地塞米松對哮喘小鼠血漿８－異前列腺素Ｆ_2α的影響

【摘要】 目的 通過建立小鼠哮喘模型，給予地塞米松治療，檢測血漿8-異前列腺素F_2α（8-iso-PGF_2α）水平變化，探討地塞米松對哮喘小鼠的治療作用。

方法 選用24只昆明種雄性小鼠，隨機分為正常對照組、哮喘組和地塞米松治療組，哮喘組和地塞米松治療組予雞卵白蛋白致敏及激發建立哮喘模型，再分別給予生理鹽水和地塞米松治療，檢測血漿8-iso-PGF_2α水平。結果 哮喘組血漿中8-iso-PGF_2α較正常對照組顯著升高（P<0.01），經地塞米松治療后顯著下降(P<0.01)，與正常對照組比較無顯著性差異(P>0.05)。結論 哮喘小鼠機體存在氧化應激狀態，地塞米松對哮喘的氧化應激狀態具有明顯的干預作用。

【關鍵詞】 支氣管哮喘；氧化應激；地塞米松；8-異前列腺素F_2α

文章編號：1003-1383(2007)02-0124-03中圖分

類號：R 365文獻標識碼：A

支氣管哮喘是常見的氣道慢性炎癥性疾病，實驗與臨床資料已經證明氧化物質在包括哮喘在內的許多呼吸系統疾病的病理生理過程中起重要作用。越來越多證據表明，在哮喘慢性氣道炎癥過程中發生氣道的氧化應激反應。而一些觸發哮喘加重的因素，例如病毒感染、空氣污染等，都會誘導氧化物質產生增加，從而加重氣道炎癥反應［1］。本實驗檢測了哮喘模型小鼠予地塞米松治療后血漿8-iso-PGF_2α的變化，現將結果及其意義匯報如下。

材料與方法

1.實驗對象 24只清潔級昆明種純白小鼠，體重20±3 g，全部為雄性，購自廣東醫學院實驗動物中心。將實驗小鼠隨機分為：正常對照組（N，8只）和實驗組（16只），實驗組小鼠建立哮喘模型，隨機分為：哮喘模型對照組（A，8只），地塞米松組（D，8只）。

2.哮喘模型的建立方法 腹腔注射雞卵白蛋白抗原液0.5 ml（含氫氧化鋁凝膠2 mg和卵白蛋白15 μg）致敏，第7天、14天時各重復一次，第21天始以1%卵蛋白霧化吸入來誘發小鼠哮喘發作，每天2次，連續3天，正常對照組給予生理鹽水腹腔注射和霧化。

3.給藥方法 地塞米松用量參考文獻中人的用藥劑量，依據體重折算系數（小鼠和人之間為0.11）及體表面積折算系數（小鼠和人之間為387.9）［2］進行換算。地塞米松組每次霧化前分別通過灌胃給予地塞米松，劑量為：2 mg/kg。

4.檢測方法 最后一次引喘12—18小時后，清醒動物眼動脈放血，殺死小鼠，全血以EDTA-Na抗凝，3500 rpm低溫離心10 min，取上清置于液氮中備做8-iso-PGF2α測定。8-iso-PGF_2α的檢測采用酶免疫分析法。放血畢行支氣管肺泡灌洗5次，每次0.6 ml，合并5次BALF，混勻，灌板，顯微鏡下進行白細胞計數。

5.實驗儀器及試劑 ELX-800酶標儀（美國Bio-Tek公司）；JSC-A多功能超聲霧化器（遼寧省鞍山市電子醫療儀器廠）；卵白蛋白（Grade Ⅱ）（美國Sigma公司），卵磷脂（美國Sigma公司），8-iso-PGF_2αEIA Kit（美國Cayman公司），地塞米松（美國Sigma公司）。

6.統計學處理 各指標（計量資料）用-±s表示，SPSS11.0統計軟件行方差分析，組間比較用LSD（方差齊時）和Tamhane’s T2（方差不齊時），雙側P<0.05為統計檢驗顯著性標準。

結果

哮喘組BALF中白細胞總數較正常對照組顯著升高（P<0.01）；經地塞米松治療后白細胞總數顯著下降（與哮喘組比較P<0.01）。哮喘組血漿中8-iso-PGF_2α較正常對照組顯著升高（P<0.01），經地塞米松治療后均顯著下降（與哮喘組比較P<0.01），幾乎可達正常對照組水平（與正常對照組比較P>0.05）。見表1。

討論

異構前列腺素（Isoprostanes）是近年來發現的一種新型的前列腺素，具有獨特的產生途徑和生物活性，通過自由基和活性氧簇(ROS)催化花生四烯酸脂質過氧化產生。其中O₂^-和H₂O₂是兩種最主要的自由基，通過該途徑能生成多種Isoprostanes的異構體，其中8-iso-PGF_2α（8-Isoprostane）是Isoprostanes最主要的成分，對其研究也最為深入［3］。研究已經證實8-iso-PGF_2α能作為機體氧化/抗氧化狀態靈敏、可靠及準確的指標，其結構穩定［4］，脂類樣本如血漿、組織一經液氮冷凍后就不會發生自身氧化，在-80℃下可以貯存8個月；其水平隨著氧化應激的實驗狀態改變而改變，與疾病嚴重程度相關［5］。此外，8-iso-PGF_2α在呼吸系統產生重要的生物活性，例如能收縮人和豚鼠氣道，引起氣道阻塞［6］、能加強氣道的非特異性高反應性［7］等。

支氣管哮喘急性發作時，大量炎癥細胞在支氣管黏膜上皮聚集，釋放多種細胞因子，同時反應性氧化產物(ROS)增多；由補體、白三烯、內毒素、免疫復合物等因子激活白細胞膜上NAPDH氧化酶，啟動呼吸爆發，可產生多種氧自由基導致氧化/抗氧化失衡，氧化應激反應對哮喘的發生、發展起了重要作用［1］。Kirschvin等［8］的研究顯示8-iso-PGF_2α水平和氣道炎癥細胞的浸潤程度相平行，8-iso-PGF_2α參與氣道的炎癥進程。本實驗中，用小鼠成功復制了卵蛋白過敏性哮喘模型，檢測哮喘模型小鼠給予地塞米松治療后小鼠血漿中8-iso-PGF_2α水平及BALF中WBC計數。結果顯示：哮喘組BALF中白細胞總數和血漿中8-iso-PGF_2α水平較正常對照組顯著升高（P<0.01），表明哮喘模型小鼠氣道存在氣道炎癥和氧化/抗氧化失衡，經糖皮質激素治療后白細胞總數及8-iso-PGF_2α水平顯著下降（P<0.01），表明地塞米松抑制哮喘模型小鼠的氣道炎癥反應、糾正氧化/抗氧化失衡狀態，從而對哮喘有治療作用。

本文中所涉及到的圖表、注解、公式等內容請以PDF格式閱讀原文。