放線菌Ｃ－２、Ｃ－３、Ｃ－４發酵產物對小麥白粉病的防治效果

(沈陽農業大學植物保護學院植物免疫室，沈陽110161)

摘要：自2002年以來，從遼寧本溪#65380;遼陽#65380;葫蘆島#65380;鞍山等地采集的土樣中分離得到放線菌菌株252株，采用孢子萌發抑制法#65380;小麥離體葉病害發酵液抑制法篩選出C－2#65380;C－3#65380;C－4 3株放線菌，對小麥白粉病表現出較強的抑制能力#65377;利用這3株菌株的發酵液進行了小麥白粉病田間防治試驗#65377;結果表明，C－2#65380;C－3#65380;C－4 3株菌株的發酵液對病菌孢子萌發的抑制率均在75%以上；對小麥離體葉病害的治療作用分別為84．36%#65380;65．1%和67．91%；田間小區試驗的防治效果分別為79．31%#65380;56．9%和62．07%#65377;

關鍵詞：小麥白粉病；放線菌；發酵液；殺菌活性

中圖分類號：S482．2+92文獻標識碼：B文章編號：0439－8114(2008)06－0663－03

Bio－activity of Metabolites of C－2，C－3，C－4 against Powdery Mildew of Wheat

SUN Fang，CAO Yuan－yin，ZHANG Xiao－lei，WANG Mei－ling

(Institute of Plant Immunology， Shenyang Agricultural University， Shenyang 110161，China)

Abstract：In this study， a total of 78 soil samples for sieving pathogen－inhibiting actinomycetes isolates were collected from towns or counties such as Benxi，Liaoyang，Huloudao，Anshan etc． in Liaoning Province since 2002， 252 isolates of actinomycetes were obtained， and 3 promising isolates， nameed， C－2， C－3， C－4， were singled out according to their ability of inhibiting oidium spore _germination of powdery mildew of wheat and of controlling disease on detached primary leaves． The further study indicated that the fermentation liquids of all three isolates had a rate of spore _germination inhibition above 75%，curbed the disease development on detached leaves at control efficacy of 84．36%，65．1% and 67．91%，and contained field diseases at control efficacy of 79．31%，56．9% and 62．07% respectively．

Key words： powdery mildew of wheat；actinomycetes；bio－control；wheat

小麥白粉病是小麥的主要病害之一#65377;對小麥白粉病的防治長期依賴化學藥劑，但利用化學藥劑會殺死有益農田微生物，破壞農業生態系統，對人類健康造成威脅[1]#65377;1991年山東就曾報道過因使用化學藥劑防治小麥白粉病造成了一定的環境污染[2]#65377;因此，利用病原菌的拮抗菌進行生物防治，以控制植物病害的危害是值得探討的一條途徑#65377;其中放線菌作為農用抗生素的主要產生菌在植物病害的生物防治中占有重要的地位[3]，現已發現的1 000多種微生物來源的生物活性物質中，大約有超過2/3的活性物質來源于放線菌的次生代謝物，所以開發放線菌類生物農藥前景極其廣闊[4]#65377;

Hajlaoui M曾報道過P．flocculosa可以防治小麥白粉病[5]#65377;美國 Agraquest公司也曾利用菌株

Bacillus subtilis strain QST703生產了生物農藥產品[6]#65377;由于前人的研究只是為了篩選出一種廣譜的殺菌生物農藥，并未結合對小麥白粉病的防治效果及作用機理進行具有針對性的研究#65377;所以本試驗在前人研究的基礎上，對小麥白粉病有拮抗作用的3株放線菌進行了深入研究，目的在于為小麥白粉病的生物防治工作提供一些具有一定應用價值的菌株，為其進行更深入研究奠定較好的基礎#65377;

1材料

供試菌株為C－2#65380;C－3#65380;C－4，是從遼寧省本溪市桓仁山區的土壤中分離得到的3株放線菌菌株#65377;供試病原菌為小麥白粉病菌(Bumeria _graminis f．sp．tritici)#65377;供試小麥品種為東北南部麥區主栽品種遼春10號，高感小麥白粉病#65377;培養基：高氏1號合成培養基[7]；液體發酵培養基：小米10 _g，葡萄糖10 _g，蛋白胨3 _g，NaCl 2．5 _g，CaCO3 2 _g，pH 值7．2～7．4#65377;用250 mL三角瓶分裝，每瓶30 mL，121℃滅菌30 min[8]#65377;用于發酵液的制備#65377;

2方法

2．1發酵液的制備

在無菌條件下直接將帶菌種的培養基分割裝入加有30 mL液體培養基的250 mL三角瓶中，用透氣封口膜封口置于28℃#65380;190 r·min^－1的條件下震蕩培養96 h，用紗布濾除菌絲體，然后在2 000r·min^－1常溫條件下離心20 min，除去發酵液中的孢子及部分雜質，收集上清液備用#65377;

2．2抑制病菌孢子萌發試驗

將分離菌株發酵液與3%的融化狀態的瓊脂分別以1∶1的比例混合，滴加到載玻片上，形成一薄層含藥瓊脂培養基，然后將待測定的小麥白粉菌孢子抖落到培養基上，于18℃無光條件下培養48 h，每菌株重復處理3次，以含3%葡萄糖培養基上孢子萌發率作對照，計算孢子萌發抑制率[9]#65377;

