ｕｒｖｉｖｉｎ在膽囊癌中的表達(dá)及臨床意義

關(guān)鍵詞 Survivin 膽囊癌 免疫組織化學(xué)

Survivin是新近克隆出的一種結(jié)構(gòu)獨(dú)特的哺乳類凋亡抑制蛋白(IAP)家族成員之一，是一種新發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制基因，表達(dá)于人胚胎發(fā)育組織和人類大多數(shù)腫瘤組織中，但不表達(dá)于人終末分化的組織(胸腺除外)#65377;

資料與方法

標(biāo)本來(lái)源:收集我院肝膽外科1998年1月～2004年1月手術(shù)切除膽囊癌標(biāo)本38例，其中男14例，女24例，年齡34～84歲，平均年齡60.7歲#65377;所有患者術(shù)前均未經(jīng)過(guò)放療#65380;化療及免疫治療等任何抗腫瘤治療#65377;所有病例均為膽囊癌根治切除術(shù)后的標(biāo)本，同時(shí)選取因結(jié)石性慢性膽囊炎而行手術(shù)切除的15例非癌膽囊組織標(biāo)本作為對(duì)照#65377;將所有石蠟包埋組織制成厚約4μm的連續(xù)切片，HE染色后，進(jìn)一步核實(shí)診斷，并去除有分歧病例#65377;

主要試劑:Survivin(FL-142)兔抗人多克隆抗體濃縮液，美國(guó)Santa Cruz公司產(chǎn)品#65377;PV-9000免疫組化檢測(cè)試劑盒#65380;濃縮型二甲苯聯(lián)苯胺(DAB)試劑盒，美國(guó)ZYMED公司產(chǎn)品#65377;以上試劑均由北京中山生物技術(shù)有限公司提供#65377;Survivin稀釋度為1∶100#65377;

檢測(cè)方法:用免疫組織化學(xué)染色(PV-9000通用型二步法)#65377;用已知陽(yáng)性肝癌切片作為陽(yáng)性對(duì)照，用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照#65377;染色步驟為:①石蠟切片脫蠟至水洗#65377;②3%H2O2室溫孵育15分鐘，以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性#65377;③蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘#65377;④ 抗原熱修復(fù):將切片放入盛有枸櫞酸緩沖液的廣口燒瓶中，置微波爐內(nèi)加熱，從小廣口瓶的溫度達(dá)到92～98℃起計(jì)時(shí)持續(xù)15分鐘，取出容器，室溫冷卻30分鐘(不可將切片從緩沖液中取出冷卻)#65377;蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘#65377;⑤滴加稀釋的一抗(一抗工作液1:100)，置濕盒內(nèi)4℃過(guò)夜#65377;⑥PBS沖洗，2分鐘×3次#65377;⑦ 滴加試劑1(Polymer Helper)，濕盒內(nèi)37℃溫箱孵育20分鐘，PBS沖洗，2分鐘×3次#65377;⑧ 滴加試劑2(poly peroxidase-anti-rabbit IgG)， 濕盒內(nèi)37℃孵育20分鐘，PBS沖洗，2分鐘×3次#65377;⑨顯色劑顯色(DAB)#65377;滴加新鮮配置的DAB顯色劑，顯微鏡下控制顯色1～4分鐘，自來(lái)水沖洗，終止顯色#65377;⑩復(fù)染#65377;蘇木素復(fù)染2分鐘，1%鹽酸乙醇分化，水洗顯藍(lán)#65377;B11上行梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片#65377;

免疫染色結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn):先在低倍鏡下選癌巢，然后選5個(gè)高倍鏡視野計(jì)數(shù)#65377;5%以上癌細(xì)胞核或胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色或深棕色顆粒為Survivin染色陽(yáng)性#65377;

統(tǒng)計(jì)分析:應(yīng)用X²檢驗(yàn)及四格表確切概率法#65377;上機(jī)用SPSS 11.0軟件完成統(tǒng)計(jì)學(xué)處理#65377;

結(jié) 果

Survivin陽(yáng)性染色在膽囊癌細(xì)胞漿#65380;胞核中均可見(jiàn)到#65377;經(jīng)檢測(cè)膽囊癌組織中Survivin蛋白表達(dá)陽(yáng)性，結(jié)石性慢性膽囊炎組織中未見(jiàn)Survivin蛋白表達(dá)，Survivin在膽囊癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為71.1%(27/38)#65377;由此可見(jiàn)兩者差別非常有顯著性(P<0.0001)#65377; Survivin表達(dá)與膽囊癌臨床特征的關(guān)系#65377;經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)四格表確切概率法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，Survivin的表達(dá)與患者的年齡#65380;性別#65380;腫瘤的大小#65380;膽囊癌組織學(xué)分型#65380;分化程度及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無(wú)關(guān)

