苦菜體內外抗氧化作用的實驗研究

【摘要】 目的 觀察苦菜(PV)的抗氧化作用。方法 采用TBA法、NBT法測定小鼠心、肝、腦、腎組織中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。結果 苦菜能降低心、腦、肝、腎體外組織中MDA的含量，苦菜3種劑量均有顯著降低小鼠體內心、肝、腦、腎組織中MDA含量（P<0.05或<0.01）；BVE 250 mg、500 mg/(kg·d)，能顯著提高上述組織中SOD活性（P<0.05或<0.01）。結論 苦菜具有明顯的體內外抗氧化作用。

【關鍵詞】 苦菜；丙二醛；超氧化物歧化酶；抗氧化

文章編號：1003-1383(2007)02-0120-03

中圖分類號：R 285.5 文獻標識碼：A

苦菜為菊科植物苦苣菜（SonchusOleraceus L）的全草，是一種常用中藥，具有抗炎、保肝等生理活性［1］，近期的藥理研究表明，苦菜水提液在護肝降酶方面的作用不亞于抗氧化及護肝作用很強的丹參。根據自由基學說［2］，炎癥、肝病、腫瘤等疾病與自由基引發的脂質過氧化有密切的聯系。已有文獻報道，苦菜中存在多種抗氧化作用的成分［1］，但是文獻往往只局限于這些成分對肝臟脂質過氧化作用的抑制，本研究旨在探討苦菜的常用劑型（水提液）對心、肝、腦、腎組織的體內外抗氧化作用，以探討苦菜藥理作用的機理，同時也為苦菜在其它方面的應用提供理論依據。

材料與方法

1.實驗材料 ①動物：SD雄性大鼠，清潔級，體重200—250 g；昆明種小鼠，清潔級，體重18—22 g，雌雄各半，由南華大學實驗動物中心提供。②藥品及試劑：苦菜采集于湖南永興；四乙氧基丙烷為Sigma產品；DTNB為Fluka產品；其余試劑均為國產分析純或生化試劑。③儀器：THZ-80型恒溫振蕩器，TDL-5型離心沉淀器，S54型分光光度計。④苦菜水提醇沉液：制備用苦菜莖葉干品，加蒸餾水10倍，水煎2次，合并濾液濃縮，加95%乙醇使之達到60%，靜置24 h，過濾除去沉淀，回收乙醇，再加蒸餾水冷藏、過濾，高壓滅菌后備用，制成0.5 g/ml水溶液，臨用前稀釋至所需濃度。

2.實驗方法 ①將SD雄性大鼠30只，隨機分成3組，即生理鹽水組、苦菜0.05 g/L和0.25 g/L組，每組10只。禁食16小時后斷頭放血，迅速取出所需組織，肝臟取出前用預冷(4℃)的生理鹽水經門靜脈灌流至土黃色，心、腦、腎組織以生理鹽水沖去表面殘血，稱重，研磨，各組織以生理鹽水制成5%組織勻漿，備測。每只大鼠的心、腦、肝、腎組織勻漿各取6管（其中孵育、未經孵育各3管），每支試管取勻漿1.5 ml，加入0.1 ml苦菜溶液（0.05 g/L、0.25 g/L）。對照組取同體積生理鹽水，勻漿于(37±0.5℃)恒溫振蕩反應2 h，加入20%三氯醋酸1.5 ml終止反應，3500 r/min，離心10 min，取上清夜2 ml，加0.67%硫代巴比酸(TBA)1.5 ml，95℃水浴15 min，取出后冷卻，于S54分光光度計535 nm測吸光度，標準管以10 nmol/L四乙氧基丙烷代替組織勻漿。以同樣的方法測定心、腦、腎離體組織脂質過氧化物。②選5月齡小鼠40只，隨機分成4組，每組10只。給藥組（BVE）分成不同劑量的苦菜組［灌胃125，250，500 mg/（kg·d）］，生理鹽水組（NS）給予等體積的生理鹽水，連續4周。各組于末次給藥后1.5 h，脫頸椎處死動物，迅速取出心、肝、腦、腎組織，用預冷(4℃)的生理鹽水沖洗表面殘血，稱重，研磨，制備組織勻漿，備測。

