘦素水平上主效應(yīng)均顯著（ F_??f/B=10.840 、2.399、4.347，P_⊥figle10.05 ）；六餐組12：00、20：00血糖水平及10：00、16：00胰島素水平高于三餐組，16：00瘦素水平低于三餐組（ Plt;0.05 ）。組別和時間對Cry1基因的mRNA表達(dá)水平存在交互作用（ F_☉E=30.250 P_☉lt;0.001 ），組別在Clock、Bmal 1、 Per2 、Cry1、Ppar ∝ 、 Sirt 1 基因的mRNA表達(dá)水平上主效應(yīng)均顯著（ P_?Higlt;0.05 ），時間在 Bmal 1 ！Per2、Cry1、Sirt1基因的mRNA表達(dá)水平上主效應(yīng)均顯著（ ）；六餐組8：00、13：00時Clock基因的mRNA表達(dá)水平，8：00、16：00和次日2：00時 Per2 基因的mRNA表達(dá)水平，7：00、8：00、10：00時 Cry 1 基因的mRNA表達(dá)水平高于三餐組（ Plt;0.05 ）；六餐組10：00、12：00和13：00時 Bmal1 基因的 表達(dá)水平，20：00和次日2：00時Cry1基因的mRNA表達(dá)水平低于三餐組（ Plt;0.05 ）；兩組各時間點Ppar ∝ 基因、 Sirt 1 基因的mRNA表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（ Pgt;0.05 ）。結(jié)論頻繁進(jìn)食的六餐組會引起胰島素和血糖水平升高，調(diào)節(jié)機(jī)制失衡，造成人體機(jī)體糖代謝水平穩(wěn)態(tài)失衡。同時會影響各時鐘基因水平的表達(dá)、相位和振幅，導(dǎo)致機(jī)體節(jié)律紊亂。

【中圖分類號】 R349.1【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A DOI：10.12114/j.issn.1007-9572.2024.0684

隨著現(xiàn)代社會生活節(jié)奏的加速與飲食文化的多元化，人們逐漸從規(guī)律性三餐飲食轉(zhuǎn)向高頻次、碎片化的進(jìn)食方式。頻繁飲食不僅改變了能量攝入的時空分布，還可能通過干擾人體內(nèi)源性生物節(jié)律系統(tǒng)的表達(dá)，對機(jī)體糖脂代謝穩(wěn)態(tài)產(chǎn)生影響。糖脂代謝相關(guān)疾病與飲食模式之間有重要關(guān)系，現(xiàn)有研究多聚焦于單一營養(yǎng)素或總能量攝入對代謝的影響，而關(guān)于飲食時間分布、進(jìn)食頻率等對于生物節(jié)律、糖脂代謝的影響研究較少。

有研究表明，除了3頓標(biāo)準(zhǔn)餐（早餐、午餐和晚餐）外，額外零食攝入的增加與2型糖尿病（T2DM）風(fēng)險增加相關(guān)[1]。因此提出日常中減少進(jìn)餐頻率，從而降低空腹血糖[2]，減少肥胖、高膽固醇血癥和葡萄糖耐量異常的發(fā)病風(fēng)險[3]。但ALENCAR等［4]認(rèn)為，空腹血糖和胰島素不受每天兩餐或六餐膳食模式的影響。也有研究提出，在一定進(jìn)餐頻率的條件下，間歇性或周期性的禁食狀態(tài)有助于減少肥胖、高血壓等，有幫助預(yù)防和治療疾病的作用[5]。因此，進(jìn)餐頻率對機(jī)體代謝會產(chǎn)生什么樣的影響，說法不一。

