高效液相色譜法測定川葛顆粒中葛根素的含量

關鍵詞 高效液相色譜法 川葛顆粒 葛根素

資料與方法

儀器：LC-2010A型高效液相色譜儀，SPD-10AVP紫外檢測器。

試藥：葛根素對照品，由中國藥品生物制品檢定所提供（批號：725-200108，供含量測定用）。甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

色譜條件與系統適用性試驗：①色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（25∶75）為流動相；檢測波長為250nm。理論板數按葛根素峰計算應不低于5000。②對照品溶液的制備：取葛根素對照品約10g，精密稱定為9.04mg，置100ml量瓶中，加30％乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置20ml量瓶中，加30％乙醇至刻度，搖勻，即得。③供試品溶液的制備：取本品裝量差異項下內容物，研細，混勻，取約1g，精密稱定置具塞錐形瓶中，精密加入30％乙醇50ml，稱定重量，超聲處理（功率100W，頻率40kHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用30％乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。④測定法：精密吸取對照溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。⑤空白試驗：按供試品溶液制備時取樣量，折算成處方中除葛根外其他藥材的取樣量，按制法制成空白顆粒，再按供試品溶液制備方法制成空白溶液。取一定量的對照品、供試品及空白溶液，按上述色譜條件審查，結果供試品及對照品溶液在相應的保留時間處有吸收峰，而空白溶液無吸收，說明空白溶液無干擾。

結 果

方法學考察:線性關系的考察：精密吸取對照品溶液2、5、10、15、20μl，按上述色譜條件分別注入液相色普儀，測定峰面值，以峰面積積分值為縱坐標，以進樣量為橫坐標，結果見表1。

回歸方程：Y＝4343279.44X＋2667.00，γ＝0.9999[LL]

試驗結果表明：葛根素對照品在進樣量0.0904～0.9040μg范圍內，才能與峰面積呈良好的線性關系。

精密度試驗：吸取對照品溶液10μl，連續進樣5次，依法測定，結果見表2。

由上所示，本方法有良好的精密性。

穩定性試驗：取批號050508樣品，同一供試品溶液，依法測定，相隔一定時間進樣一次，試驗結果表明，葛根素在供試品溶液中24小時內是穩定的。

重現性試驗：取批號050504樣品，依正文方法獨立操作5份，結果見表3。

試驗結果表明：重現性較好。

加樣回收率試驗：取批號為050504樣品，已知平均裝量為10.0087g/袋，每袋含葛根素11.7765mg，即每g含葛根素為1.1766mg，取裝量差異項下的本品適量，研細，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加30％乙醇50ml，精密加入對照品溶液2ml（對照品濃度為0.301mg/ml），超聲處理，以下同正文操作，制成供試品溶液，依法測定，結果見表4。

以上方法學考察證明：本含量測定方法具有一定的精密性、準確性與穩定性，方法簡便可行。

樣品測定：按正文方法測定3批樣品的含量，結果見表5。

本品每袋含粉葛及葛根素計，不得少于8.0mg。

討 論

經系統實用性試驗，選擇測定波長。取一定量的對照品溶液，經分光光度計在200～400nm波長范圍內進行光譜掃描，在215nm處有肩峰，250nm處有最大吸收峰，320nm處有較小吸收峰，根據紫外吸收圖及參考相關文獻，經空白試驗，選擇250nm為測定波長。流動相選擇甲醇-水（25∶75）為流動相，流速1ml/分鐘，柱溫為30℃。

參考文獻

1 國家藥典委員會.中國藥典(2005年版一部).北京：化學工業出版社，2005，附錄VI D：附錄33