銀杏葉提取物抗兔氧化損傷作用實(shí)驗(yàn)研究

摘 要:目的：進(jìn)行銀杏葉提取物對(duì)四氯化碳致兔氧化損傷的保護(hù)作用研究。方法：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為正常對(duì)照組（A）、損傷模型組 (B)、藥物Ⅰ組(C)、藥物Ⅱ組(D)，分別先靜脈注射生理鹽水（A、B），銀杏葉提取物（C、D)，再腹腔注射生理鹽水（A)、四氯化碳（B、S、D)；在4h(A、B、C)、24h（D)心臟去血液測(cè)定血清SOD、GSH-PX、GSH、活性氧、XOD等水平。結(jié)果：（1）與對(duì)照組比較，損傷模型組血活性氧、XOD等水平明顯升高（P﹤0.05）。SOD、CAT、GSH-PX等酶水平明顯降低（P﹤0.01），GSH無(wú)明顯變化（P﹥0.05）。(2)藥物Ⅰ組、藥物Ⅱ組血活性氧、XOD等水平明顯低于損傷模型組（P﹤0.05），藥物Ⅱ組SOD、GSH-PX明顯高于損傷模型組（P﹤0.05），血GSH無(wú)明顯變化（P﹥0.05）。結(jié)論：銀杏葉提取物具有消除自由基抗氧化損傷作用，其重要途徑之一是降低血活性氧、XOD等水平和升高SOD、CAT、GSH-PX酶活性。

關(guān)鍵詞：銀杏葉提取物；自由基；抗氧化酶

中圖分類號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1673-2197（2007）07-052-02

體內(nèi)存在自由基和消除自由機(jī)系統(tǒng)，活性氧是表示O-2、OH-指標(biāo)，黃嘌呤氧化酶（XOD）是肝功能損傷指標(biāo)并對(duì)自由基產(chǎn)生起重要作用。清除自由基系統(tǒng)包括酶系統(tǒng)和非酶系統(tǒng)，前者主要由超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）等組成，后者主要包括谷胱甘肽（GSH）、維生素E、硒等［1］。銀杏葉提取物主要有效成分（EGb）包括黃酮化合物和銀杏內(nèi)酯。據(jù)報(bào)道EGb［2］有抗氧化損傷的作用，能夠調(diào)節(jié)SOD、CAT等抗氧化酶的活性［3］。本研究通過(guò)EGb對(duì)四氯化碳致兔氧化損傷的作用，測(cè)定血清活性氧、XOD、SOD、GSH、GSH-PX等活性，探討EGb抗氧化損傷的作用和途徑。

1 材料和方法



1.1 藥物和試劑

銀杏葉提取物注射液（EGb）購(gòu)自徐州第四人民醫(yī)院制劑室，5ml/支，含黃銅24%、總萜內(nèi)酯8%、銀杏酸﹤5ppm，溶劑為乙醇、山梨醇、注射用水。活性氧、XOD、SOD、GSH-PX測(cè)定藥盒由南京建成生物工程研究所提供，722型分光光度計(jì)測(cè)定。四氯化碳，化學(xué)純。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 氧化損傷模型復(fù)制

按參考文獻(xiàn)［3］修改為兔腹腔注射，給兔以CCl4原液0.5ml/kg腹腔注射，在4h、24h取血測(cè)定4種指標(biāo)。

1.2.2 EGb對(duì)兔氧化損傷保護(hù)作用

選擇新西蘭白兔32只，體重1800±20g，雌雄不限，兔齡4個(gè)月（由徐州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），隨機(jī)分4組，每組8只，分別為正常對(duì)照組、損傷模型組、藥物Ⅰ組（4h）、藥物Ⅱ組(24h)。正常對(duì)照組腹腔注射生理鹽水11ml；藥物Ⅰ組、藥物Ⅱ組先靜脈注射EGb液10ml（2支），模型組靜脈注射鹽水10ml；模型組、藥物組共三組腹腔注射CCl4液0.5ml/kg。對(duì)照組、模型組、藥物Ⅰ組在用藥后4h心臟取血，藥物Ⅱ組在用藥后24h心臟取血，測(cè)定血清活性氧、XOD、SOD、CAT、GSH、GSH-PX活性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用t檢驗(yàn)分析

2 結(jié)果

EGb對(duì)CCl4致兔氧化損傷的作用見(jiàn)表1。

與正常對(duì)照比較，損傷模型組血清活性氧、XOD活性明顯升高（P﹤0.05），SOD、GSH-PX活性明顯降低（P﹤0.01），GSH水平有降低趨勢(shì)，但差異無(wú)顯著性（P﹥0.05）。