生物節(jié)律作為內(nèi)源性生物鐘，不僅能響應(yīng)每天的環(huán)境周期，還通過調(diào)控胰島素分泌、敏感性及膽固醇合成等代謝活動，成為糖脂代謝的“核心樞紐”［6-8］。時鐘基因突變小鼠會出現(xiàn)肥胖、高血糖、肝脂肪變性等代謝綜合征［8]，而人體晝夜節(jié)律失調(diào)會導(dǎo)致糖尿病前期的血糖異常及代謝指標(biāo)升高[9-10]，這揭示了生物節(jié)律與糖脂能量代謝的密切關(guān)聯(lián)[11]。除光照外，飲食是調(diào)節(jié)生物節(jié)律的關(guān)鍵因子，非常規(guī)進(jìn)食時間可擾亂消化系統(tǒng)生物鐘并影響血糖波動[12-14]。動物實驗證實規(guī)律進(jìn)食能恢復(fù)肝臟基因節(jié)律表達(dá)[15]，而進(jìn)食時間紊亂會引發(fā)胃腸及代謝功能障礙[16-18]，表明飲食與生物節(jié)律的同步性對維持代謝穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要。

生活條件的改善使得糖尿病和高血脂的發(fā)病率逐年上升，這是否與現(xiàn)在生活中的頻繁飲食行為有關(guān)？頻繁進(jìn)食是否會通過干擾生物節(jié)律進(jìn)而導(dǎo)致機(jī)體的代謝紊亂？本研究采用交叉干預(yù)試驗，探索了不同飲食頻率對健康人糖脂代謝以及生物節(jié)律基因表達(dá)所產(chǎn)生的影響，以期為飲食頻率與代謝紊亂關(guān)系的研究提供新的思路。在糖脂代謝疾病全球負(fù)擔(dān)加重的背景下，揭示飲食節(jié)律對代謝健康的調(diào)控作用，對預(yù)防和精準(zhǔn)營養(yǎng)管理具有重要的公共衛(wèi)生意義。

1資料與方法

1.1 研究對象

于2022年4—5月在寧夏醫(yī)科大學(xué)通過校園宣傳海報招募作息規(guī)律、飲食規(guī)律、零食攝入適中的18～29歲健康志愿者作為研究對象。根據(jù)納、排標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩檢，所有志愿者簽署知情同意書。本研究經(jīng)寧夏醫(yī)科大學(xué)倫理委員會審查批準(zhǔn)（寧醫(yī)大倫理第2019-108號）。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）BMI為 18～lt;24kg/m² ；（2）無煙酒嗜好；（3）作息規(guī)律，即近1年每天起床時間為7：00～9：00；（4）入睡時間為21：00～23：00；（5）飲食規(guī)律，即近1年內(nèi)三餐正常且規(guī)律，早餐7：00～9：00，午餐11：00～3：00；晚餐17：00～19：00；（6）零食攝入適中：每周有2～4d吃零食、水果或含糖飲料。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）女性腹圍 ?80cm ，男性腹圍?85cm ；（2）患有內(nèi)分泌或代謝性疾病、胃部疾病、肝膽疾病及其他慢性病的人群；（3）近2個月內(nèi)有急性感染、接受過任何藥物治療、有手術(shù)史的人群，以排除混雜因素的干擾；（4）有糖尿病家族史人群。

1.2樣本量估計

研究主要考察節(jié)律基因 circadian locomoter outputcycleskaput（Clock）、brainandmusclearnt-likeprotein-1（Bmal1）表達(dá)水平的改變。采用流行病學(xué)兩樣本均數(shù)比較的樣本量計算公式： N=2 （ Z_α+Z_β ） ²σ²/d² 根據(jù)相關(guān)試驗研究數(shù)據(jù)[19]，健康人餐后 210min Clock、Bmal1基因蛋白表達(dá)水平的差 d 為0.325，標(biāo)準(zhǔn)差為0.192（即 σ 取0.192）， α 取0.05水平， β 取0.1，雙側(cè)檢驗，將數(shù)值帶入公式求得 N≈8 ，設(shè)定每組10人。