3.觀察項目 ①計算脂質過氧化產物丙二醛(MDA)含量，扣除未經孵育2 h產生的MDA含量，計算抑制率（%）。觀察苦菜對肝、心、腦、腎離體組織脂質過氧化的抑制作用［3］，②采用NBT法測定SOD活性，TBA法測定MDA含量。觀察苦菜對小鼠組織超氧化物酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量的影響［4］。

4.統計學處理 各組間實驗數據以均值±標準差（-±s）表示，組間比較采用t檢驗，P<0.05為有顯著性差異。

結果

1.苦菜對離體組織脂質過氧化的影響 不同組織勻漿經孵育后產生的MDA不同，苦菜能降低心、腦、肝、腎體外組織中脂質過氧化物MDA的含量，數據經統計學處理，有顯著性差異，P<0.05或P<0.01(見表1)，且存在明顯的劑量效應關系，表明BVE可抑制上述兩組MDA的產生，具有明顯的抗氧化作用。

2.苦菜對小鼠組織SOD活性及MDA含量的影響 苦菜3種劑量均有顯著降低小鼠心、肝、腦、腎組織中MDA含量；苦菜250 mg/(kg·d)，連續4周，能顯著提高小鼠心、肝、腦、腎組織中SOD活性；苦菜500 mg/(kg·d)， 連續4周，能非常顯著提高上述四種組織中SOD活性，經統計學處理，均有顯著性差異，P<0.05或P<0.01(見表2)，且存在明顯的劑量效應關系，結果表明苦菜具有顯著地抑制體內組織脂質過氧化作用，并能顯著增強內源性抗氧化酶活性。

討論

人體在正常的生理代謝過程中會產生少量的含氧自由基，如超氧陰離子、羥自由基、單線態氧、過氧化氫等，而體內的防御機能（抗氧化酶或抗氧化劑）會及時將其清除，以維持氧自由基的代謝平衡，因此一般不會對細胞、組織產生損傷。環境污染、輻射、衰老、食品添加劑及農藥等因素可引起體內的自由基代謝失衡，致自由基產生過多、清除減少，生物大分子結構和功能被自由基攻擊破壞，脂質過氧化物分解產生MDA含量增加，從一定程度上反映細胞質膜系統過氧化和受損的程度，SOD是超氧離子的清除劑，其活性部分地代表機體清除自由基和抗氧化的能力。因此通過補充外源性抗氧化劑輔助調整和治療自由基失衡，是未來營養保健，修復機體損傷，防治疾病的新熱點。苦菜是一種常食用的野菜，也是常用中藥，具有藥食兩用。實驗結果表1顯示，苦菜能降低心、腦、肝、腎體外組織中脂質過氧化物MDA的含量，有顯著統計學意義（P<0.05 或P<0.01），且存在明顯的劑量效應關系，表明BVE可抑制肝、心、腦、肝、腎組織MDA的產生，具有明顯的體外抗氧化作用，提示苦菜對肝、心、腦、肝、腎組織可能有較好的保護作用。實驗結果表2顯示，給藥3種劑量均有顯著降低小鼠心、肝、腦、腎組織中MDA含量（P<0.05或P<0.01）；苦菜250 mg/(kg·d)，連續4周，能顯著提高小鼠心、肝、腦、腎組織中SOD活性（P<0.05），苦菜500 mg/(kg·d)，連續4周，能非常顯著提高上述四種組織中SOD活性（P<0.01），統計學有顯著性意義（P<0.05或P<0.01 ），且存在明顯的劑量效應關系。結果表明苦菜具有顯著地抑制體內組織脂質過氧化作用，并能顯著增強內源性抗氧化酶活性。

苦菜在體外可以明顯抑制大鼠心、腦、肝、腎的脂質過氧化作用，在體內可以明顯抑制大鼠心、腦、肝、腎的脂質過氧化作用，提高機體抗氧化酶（SOD）活性，提示苦菜具有顯著的體內外抗氧化作用，對肝、心、腦、肝、腎組織可能有較好的保護作用；文獻報道［5］苦菜水提物可顯著延長小鼠常壓缺氧下的存活時間，對小鼠腦和心肌缺氧有顯著的保護作用， 苦菜對心和腦的保護作用與文獻報道一致。本實驗研究提示苦菜的抗炎、護肝以及抗腫瘤作用可能與其抗氧化作用有關，但其抗氧化作用機制有待進一步研究。

本文中所涉及到的圖表、注解、公式等內容請以PDF格式閱讀原文。