藥物Ⅰ組血清活性氧、XOD水平明顯低于損傷模型組（P﹤0.01），與正常對(duì)照無(wú)明顯差異（P﹥0.05）；SOD、GSH-PX活性明顯低于正常對(duì)照組（P﹤0.05），與模型組比較無(wú)明顯差異（P﹥0.05）；GSH與正常對(duì)照組、損傷模型組比較均無(wú)明顯差異（P﹥0.05）。

藥物Ⅱ組血清活性氧水平明顯低于損傷模型組（P﹤0.01），活性氧、XOD與正常對(duì)照無(wú)明顯差異（P﹥0.05），XOD與模型組比較無(wú)明顯差異（P﹥0.05）；低于正常對(duì)照組（P﹤0.05），與模型組比較，SOD、GSH-PX活性明顯升高（P﹤0.05）；與正常對(duì)照組比，無(wú)明顯差異（P﹥0.05）；與正常對(duì)照組、模型對(duì)照組比較，GSH均無(wú)明顯差異（P﹥0.05）。

3 討論

四氯化碳腹腔注射是急性肝損傷動(dòng)物模型的常用方法［4］，也是氧化損傷模型的常用方法，但其用量只有急性肝損傷模型的1/3～1/2量，自由基是肝細(xì)胞損傷的重要機(jī)制之一。本文數(shù)據(jù)表明兔腹腔注射CCl44h，血中活性氧、XOD活性明顯升高，SOD、GSH-PX等抗氧化酶活性明顯降低，降低的SOD、GSH-PX酶更加促使自由基大量增多，這些氧自由基可攻擊生物膜上不飽和脂肪酸，使之發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，使細(xì)胞膜抗氧化損傷和自身穩(wěn)定性下降，引起膜流動(dòng)性和完整性等損傷，進(jìn)而破壞膜的功能和結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致一系列的不良反應(yīng)。紅細(xì)胞膜的脂質(zhì)過(guò)氧化可引起其理化性質(zhì)改變，降低酶活性及攜氧能力，引起組織細(xì)胞缺血、、缺氧等從而損害肝臟細(xì)胞［3］，這可能是CCl4能夠損傷肝細(xì)胞的途徑之一。另?yè)?jù)報(bào)道CCl4注入大鼠體內(nèi)，脂質(zhì)過(guò)氧化新指標(biāo)-異構(gòu)前列腺素水平可增高200［5］，此結(jié)果與本文資料CCl4能致活性氧、XOD活性明顯升高，SOD、GSH-PX活性水平降低可能有關(guān)。

EGb主要含有黃酮化合物和銀杏內(nèi)酯，據(jù)報(bào)道（2）EGb有清除多種自由基的作用，是一種光譜的自由機(jī)清除劑。EGb含有的多種黃酮甙，如山奈酚與槲皮素的糖苷均能消除超氧陰離子；EGb還能清除羥自由基和一種穩(wěn)定的自由基（二基三硝基苯，DDPH），EGb兼有超氧化物歧化酶作用，能分解超氧陰離子。EGb除有直接清除多種自由基作用外，其對(duì)OH-和O-2的清除、抑制作用隨著藥物濃度增高而增強(qiáng)，作用強(qiáng)于甘露醇［3］，本文也證明了這一點(diǎn)。本文資料同時(shí)表明EGb 可明顯降低XOD，升高血中SOD、GSH-PX活性，對(duì)GSH無(wú)明顯作用。因此EGb具備清除多種自由基、多種抗氧化損傷的途徑，并具備部分降低肝細(xì)胞損傷的藥理作用。但EGb是主要直接清除多種自由基使SOD、GSH-PX消耗減少，還是主要直接促進(jìn)SOD、GSH-PX生成增多而消除自由基，有待進(jìn)一步研究和探討。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 鄧義斌，李才，張秀云.實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠紅細(xì)胞抗氧化體系機(jī)能的變化［J］.中國(guó)病理生理雜志，1995，11（4）：439.

［2］ 陳修.銀杏葉提取物的心腦血管藥物研究進(jìn)展與啟示［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，1996，16（7）：387.

［3］ 劉國(guó)慶，王玉梅，喬勝?gòu)V.銀杏葉片治療急性腦梗塞的臨床觀察［J］.中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥雜志，2002，2（2）：24.

［4］ 徐萍，劉華屏.常用的急性肝損上動(dòng)物模型［J］.中國(guó)病理生理雜志，1995，11（4）：447.

［5］ 王兆鉞.異構(gòu)前列腺素及其意義［J］.生理科學(xué)進(jìn)展，1997，28（1）：79.