1.3干預(yù)方法

本研究共納入20名研究對象，采用簡單隨機(jī)分組方法，采用Excel產(chǎn)生隨機(jī)數(shù)，將研究對象隨機(jī)分為三餐組（10名）和六餐組（10名）。三餐組攝入3頓主食，六餐組扣除葡萄糖水的能量后給予主食，其余副食與三餐組攝入一致，以保證攝入能量相同，具體飲食內(nèi)容見表1。為防止被干預(yù)人群的短期生活作息習(xí)慣對研究的影響，試驗前一周規(guī)定研究對象的起床時間（7：00～9：00）、睡覺時間（21：00～23：00）和三餐進(jìn)食的時間（早餐7：00～9：00，午餐11：00～13：00，晚餐17：00～19：00），以確保規(guī)律；至干預(yù)前一天均正常三餐飲食，避免攝入零食，20：00開始禁食。本研究設(shè)計為交叉干預(yù)試驗，單次干預(yù)時間為1d，1周洗脫期后進(jìn)行交叉干預(yù)。三餐組進(jìn)食的時間分別為7：00、12：00、18：00，就餐時間為 30～40min ；六餐組在保證能量攝入相同下，在三餐進(jìn)食時間點之外，分別在10：00、15：00、20：00給予口服溶有 75g 無水葡萄糖粉的 300mL 糖水，能量為 300kcal ，就餐時間為30～40min ，糖水需在 15min 內(nèi)喝完。

表1三餐組男、女生飲食內(nèi)容

Table1 Dietary content of males and females in the three-meal group

注：“表示與男生不同的女生飲食。

1.4樣本采集與處理

早晨7：00用餐前和用餐后1h采集外周靜脈血樣，此后分別在10：00、12：00、13：00、16：00、20：00和次日2：00采血（共采樣8次）。每次取樣促凝、抗凝管各2管， 4～5mL 管。促凝管采血管室溫靜置10～20min ，抗凝管顛倒4～5次，使抗凝劑充分混合。1000×g 離心 15min 。將血清（促凝管上清液）、血漿（抗凝管上清液）、血細(xì)胞（抗凝管下層）按1次使用量（約 300μL ）分裝于 -80^°C 冰箱備用。

1.5檢測指標(biāo)

使用全自動生化分析儀測定各時點兩組人群血清中血糖以及總膽固醇（totalcholesterol，TC）、三酰甘油（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low-densitylipoproteincholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoproteincholesterol，HDL-C）的含量;使用酶聯(lián)免疫吸附測定法（enzyme-linked immunosorbentassay，ELISA）測定各時點兩組人群血清中胰島素、瘦素;定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法（quantitativepolymerasechainreaction，qPCR）檢測Clock、Bmal ^1， cryptochrome 1（Cry1）、period 2（ Per2 ）、sirtuin-1（Sirt1）和peroxisomeproliferators-activated receptors ∝ （ ）的表達(dá)。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS24.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。符合正態(tài)分布的計量資料以 ）表示，兩組同時間點比較采用獨立樣本 χ_t 檢驗，兩組隨時間變化的比較采用重復(fù)測量的方差分析，圖形繪制使用GraphPadprism10。以 Plt;0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1不同飲食頻率對血脂指標(biāo)的影響

組別和時間對TG水平存在交互作用（ ），組別和時間對TC、LDL-C、HDL-C水平不存在交互作用（ ）；組別在LDL-C水平上主效應(yīng)顯著（ ， P_?H/?j=0.030 ），時間在TC水平上主效應(yīng)顯著（ ， ）。兩組各時間點TC、TG、LDL-C、HDL-C水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（ Pgt;0.05 ），見表2。

2.2不同飲食頻率對血糖、胰島素和瘦素的影響

組別和時間對血糖水平存在交互作用（ ），組別和時間對胰島素、瘦素水平不存在交互作用（ Pgt;0.05 ）；組別在胰島素水平上主效應(yīng)顯著（ ！ P_?Higlt;0.001 ），時間在血糖、胰島素、瘦素水平上主效應(yīng)均顯著（ 、2.399、4.347， ）。六餐組12：00、20：00血糖水平及

