鱷魚膏總氨基酸的含量測定

摘 要:目的:測定鱷魚膏中總氨基酸的含量。方法:采用茚三酮-分光光度法測定總氨基酸。結果:以甘氨酸為對照品作標準曲線，在2.0～4.5μg/ml范圍內線性關系良好。加樣回收率為100.63%，RSD為1.92%。測得5批鱷魚膏中總氨基酸含量分別為21.74mg/g、21.84mg/g、21.97mg/g、21.72mg/g、22.02mg/g。結論:該方法簡便、準確、靈敏，重復性好。

關鍵詞：鱷魚膏；總氨基酸；分光光度法；含量測定

中圖分類號：R284.1文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2007）11-051-02

鱷魚，古稱“鼉龍”，《本草綱目》對鼉甲、肉、脂、肝的功用均有敘述，稱鼉肉（鱷魚肉）“甘，有小毒”，“主少氣吸吸，足不立地”，可見用鱷魚肉治療咳嗽哮喘，有中醫理論依據和民間習用傳統。《醫林纂要》稱鼉肉“用熬膏，潰堅拔毒，去瘀生肌”，提到了鱷魚肉熬膏為藥的用法。鱷魚廣泛分布于熱帶、亞熱帶的海濱及河湖沼澤中，以東南亞、澳洲北部為多。本實驗所用鱷魚膏是由人工飼養的灣鱷（Crocodylus porosus ）肉經生物技術酶解的產物，有效地保留了各類有機成分，是研制鱷魚系列保健品的必備中間體。現代研究表明，鱷魚肉含有豐富的優質蛋白質、不飽和脂肪酸、維生素及多種微量元素，還富含人體必需的9種氨基酸，含量高于豬、雞、鴨等肉類。^[1]本文對鱷魚膏所含總氨基酸進行了含量測定，方法簡便、準確。

1 儀器和試藥

UV-2401型紫外分光光度計（島津）、752型紫外可見分光光度計（上海光譜儀器有限公司）、電子天平（上海精密科學儀器有限公司天平儀器廠）、PHS-3C型酸度計(上海虹益儀器儀表有限公司)。甘氨酸為對照品（中國藥品生物制品檢定所），茚三酮、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉、乙醇等均為分析純。

2 方法和結果

2.1 溶液的配制

2.1.1 茚三酮溶液的配制 稱取茚三酮1.00g，加乙醇使溶解成50ml，即得2%茚三酮溶液。

2.1.2 磷酸鹽緩沖液的配制 取0.2mol/L磷酸二氫鉀溶液25ml，加0.2mol/L氫氧化鈉溶液11.8ml，用水稀釋至100ml，搖勻，即得，用酸度計測得緩沖液pH值為6.80。

2.1.3 甘氨酸對照品溶液的制備 稱取干燥的甘氨酸對照品0.1000g，用蒸餾水溶解、定容至100m1，即得1.0mg/ml甘氨酸對照品溶液。

2.1.4 供試品溶液的制備 取樣品4g，加70%乙醇40ml，回流提取2次，每次2小時。合并濾液，回收乙醇，用蒸餾水定容至100ml容量瓶中。

2.2 實驗條件的選擇

2.2.1 最大吸收波長的確定

取兩支試管，分別量取甘氨酸對照品溶液、供試品溶液0.5ml，加蒸餾水至5ml，再加茚三酮溶液和磷酸鹽緩沖液各1ml，搖勻。另取一支試管，量取蒸餾水5ml，加茚三酮溶液和磷酸鹽緩沖液各1ml，搖勻，作為試劑空白液。將3支試管置于100℃水浴加熱15min，取出冷卻。15min后，在UV-2401型紫外分光光度計中進行波長掃描。結果顯示對照品和樣品溶液均在567nm處有最大吸收。因此，確定本實驗的最佳測定波長為567nm。

