熱刺激致動脈平滑肌增殖及血府逐瘀湯的干預作用

摘要：目的探討熱刺激對動脈管壁的影響及血府逐瘀湯的干預效果。方法局部熱刺激兔耳，溫度為43.0℃±0.5℃，每次3h，每日1次，共做3次。血府逐瘀湯組實驗前3d及實驗后一直用血府逐瘀湯6.0g／(kg·d)灌胃。各組均于造模后3d，7d，14d及28d時分別取材。采用光學顯微鏡及圖像分析儀進行形態學觀察。結果模型組熱刺激后動脈平滑肌細胞層數及中膜厚度增加，造成管腔變狹。血府逐瘀湯組與模型組相比，增殖程度減小，各項觀測指標均有不同程度的變化，但統計學分析僅28d時差異有統計學意義。結論熱刺激可導致動脈管壁增厚，6.0 g／(kg·d)劑量的血府逐瘀湯對此有較好的干預作用。

關鍵詞：動脈狹窄；血府逐瘀湯；增殖；熱刺激

中圖分類號：R541 R285.5

文獻標識碼：A

文章編號：1672—1349(2007)05—0414—02

1 材料與方法

1．1實驗動物中國家兔64只，體重18 kg～2.2 k，雄性，由湖南中醫學院實驗動物中心提供。

1．2藥物與試劑 血府逐瘀湯全方為：當歸9g，生地黃9g，桃仁12g，紅花9g，枳殼6g，赤芍6g，柴胡3 g，桔梗5g，川芎5g，牛膝9g，甘草3g購自湖南中醫學院附屬第一醫院。煎制方法：煎前經清水3次漂洗，于燒杯中煎煮30min去渣，濾紙過濾，濃縮至每毫升含生藥1g，過濾除茼，4℃保存。

1．3儀器GSY型恒溫水浴鍋(北京醫療器械廠)；數字彩包圖像分析儀(美國Optimas公司)；820型渦輪切片機(美舊Re－ichert公司)；線犁顯微測微尺(長春市第一光學儀器)；Olympus BH—2顯微鏡(日本Olympus公司產)；局部加熱器(湖南中醫藥大學組織胚胎學實驗室)。

1．4動物分組及造模64只家兔隨機分為模型組、假處理組、空白對照組和血府逐瘀湯組，每組16只，每組在熱刺激后3d，7d，14d，28d時各處死4只。

模型組和血府逐瘀湯組造模方法：從耳根部起至耳尖部，測量兔耳中央動脈的長度，選取中央2cm的長度作為受試部位。將加熱器置于受試部位，以膠布固定，使之緊貼皮膚。加熱溫度為43.0℃、±0.5℃假處理組僅給予同樣的器具操作，溫度與室溫一致，時間均為每次3h，每H1次，連續做3次。空白對照組不加任何處理。血府逐瘀湯組熱刺激前3d及熱刺激后一直給予血府逐瘀湯6g／(kg·d)灌胃。所有動物均以普通兔飼料喂養。

1. 5標本的采集及處理按預定日期處死動物，將處理部位2cm及其上上下1cm的動脈取下，以動脈為長軸切成長0.5cm、寬約為0.8cm的長條。石蠟切片法。切片先用地依紅染彈性纖維，再用HE染色

1．6觀測指標均為光鏡下觀測，包括血管腔面積、中膜厚度的測量及血管壁平滑肌細胞層的計數。

1．7統計學處理所有數據以均數±標準差(χ±s)表示。多組均數比較進行方差齊性檢查，方差齊采用方差分析、方差不齊采用tp檢驗，兩組均數比較采用t檢驗。所有數據經SAS 6.12軟件進行處理。

2 結果

2．1一般情況觀察 實驗后模型組兔耳局部輕度發紅，持續20min～35min，假處理組和空白對照組無變化。所有動物耳部皮膚無潰爛及腫脹。兔子毛發有光澤，活動、進食及二便均未幾異常。無生病及中途死亡發生。