10：00、16：00胰島素水平高于三餐組，16：00瘦素水平低于三餐組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ Plt;0.05 ）；其余各時間點兩組血糖、胰島素、瘦素比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（ Pgt;0.05 ），見表3。

2.3不同飲食頻率對人體生物節(jié)律蛋白的影響

組別和時間對Cry1基因的mRNA表達(dá)水平存在交互作用（ ， ），組別和時間對Clock、Bmal1、Per2、Ppar ∝ 、 Sirt 1 基因的mRNA表達(dá)水平不存在交互作用（ Pgt;0.05 ）；組別在Clock、Bmal1、Per2 、Cry1、Ppar ∝ 、Sirt1基因的mRNA表達(dá)水平上主效應(yīng)均顯著（ P_?Higlt;0.05 ），時間在 Bmal1、Per 2、Cry1、Sirt1基因的mRNA表達(dá)水平上主效應(yīng)均顯著（ ）。六餐組8：00、13：00時Clock基因的mRNA表達(dá)水平，8：00、16：00和次日2：00時 Per2 基因的mRNA表達(dá)水平，7：00、8：00、10：00時Cry1基因的mRNA表達(dá)水平高于三餐組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ Plt;0.05 ）；六餐組10：00、12：00和13：00時Bmal1基因的mRNA表達(dá)水平，20：00和次日2：00時Cry1基因的mRNA表達(dá)水平低于三餐組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ Plt;0.05 ）；兩組各時間點Ppar ∝ 基因、Sirt1基因的mRNA表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（ Pgt;0.05 ），見表4。

3討論

本研究檢測了進(jìn)食頻率對生物鐘基因和代謝指標(biāo)的影響。考慮到代謝過程對進(jìn)食頻率的敏感性，通過控制人群的總能量攝入使其保持一致，讓兩組人群具有可比性，從而排除飲食成分和質(zhì)量等因素的干擾，觀察了1天內(nèi)不同飲食頻率下糖脂代謝指標(biāo)和生物節(jié)律基因表達(dá)的變化。血脂代謝異常在糖尿病中扮演重要角色，研究表明TC、TG、LDL-C的升高會增加T2DM的患病風(fēng)險[20-21]。而 HDL-C 則是一種載脂蛋白，是一種對血脂有益的膽固醇[20，22]。KAHLEOVA等[23]研究顯示，在每日能量相同的情況下，2頓大餐或6頓小餐兩種方案中TG和LDL-C的下降幅度相當(dāng)，且在任一方案中均未觀察到TC或HDL-C的顯著變化。一項對于肥胖女性的短期研究顯示，不同飲食頻率不會影響TC或LDL-C[4]。而此次交叉干預(yù)同樣未對機(jī)體TC、TG、LDL-C、HDL-C產(chǎn)生明顯的作用影響。說明進(jìn)餐的頻次對血脂代謝影響較小。