2．3室內盆栽小麥離體葉藥效試驗

將小麥播種在花盆內嚴格隔離，避免污染，待長到二葉一心時，將葉片剪成3～4 cm長的葉段，葉背朝上平放在培養皿內經40 mg·L^－1 6－BA保鮮劑濕潤的兩層濾紙上，4次重復，先接種白粉菌，24 h后噴菌液#65377;采用在每段葉片上等距離取3點接種白粉菌，用牙簽點取白粉菌點接，噴藥均以小麥葉片密布小霧滴為準，以噴清水作對照，待室內晾干后蓋上培養皿，放在室溫18～20℃，12 h光照12 h黑暗下培養觀察，約一周后待清水對照充分發病時調查發病嚴重度，計算防治效果[7]#65377;采用DPS數據分析軟件進行差異性分析#65377;

2．4大田防治小麥白粉病試驗

試驗地設在沈陽農業大學植物免疫室的試驗田內，田間栽培管理良好#65377;試驗設C－2#65380;C－3#65380;C－4放線菌發酵液(濃度均為50%)#65380;清水對照和15%三唑酮可濕性粉劑1 000倍液對照5個處理，3次重復，共15個小區#65377;小區面積14 m2，隨機區組排列，小區間及試驗田四周設保護行#65377;采用常規噴霧，在第一次施藥前按照小麥白粉病病害分級標準調查病情指數，然后每隔1周調查1次，連續調查3次，調查病指并計算防效#65377;小麥成熟后測量株高和千粒重，采用DPS數據分析軟件進行差異顯著性分析#65377;

孢子萌發抑制率=(對照萌發率－處理萌發率)/對照萌發率×100%

病情指數=∑(各級病級株(葉)數×發病級別)/(調查總株(葉)數×最高級別)×100

防治效果=(對照病情指數－處理病情指數)/對照病情指數×100%

3結果與分析

3．13株菌株發酵液對病菌孢子萌發的抑制作用

3株菌株對小麥白粉病孢子萌發的抑制作用試驗結果見表1#65377;從表1可見，3株放線菌的發酵產物對小麥白粉病的孢子萌發有很好的抑制作用，其發酵原液在18～20℃下對小麥白粉菌分生孢子萌發的平均抑制率達75%以上，其中菌株C－2發酵液稀釋10倍仍能抑制80%以上的孢子萌發#65377;

3．23株菌株發酵液對小麥離體葉的藥效

3株菌株發酵液對小麥離體葉的藥效試驗結果見表2#65377;從表2可以看出，3株菌株對小麥白粉病都有一定的防治效果，分別為84．36%#65380;65．1%和67．91%，尤其是菌株C－2對小麥白粉病的防治效果非常穩定#65377;

3．33株菌株對小麥白粉病的田間防效

從圖1和表3可以看出，3株菌株對小麥白粉病均有一定的防治效果，以藥后21 d的防效最高，分別為79．31%#65380;56．9%#65380;62．07%#65377;尤其是菌株C－2，對小麥白粉病的防治效果與三唑銅的防治效果基本相當#65377;

3．4不同處理對小麥株高的影響

將不同處理的小麥株高進行方差分析，結果表明，不同處理對小麥株高的影響差異顯著#65377;從表4可以看出，菌株C－3和C－4處理的小麥平均株高高于清水對照，菌株C－2和三唑銅處理的小麥株高與清水對照差異極顯著，但C－2處理的小麥株高稍高于三唑銅#65377;

3．5不同處理對小麥千粒重的影響

從表5可以看出，不同的菌株對小麥千粒重的影響差異顯著#65377;其中對小麥白粉菌防治效果明顯的菌株C－2處理的小麥千粒重明顯高于清水對照，也高于三唑酮，說明防治效果明顯的菌株可以防止小麥產量下降#65377;

4小結與討論

通過3株菌株對小麥白粉菌孢子萌發抑制試驗#65380;小麥離體葉的藥效試驗和大田防治試驗表明，C－2在離體葉藥效試驗中防效穩定，對小麥白粉病防治效果達84．36%；在田間試驗中防治效果良好，達79．31%，且經過C－2處理的小麥株高和千粒重明顯高于清水對照#65377;在孢子萌發抑制試驗中，菌株C－3#65380;C－4對小麥白粉菌孢子萌發的抑制率分別高達75．9%和87．3%，而在大田試驗中菌株C－3和C－4卻沒有表現出明顯的防效#65377;所以在試驗過程中應嚴格操作，盡量避免人為因素造成的試驗誤差#65377;小麥白粉菌孢子萌發受溫度和無性孢子

新鮮程度的影響，在低于18℃或高于20℃，以及小麥白粉菌生長超過7 d的情況下，都會抑制白粉菌孢子的萌發，從而影響試驗結果#65377;在孢子萌發抑制試驗中，控制好溫度和白粉菌孢子新鮮程度是提高試驗結果準確度的關鍵#65377;在一系列的篩選試驗以及株高和千粒重的測定中，菌株C－2始終表現出較好的防效，且C－2的防效與三唑酮相當，小麥發病較輕，生長良好，株高和千粒重均高于三唑酮處理，因此經過優化處理，放線菌菌株C－2有望研發成為理想的生物農藥#65377;

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