丹紅注射液治療大鼠急性腦梗死的實驗研究

摘要：目的觀察丹紅注射液對大鼠局灶腦缺血模型的治療作用。方法采用自體血栓大腦中動脈閉塞模型，觀察假手術組、局灶腦缺血組(對照組)、局灶腦缺血丹紅注射液治療組(治療組)神經功能評分、腦梗死范圍、腦含水量、病理學改變等指標的變化。結果造模3d后治療組腦含水量和神經系統評分明顯優于對照組(P<0.05)；大鼠腦梗死體積于造模第5天治療組明顯小于對照組(P<0.05)；病理組織學觀察也可見治療組組織損傷減輕。結論 丹紅注射液對局灶腦缺血有明顯的治療作用一。

關鍵詞：腦梗死；丹紅注射液；局灶惱缺血：大鼠

中圖分類號：R743.3 R2855

文獻標識碼：A

文章編號：1672—1349(2007)05—0421－02

丹紅注射液由中藥丹參、紅花科學提取精制而成，主要作用為活血化瘀，通脈舒絡。本研究采用大鼠自體血栓模型，觀察丹紅注射液對實驗性急性腦梗死的治療作用。

1 材料與方法

1．1實驗動物健康SD大鼠，體重(230～300)g，鼠齡(3～4)個月，由重慶醫科入學實驗動物中心提供。

1．2約物和試劑 丹紅注射液為濟南步長制藥有限公司生產的原液，經幣=慶中藥研究院制備濃縮10倍的濃縮液。紅四氮唑(TTC)由上海生物工程公司提供。

1．3儀器 FD2000圖像系統(北京天地公司)，24G靜脈留置針(REF，規格0.7mm×0.19mm)，4號硬脊膜外麻醉導管(型號F₃×70mm，0.7～1.0×700)，分析天平(日本島津)。

1．4實驗方法

1 4．1分組及給藥24只實驗動物隨機分為3組，即假手術組、局灶脯缺血組(對照組)、局灶腦缺血丹紅注射液組(治療組)，每組8只。治療組按照2mL/kg給予丹紅濃縮注射液，對照組于等滲鹽水，術后6h從尾靜脈注入，每日1次，連續5d。

1．4 ．2局灶腦缺血模型制備，采用自體血栓大腦中動脈閉塞模型(MCAO)：以3.5％水合氯醛腹腔麻醉，頸部正中直切口依次分離出左頸總動脈(CCA)、頸外動脈(ECA)、頸內動脈(ICA)、電凝ECA分支，甲狀腺上動脈、忱動脈、結扎頸內動脈為重要分支翼腭動脈，離斷ECA(似手術組到此為止)，從ECA插入24G靜脈留置針，拔出針芯，取血1mL，5000r/rain離心1min，按5：1吸取血漿及紅細胞，加入2u凝血酶，制成直徑約0.35mm的血栓，切成(1.5～2.0)mm，用麻醉導管吸取(6～8)個栓子，從靜脈留置針快速注入到ICA內，蘇醒后按Bederson評分標準進行神經功能缺失評分，有體征者人選。

1．5檢測指標

1．5．1神經功能缺損評 分3組分別于術后1d，3d，5d進行神經功能缺損評分，按Bedersm標準評分，0級(0分)：無神經功能障礙；1級(1分)：提大鼠尾，見癱瘓側前肢回收屈曲不能正常伸向地而；2級(2分)：除1級體征外，向癱瘓側推時感阻力較對側明顯降低；3級(3分)：除以上體征外，大鼠爬行時向癱瘓側施轉。

1．5．2腑梗死體積測定 造模后第5天伸經功能缺損評分后斷頭取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦T，將剩余部分冠狀切片，置于2％TTC溶液中37℃孵育(15～20)min再放人4％多聚甲醛溶液中固定，梗死區為蒼白色，正常為均勻橘紅色，用TI2000圖像分析系統測定腦梗死體積。

1．5．3腦含水量測定(干濕重法)造模后1d，3d，5d 3組進行沖經功能評分后將動物處死迅速取腦，將缺血側腑組織置于電子天平稱濕重，然后放入電熱恒溫箱內100℃烘烤24h取出，至電子天平稱干重，計算公式：腦含水量(％)=(濕重－干重)／濕重×100％。