在一項基于空腹血糖受損的隨機(jī)交叉臨床試驗中，研究人員發(fā)現(xiàn)攝入能量相同而進(jìn)餐頻率不同時，短期增加進(jìn)餐次數(shù)可以有效改善血糖受損個體的葡萄糖代謝和胰島素分泌[24]。另一項基于T2DM患者的隨機(jī)臨床試驗研究也顯示，等熱量下的少食多餐使得T2DM患者血糖下降、胰島素的水平降低［25]。但一項關(guān)于T2DM的隨機(jī)對照研究發(fā)現(xiàn)，三餐飲食與等熱量的六餐相比更能顯著降低其糖化血紅蛋白（ HbA_lc ）、空腹血糖和每日24h 平均血糖水平［26]。另一項隨機(jī)對照試驗結(jié)果也顯示，進(jìn)餐頻率的增加會導(dǎo)致肝臟脂肪累積、胰島素敏感性下降，肥胖、暴飲暴食的風(fēng)險增加[27]。正常人的血糖在餐后即升高，至 2h 后開始下降至正常血糖水平。本研究顯示兩組在相應(yīng)的進(jìn)食時間后血糖均有相應(yīng)上升趨勢，而六餐組隨著進(jìn)食頻次的增加，機(jī)體高血糖平衡機(jī)制逐漸失衡，說明與一日六餐相比，一日三餐更加有利于血糖的控制。根據(jù)結(jié)果顯示，六餐組機(jī)體胰島素的變化趨勢未有明顯差異，但機(jī)體血清胰島素水平增加。導(dǎo)致這種結(jié)果的原因可能是機(jī)體為應(yīng)對短期內(nèi)突然增加的進(jìn)食頻率而更多分泌胰島素來控制機(jī)體血糖而產(chǎn)生的一種保護(hù)機(jī)制。提示頻繁進(jìn)食會過度刺激機(jī)體胰島素分泌。而瘦素來源于脂肪細(xì)胞，其產(chǎn)生可以減少食物的攝人，有助于減肥［28]。本研究中六餐組16：00瘦素水平低于三餐組，可能是頻繁進(jìn)食導(dǎo)致瘦素分泌減少，增加了肥胖的風(fēng)險。因此，對于糖代謝受損者來說，增加進(jìn)餐頻次可能有效改善個體糖代謝，而對于健康人群，飲食不規(guī)律會打斷胰島素的分泌節(jié)奏，即使是一天的頻繁飲食也會使機(jī)體的糖代謝發(fā)生紊亂。

Table2Comparison ofblood lipids betweenthe three-meal group and the six-meal group at diffrent time points

注： TC= 總膽固醇， TG= 三酰甘油，LDL- .C= 低密度脂蛋白膽固醇，HDL- ??C= 高密度脂蛋白膽固醇。

表2三餐組與六餐組各時間點血脂指標(biāo)比較（ ， mmol/L ）

表3三餐組與六餐組各時間點血糖、胰島素、瘦素水平比較（ ）

Cable3Comparisonofbloodglucose，insulin，andleptinlevelsbetweenthethmealgroupandsix-meal groupatdifrenttiepoints

注：“表示與三餐組比較 Plt;0.05_lt;

表4三餐組與六餐組各時間點節(jié)律基因表達(dá)比較（ ） Table 4Comparison ofcircadian gene expressions between three-meal group and six-meal group at different time points

注：“表示與三餐組比較 Plt;0.05，

從上述關(guān)于進(jìn)餐頻率對糖代謝影響的研究可以看出，合理的進(jìn)食模式對機(jī)體健康至關(guān)重要。而大多數(shù)生物的進(jìn)食被限制在一個特定的時間內(nèi)，留下間斷、短暫的禁食時間。這種進(jìn)食與禁食的規(guī)律安排并非偶然，因為禁食能使生物體進(jìn)入代謝階段，間歇性或定期禁食能有效預(yù)防代謝性疾病的發(fā)生。晝夜節(jié)律發(fā)生的基礎(chǔ)是在進(jìn)食期間時會儲存一部分能量以供在一天的其余非進(jìn)餐時間利用而不損害身體健康和活力[29]。在哺乳動物中，轉(zhuǎn)錄激活因子Clock、Bmal1在日間會結(jié)合到E-盒增強(qiáng)子元件上，驅(qū)動編碼周期晝夜節(jié)律蛋白 Per2 和Cry1的基因表達(dá)。在本研究結(jié)果中，下午時間段Clock、Bmal1 與 Per2 、Cry1的表達(dá)水平正好相反，這可能是由于Clock、Bmal1活化發(fā)生在日間，而 Per2 和Cry 1的基因表達(dá)在傍晚或夜間才開始積累且相互作用，一旦Per2 和Cry1蛋白達(dá)到臨界濃度就會減弱 Clock/Bmal1 介導(dǎo)的自身基因的激活，形成負(fù)反饋回路從而抑制了其轉(zhuǎn)錄， Per2 和Cry1的基因表達(dá)開始降低，而Clock、Bmal1基因在次日早上開始新的轉(zhuǎn)錄周期［30-32] 。