(P>0.05)#65377;

討 論

本研究結(jié)果顯示: Survivin基因的表達(dá)與患者的年齡#65380;性別#65380;腫瘤的大小#65380;組織學(xué)類型及分化無(wú)關(guān)#65377;Survivin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(55.6%)明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(75.9%)#65377;由此可見(jiàn)兩組之間可以說(shuō)有一個(gè)差別趨向，但兩者之間的差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)#65377;這提示Survivin的抗凋亡作用在膽囊癌的轉(zhuǎn)移過(guò)程中作用不大#65377;如果增加樣本，可能統(tǒng)計(jì)學(xué)上會(huì)有差異#65377;常氏等人^[1]關(guān)于Survivin在膽管癌的免疫組化研究中也得出類似結(jié)論#65377;而朱氏等人^[2]關(guān)于Survivin在肝細(xì)胞癌的免疫組化研究中發(fā)現(xiàn)Survivin表達(dá)與肝癌的轉(zhuǎn)移有關(guān)#65377;我們認(rèn)為膽囊癌中Survivin蛋白的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)，有無(wú)關(guān)系還需要進(jìn)一步的研究 #65377;

多項(xiàng)研究結(jié)果表明Survivin參與多種腫瘤的發(fā)生#65380;發(fā)展，與腫瘤的預(yù)后不良#65380;復(fù)發(fā)密切相關(guān)，是一個(gè)具有潛在價(jià)值的腫瘤標(biāo)志物，可能作為評(píng)價(jià)康復(fù)治療的有效指標(biāo)之一#65377;盡管Survivin與其他腫瘤的預(yù)后具有相關(guān)性已有報(bào)道，但是否與膽囊癌的預(yù)后有關(guān)還有待進(jìn)一步探討#65377;

國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道，Survivin陽(yáng)性染色主要定位于腫瘤細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，也有文獻(xiàn)報(bào)道主要定位于腫瘤細(xì)胞核上，其中胃癌82%細(xì)胞核表達(dá)陽(yáng)性，我們?cè)谀懩野┑募?xì)胞漿及細(xì)胞核中均發(fā)現(xiàn)了Survivin的表達(dá)，以細(xì)胞核為主，出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因可能與不同的腫瘤組織Survivin定位于細(xì)胞有絲分裂的不同時(shí)期有關(guān)#65377;文獻(xiàn)資料還表明Survivin核陽(yáng)性者與較好的預(yù)后#65380;較低的血管侵犯轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，可作為獨(dú)立的預(yù)后評(píng)估指標(biāo);而胞漿陽(yáng)性者則與預(yù)后和腫瘤進(jìn)程無(wú)明顯相關(guān)，提示Survivin陽(yáng)性表達(dá)局限于胞核內(nèi)，有利于阻滯癌的發(fā)展進(jìn)程#65377;可推測(cè)Survivin在膽囊癌細(xì)胞中表達(dá)部位不同，預(yù)后也不同#65377;Survivin的定位變化及在膽囊癌細(xì)胞中表達(dá)部位與預(yù)后的關(guān)系尚有待進(jìn)一步研究#65377;

鑒于Survivin廣泛表達(dá)于幾乎所有常見(jiàn)的人類惡性腫瘤組織，而在正常成人組織內(nèi)檢測(cè)不到，Survivin有望成為一種新的腫瘤標(biāo)志物，用于腫瘤的診斷及良惡性鑒別#65377;目前的研究表明，Survivin是一些惡性腫瘤有潛在價(jià)值的診斷標(biāo)志#65377;本研究中Survivin在膽囊癌中高度表達(dá)，提示檢測(cè)膽囊癌中Survivin蛋白的表達(dá)可作為其診斷的有力輔助手段#65377;

總之， Survivin基因在膽囊癌組織中表達(dá)上調(diào)與膽囊癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，與預(yù)后的關(guān)系有待進(jìn)一步的探討#65377;檢測(cè)膽囊癌中Survivin表達(dá)可作為其診斷的有力輔助手段#65377;

參考文獻(xiàn)

1 常青，秦仁義，裘法祖.Survivin在膽管癌中的表達(dá).中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2003，20(5):398～399

2 朱虹，羅順?lè)澹瑥埲f(wàn)廣，等. Survivin在肝癌中的表達(dá)和意義及其與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的相關(guān)性.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2004，21(2):208～209