1．5．4組織病理學觀察 各組動物以水合氯醛麻醉，4％多聚甲醛灌流固定，斷頭取腦，相同固定液中固定，乙醇梯度脫水，二甲笨透明，浸蠟包埋、切片，厚約5μm，HE染色，封固，光鏡下觀察病變區及附近腦組織變化。

1．6統計學處理，結果采用t檢驗，用SPSS10.0統計軟件，計量資料以均數±標準差(x±s)表示。

2 結果

2．1 丹紅注射液對人鼠神經功能的影響第1大，治療組神經功能缺損評分低于對照組，但無統計學意義(P>0.05)，第3天和第5天治療組評分明顯低于對照組(P<0.05)。提示丹紅注射液可善大鼠神經功能，但起效相對較慢。詳見表1。

2．2 丹紅注射液對腦梗死體積的影響 造模后第5天，治療組大鼠腦梗死體積(74.20±9.00)mL，明顯小于對照組(90.20±16.16)mL，兩組比較有統計學意義(P<0.05)。

2．3丹紅注射液對惱含水量影響 造模后第1天治療組大鼠的腦含水量低于對照組，但無統計學意義(P>0.05)。而第3天、第5天大鼠的腦含水量均低于對照組(P<0.05)。提示給予丹紅灃射液后可減少大鼠腦水腫狀況，但在造模3 d后較明顯。

2．4對照組與治療組組織病理學變化對照組可見腦組織部分壞死，細胞質部分空泡化，胞核固縮，治療組細胞輕度腫脹，細胞質輕度液化，胞核輕度固縮，較對照組減輕。

3 討論

急性腦血管病是現今病化率最高的三大疾病之一，其中尤以缺血性腦血管病為最多見(約占70％)。除發病率、致死率、復發率高外，由此引起的癱瘓、失語及癡呆不僅使病人的生存質量低下，更是社會和家庭的沉重負擔。降低該病的病死率和致殘率的關鍵是積極進行超早期搶救治療，主要途徑是：①溶解血栓，抗血小板凝聚，恢復腦血流灌注；②神經細胞和血管內皮細胞保護治療，阻止由缺血及缺血后再灌注引起的腦組織一系列病理和生化反應，降低致殘率。

丹紅注射液為中藥丹參、紅花按科學配方提取的復方制劑，其主要有效成分包括丹參酮、丹參酚酸、紅花黃色素等。從20世紀90年代以來，對于中藥丹參和紅花在治療缺血性腦血管病方面的作用和機制已有較多的研究，對這兩種藥物的主要有效成分及作用機制有以下幾點認識：①丹參酚酸有較強的抗血小板凝聚的作用，可以顯著降低血漿的血栓素B2(TXB2)水平；②丹參酚酸和丹參酮有抗血栓形成、改善微循環、抗氧化損傷等作用；③紅花能有效也抑制血小板黏附、聚集，激活和釋放血栓素A₂(TXA2)，激活血管內皮細胞釋放前列環素(PGI₂)，糾正外周循環中TXA₂／PGI₂平衡失調，對腦缺血再灌注損傷具有積極的防治作用；④紅花黃色素可抑制血小板激活因子(PAF)介導的血小板活化作用。但對其復方制劑目前研究較少。

本組研究采用自體血栓閉塞大腦中動脈構建出大鼠急性腦缺血模型，然后對治療組大鼠給予丹紅注射液治療，結果發現：造模3 d后治療組在腦含水量和神經系統評分明顯優于對照組(P<0.05)；腦梗死體積從造模第5天治療組明顯小于對照組(P<0.05)。病理組織學觀察也可見治療組組織損傷減輕，提示丹紅注射液對局灶腦缺血有治療作用。但在造模第1天，治療組在腦含水量和神經系統功能評分與對照組無統計學意義，至第3天才顯示其有效作用，提示該藥起效可能較緩。該藥具有改善缺血區血循環，改善神經功能缺失評分，但是其作用詳細機制尚待闡明。

作者簡介：鄧芬(1972—)，女，主治醫師，現為重慶醫科大學第二附屬醫院神經內科碩士研究生(郵編：400010)；胡長林、謝運蘭，工作于重慶醫科大學第二附屬醫院。

(本文編輯 郭懷印)