而本研究中所設(shè)計的六餐組在特定進(jìn)食的時間外攝入能量，打破了原有的生物規(guī)律，為應(yīng)對機(jī)體頻繁進(jìn)食狀態(tài)，機(jī)體的生物節(jié)律基因的表達(dá)也會相應(yīng)地發(fā)生變化。有研究顯示，頻繁飲食下，Clock、Ppar ∝ 、Sirt 1、Cry 1、Per2 基因的節(jié)律性表達(dá)均出現(xiàn)了增強(qiáng)，變化幅度增大，說明時鐘基因可以感測到細(xì)胞代謝和系統(tǒng)信號的每日變化，并能對晝夜節(jié)律轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行預(yù)測性改變[33]。不同于Clock時鐘基因， Bmal1 基因的表達(dá)水平在高頻飲食狀態(tài)下雖出現(xiàn)了振蕩，但整體的表達(dá)水平卻低于正常三餐組。Nature中有研究報道生物鐘在飲食代謝中具有重要作用［34]。有研究發(fā)現(xiàn)，小鼠體內(nèi)的胰島細(xì)胞擁有自己的生物鐘，且該生物鐘由Clock和Bmal1基因調(diào)控。當(dāng)Clock和 Bmal1 基因缺失時，會打破胰島的原有生物鐘，破壞睡眠－清醒周期中胰島素分泌的規(guī)律，導(dǎo)致Clock和 Bmal1 基因缺失的小鼠患上“胰島素水平過低癥”和糖尿病。而在本研究中，六餐飲食影響了Clock和Bmal1的表達(dá)，進(jìn)而對機(jī)體胰島素的敏感性產(chǎn)生了影響。一項小鼠實驗表明，由于Cry1的肝臟過度表達(dá)降低了胰島素抵抗db/db小鼠的血糖濃度并改善了胰島素敏感性[35]。這說明Cry1的表達(dá)水平可能與葡萄糖穩(wěn)態(tài)、胰島素分泌和胰島素敏感性密切相關(guān)，Cry1的過表達(dá)可能有利于T2DM的防治。而本研究中，六餐組中的Cry1基因的mRNA表達(dá)水平自12：00后20：00和次日2：00低于三餐組，頻繁飲食使得Cry1表達(dá)降低，而Cry1表達(dá)水平降低可能導(dǎo)致胰島素敏感性下降。Bmal1和Cry1表達(dá)水平降低使得胰島素敏感性下降，血糖調(diào)節(jié)機(jī)制失衡，這也與本研究中六餐組胰島素的表達(dá)結(jié)果一致。本研究結(jié)果顯示，六餐組 Per2 基因的mRNA表達(dá)增加是最劇烈的。相關(guān)研究數(shù)據(jù)顯示生物鐘的重置涉及 Per 1 和 Per2 的急性上調(diào)[36]，提示 Per2 基因是時鐘重置機(jī)制的重要組成部分，為了應(yīng)對機(jī)體及時出現(xiàn)的頻繁飲食造成的生物節(jié)律紊亂， Per2 基因通過及時提高其表達(dá)量，盡可能使得機(jī)體生物節(jié)律在下一個轉(zhuǎn)錄周期開始時恢復(fù)正常。