2. 2血管相關性指標的觀察模型組中膜有不同程度的增生。熱刺激后3d可見局部內彈性膜厚度增加、基底部稀疏模糊，染色變淺，外緣較清晰；內彈性膜向管腔內突入，突人物中可見1層～2層平滑肌細胞。7d后，模型組的內彈性膜包繞在增生物周圍，形態及染色未見異常；增生物主要由血管平滑肌細胞(VSMC)及膠原纖維構成。14 d28d時增生物繼續增大，管腔進一步縮小。28d時，模型組管腔的大部分都被增生的中膜所占據。

模型組與同期假處理組和空白對照組相比，管腔明顯縮窄，有統計學意義(P<0.05)。模型組28d后管腔面積明顯小于3d組、7d組；管腔內增生物面積隨動物熱刺激后生存時間的延長而逐漸增大；假處理組和空白對照組管腔內未見增生物形成，管腔面積間相比無明顯差異。

血府逐瘀湯組治療后雖然各項指標有不同程度的好轉，但只有在28d時才具有統計學意義，說明其遠期干預作用較好，而近期作用相對較差，可能與劑量有關。詳見表1～表3。

3 討論

血管平滑肌細胞增殖的模型有血管內介入法和血管外損傷法兩種。前者包括血管內球囊擴張術、空氣干燥術及鋼圈植入法等；后者有鉗夾兔耳模型、頸動脈袖套法、結扎頸動脈、電刺激動脈法和動脈外周石蠟包裹法等。盡管損傷的途徑分別來自血管內外，但均能造成血管內彈性膜斷裂，中膜平滑肌細胞從裂口處跨過，進入內膜下，造成內膜增厚，新內膜形成，使內皮細胞和內彈性膜之間的距離增大，從而導致血管腔狹窄。本模型采用皮膚外熱刺激且溫度相對不高，實驗溫度僅高于兔子體溫3℃～4℃(家兔屬恒溫動物，體溫為38.5℃～39.7℃)，動物的耐受性較好，局部未造成燙傷，說明刺激強度較小。熱刺激后表現為平滑肌細胞增殖，導致中膜增厚，血管腔面積面積減小。

血府逐瘀湯是臨床常用的治療冠心病的有效方劑，日前除了湯劑，尚有丸劑和顆粒劑等劑型。臨床研究表現，該方可有效改善冠心病病人手術后的血瘀癥狀，預防術后再狹窄。對冠心病的防治具有多靶點的特點。血府逐瘀湯對動脈粥樣硬化病變中的血管平滑肌細胞增殖具有抑制作用，可能是通過抑制血小板原牛長因子A、B技C—myc基因表達來發揮功效。急性熱應激能使血中血管緊張素Ⅱ明顯升高。由于血管平滑H幾細胞具有分泌血管緊張素原的功能，且含有血管緊張素轉換酶，所以推測熱刺激可使受熱局部平滑肌細胞分泌過多的血管緊張素，通過自／旁分泌途徑直接作用于平滑肌細胞；也可通過間接作用激活其他生長因子，如局部血小板生長因子－A(PDGFA)、內皮素-1(ET－1)等，共同作用于甲滑肌，促進其增殖及合成基質。此外，熱刺激可引起細胞外基質成分的變化，改變平滑肌細胞對生長因子的反應能力，從而影響細胞的增殖能力因此，推斷血府逐瘀湯對熱刺激后的平滑肌增殖的抑制效應可能是通過抑制血小板原生長因子以及其他生長因子而產生的，其具體機制尚需進一步研究。

作者簡介：屈波(1970—)，男，畢業于湖南中醫藥大學，主治醫師，醫學碩士，講師，現工作于湖南中醫藥大學(郵編：410007)；王桂棠、蔡光先、劉柏炎，工作于湖南中醫藥大學。

(本文編輯 王雅潔)