2.2.2 標準曲線的繪制

精密量取1.0mg/ml甘氨酸對照品溶液0.00、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45ml，各加2%茚三酮溶液和pH=6.8的緩沖液1ml，搖勻，100℃水浴加熱15min，取出冷卻，用蒸餾水定容至100ml。15min后，在567nm處測量吸收度，以甘氨酸濃度（mg/ml）為橫坐標，吸收度為縱坐標，繪制標準曲線（見圖1）。回歸方程為y=200x-0.1817(R²=0.9993)。表明甘氨酸在2.0～4.5μg/ml范圍內，呈良好的線性關系。

2.3 精密度考察

精確吸取甘氨酸對照品溶液0.30ml，按2.2.2所示方法操作，連續5次測定其吸光度，結果見表1。

2.4 重復性試驗

取批號為070605的樣品5份，按2.1.4所示方法平行操作，制成供試品溶液，再按2.2.2所示方法測定吸收度。結果為RSD=2.13%，表明同一份樣品在相同條件下測定的結果重復性較好。

2.5 穩定性試驗

取批號為070605的供試品溶液1.0ml，按2.2.2所示方法在567nm處每隔5、10、15、30、45、60min測定一次吸收度，結果為0.685，0.685，0.684，0.682，0.680，0.679。顯示吸收度隨時間推移呈緩慢減小的趨勢，但RSD=0.38%，說明在中止反應后1小時內測定結果穩定。

2.6 加樣回收率試驗

取批號為070605的供試品溶液6份，每份0.5ml，各精密加入甘氨酸對照品溶液0.40ml（含甘氨酸0.40mg），加2%茚三酮溶液和pH=6.8緩沖液各1ml，搖勻，100℃水浴加熱15min，取出冷卻，用蒸餾水定容至200ml。15min后，在567nm處測定吸收度，并計算回收率，結果見表2。

2.7 樣品含量測定

取5批供試品溶液各一份，每份1.0ml，加緩沖液和2%茚三酮溶液各1ml，搖勻。另取1ml蒸餾水，加緩沖液和2%茚三酮溶液各1ml，搖勻，作為空白試液。在100℃水浴加熱15min，取出冷卻，用蒸餾水稀釋至200ml。15min后，在567nm處測量吸收度，并計算樣品中總氨基酸含量，見表3。

3 小結

(1)本法利用氨基酸與茚三酮試液顯色的原理，采用分光光度法測定鱷魚膏中總氨基酸含量，操作簡便，顯色穩定，靈敏度高，重復性好。

(2)茚三酮與氨基酸在弱酸環境中顯色較穩定。^[2]選用pH5.8、6.0、6.2、6.4、6.6、6.8的磷酸鹽緩沖液預試，結果表明，在pH6.8條件下顯色較深亦較穩定。

(3)由于氨基酸性質穩定，在水或醇中的溶解度較好。鱷魚膏中有機成分較為復雜，本文選用一定濃度的乙醇(70%)作為溶劑，能消除部分干擾。^[3]

參考文獻：

［1］ 吳素玲.鱷魚精滋補液營養成分分析［J］.食品與發酵工業，2000(2):84.

［2］ 張振華.α-氨基酸與茚三酮顯色反應影響因素的探討［J］.邵陽高等專科學校學報，2000，13(1):43-44.

［3］ 吳家紅，靳鳳云，龍開杰.分光光度法測定板藍根中總氨基酸［J］.微量元素與健康研究，2006，23(5):45.

Determination of Total Amino Acids in Eyu Gao

Tang Liang， Qin Mingzhu

(College of Pharmacy， Nanjing University of Traditional Chinese Medecine，

Nanjing 210046， Jiangsu)

Abstract:Objective:To determine the total amino acids contents in Eyu Gao. Method: The ninhydrin-spectrophometry was used. Results : Glycine was used as standard reference， and a good linear correlation was found in the range of 2.0 to 4.5μg/ml. The average recovery was 100.63% (RSD=1.92%). The contents of total amino acids in five batches of Eyu Gao were 21.74， 21.84， 21.97， 21.72， 22.02mg/g. Conclusion: The method is simple， accurate， sensitive and of good repeatability.

Key words: Eyu gao;Total amino acids;Spectrophotometry;Determination