本研究結(jié)果顯示，三餐組與六餐組Sirt1基因的mRNA表達(dá)水平變化趨勢是相同的。可能的原因是Sirt1具有靶基因特異性[37]，而本試驗干預(yù)時間短，短期的高頻飲食暫時不能對Sirt1的表達(dá)產(chǎn)生影響。2012年上海生命科學(xué)研究院進(jìn)一步揭示Clock和Bmal1對于胰島素敏感性的調(diào)控作用依賴于胰島素關(guān)鍵調(diào)控蛋白Sirt 1［38]。本研究中六餐組10：00、16：00胰島素水平和8：00、13：00時Clock基因的mRNA表達(dá)水平均高于三餐組，而Clock和Sirt1基因的峰值均在12：00～13：00以及20：00出現(xiàn)，同一時間胰島素水平呈平穩(wěn)升高的趨勢。說明頻繁飲食機(jī)體胰島素分泌異常升高與Clock、Sirt1基因的節(jié)律調(diào)節(jié)是相互影響的。在各時鐘基因中，Ppar ∝ 是一種營養(yǎng)傳感器，能夠適應(yīng)脂肪酸的分解代謝、脂肪生成和酮體合成的速率，以響應(yīng)喂養(yǎng)和饑餓的狀態(tài)，也是參與肝葡萄糖產(chǎn)生的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子［39]。本研究結(jié)果中，組別在Ppar ∝ 基因的mRNA表達(dá)水平上主效應(yīng)顯著，可能是機(jī)體頻繁進(jìn)食的狀態(tài)活躍了Ppar ∝ 的表達(dá)，通過提高Ppar α 的表達(dá)量來傳達(dá)“飽和”的信號，從而提示機(jī)體停止進(jìn)食。

綜上所述，健康人群在為期一天的頻繁飲食干預(yù)下，機(jī)體血清胰島素水平增加、血糖調(diào)節(jié)失衡、瘦素分泌減少，同時各節(jié)律基因的表達(dá)也出現(xiàn)了振蕩、表達(dá)增強(qiáng)或降低等異常狀況。頻繁飲食調(diào)節(jié)了機(jī)體糖脂代謝和生物節(jié)律基因的表達(dá)，并且糖脂代謝與生物節(jié)律應(yīng)答信號之間是相互聯(lián)系、相互影響的。

本研究在探索頻繁飲食對糖脂代謝和生物節(jié)律的影響方面取得了一定成果，但不可避免地存在一些局限性。在時間維度上，試驗干預(yù)時間相對較短，僅聚焦于短期變化的觀察，未能對長期頻繁飲食的影響展開追蹤。本研究僅提出了長期頻繁飲食可能導(dǎo)致胰島素敏感性降低、血糖調(diào)節(jié)失衡以及機(jī)體罹患代謝性疾病概率升高的可能性，這些潛在影響需要后續(xù)研究進(jìn)一步驗證。此外，不同人群對頻繁飲食的反應(yīng)不同。今后的研究中，有必要將肥胖人群、糖尿病患者等特殊群體納入研究范疇，觀察不同群體的反應(yīng)，從而為全面理解飲食與代謝紊亂的關(guān)系提供更豐富、更準(zhǔn)確的信息。

作者貢獻(xiàn)：楊俊負(fù)責(zé)主要試驗及數(shù)據(jù)分析、統(tǒng)計作圖及論文的書寫改正；麥布拜穆·艾斯卡爾負(fù)責(zé)部分試驗；楊倩倩負(fù)責(zé)數(shù)據(jù)的收集和整理；李凱負(fù)責(zé)調(diào)查報告的實施，調(diào)查對象的選取；尹高軍進(jìn)行論文的修訂及文章的質(zhì)量控制與審查；蔡慧珍負(fù)責(zé)研究的構(gòu)思與設(shè)計，對文章整體負(fù)責(zé)，監(jiān)督管理。

本文無利益沖突。

楊俊Dhttps：//orcid.org/0009-0007-9583-1710

蔡慧珍 ① https：//orcid.0rg/0000-0002-2507-3631

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