堿提油菜子多糖的抗腫瘤活性研究

(華中農(nóng)業(yè)大學(xué)a．食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院；b．理學(xué)院，武漢430070)

摘要：對(duì)堿提菜子多糖及其級(jí)分多糖進(jìn)行了抗腫瘤活性研究，并初步探討了其作用機(jī)理#65377;結(jié)果表明，堿提菜子粗多糖和級(jí)分多糖都能夠起到一定的抑瘤效果，同時(shí)不會(huì)對(duì)荷瘤鼠的肝#65380;腎#65380;脾以及胸腺有明顯的損傷作用，可以提高荷瘤鼠NK細(xì)胞的活性，提高T淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化能力和巨噬細(xì)胞的吞噬能力，促進(jìn)荷瘤鼠的血清溶血素的形成#65377;

關(guān)鍵詞：油菜子；堿提菜子多糖；抗腫瘤活性

中圖分類號(hào)：S565．4．099文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：0439－8114(2008)06－0696－03

Study on the Anti－tumour Effect in Vitro of Polysaccharide Extracted by Ultrasonic－ NaOH from Rapeseed(RSPS)

FENG Ruia，b，XUE Ai－fangb，LI Xiu－juana，CHEN Haob，WU Mou－chenga

(a．College of Food Science and Technology； b． College of Science， Huazhong Agricultural University， Wuhan 430070， China)

Abstract：The anti－tumor activity of RSPS and the mechanism were studied in this paper．The results showed that RSPS has anti－tumor effect， and do not hurt liver， kidney， spleen or thymus of the mice． It could improve the activity of NK cell， the transformation of T cell and the phagocytosis of macrophage， and the formation of serum hemolysin．

Key words： rapeseed； polysaccharide from rapeseed； anti－ tumour effect

目前，全世界每年約有1 000萬人被確診為癌癥患者，約500萬人死于癌癥，占全世界每年死亡人數(shù)的10%左右#65377;我國(guó)每年死于腫瘤的人數(shù)近百萬，待治人數(shù)約150萬左右，其中新患者約100萬#65377;腫瘤已繼心腦血管疾病之后成為我國(guó)居民死亡的第二大疾病#65377;活性多糖是目前研究較多的一類天然生物活性物質(zhì)，大量研究表明[1－3]，某些活性多糖能夠通過活化巨噬細(xì)胞和刺激抗體產(chǎn)生，達(dá)到提高人體免疫力#65380;抵抗腫瘤的作用#65377;為了提高油菜子的綜合利用率，本文在前期研究工作的基礎(chǔ)上[4－6]，對(duì)堿提菜子多糖及其級(jí)分多糖進(jìn)行了抗腫瘤活性研究， 擬考察菜子多糖抗腫瘤活性并探求作用機(jī)理#65377;

1材料與方法

1．1試驗(yàn)材料

1)試驗(yàn)樣品經(jīng)過文獻(xiàn)方法脫蛋白后的粗多糖RSPS以及DEAE－Saphadex A－25柱層析分離的級(jí)分多糖RSPS－2#65380;RSPS－3[5]#65377;

2)試驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)昆明種小白鼠，雌性，體重20．0±2．0 _g，由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供#65377;生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(鄂)2003－0005，使用許可證號(hào)SYXK(鄂)2003－0014#65377;S180細(xì)胞株(S180種鼠)，購(gòu)自華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院藥理研究室#65377;

3)主要試劑RPMI1640培養(yǎng)液，Gibco USA；小牛血清，杭州四季青公司；環(huán)磷酰胺，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司；伴刀豆球蛋白A(ConA)，Sigma公司；SOD試劑盒，南京建成生物工程研究所；MDA試劑盒，南京建成生物工程研究所；LDH試劑盒，南京建成生物工程研究所；GSH－Px試劑盒，南京建成生物工程研究所；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?65377;

1．2試驗(yàn)方法

無菌獲取S180種鼠的腹水，以生理鹽水配成腫瘤細(xì)胞濃度為每毫升1×106個(gè)的細(xì)胞懸液，接種到小鼠右后腿皮下，每只0．2 mL#65377;試驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(NC)#65380;模型對(duì)照組(TC)#65380;陽性對(duì)照組(20 mg·kg^－1·d^－1的Cy)#65380;樣品組(RSPS50#65380;100#65380;200 mg·kg^－1·d^－1#65380;RSPS－2和RSPS－3 100 mg·kg^－1·d^－1)，共8組，每組10只#65377;除正常對(duì)照組外，其余各組動(dòng)物均接種S180腫瘤細(xì)胞#65377;

接種次日開始，按試驗(yàn)分組及劑量對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃給藥#65377;正常對(duì)照組及模型對(duì)照組給等體積生理鹽水，連續(xù)9 d#65377;第10天結(jié)束試驗(yàn)，對(duì)小鼠稱重#65380;眼眶取血后處死小鼠，解剖摘取小鼠瘤塊及免疫器官，進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)[7－8]的分析測(cè)定#65377;

2結(jié)果與分析

2．1菜子多糖體內(nèi)的抑瘤率及免疫器官指數(shù)

菜子多糖體內(nèi)抗腫瘤的抑瘤率見表1，免疫器官指數(shù)見表2#65377;結(jié)果表明，接種了S180肉瘤的小鼠體重增重會(huì)減小，胸腺會(huì)出現(xiàn)明顯的萎縮現(xiàn)象，導(dǎo)致荷瘤鼠的免疫力降低，脾指數(shù)增大；而抗腫瘤藥物環(huán)磷酰胺可能會(huì)導(dǎo)致小鼠體重增重有所回升，促進(jìn)胸腺的萎縮，使脾指數(shù)恢復(fù)接近正常組；菜子多糖可以使小鼠體重增重加快，明顯提高荷瘤鼠的胸腺指數(shù)，使其接近正常水平并降低增大的脾指數(shù)#65377;粗多糖RSPS在高中低劑量組的抑瘤率分別為12．75%#65380;39．26%和36．91%，中劑量組的抑瘤效果最好；在同樣的中劑量條件下，兩個(gè)級(jí)分多糖RSPS－2和RSPS－3的抑瘤率分別為49．33%和37．25%，RSPS－2的抑瘤率要高于RSPS和RSPS－3#65377;

2．2組織切片病理學(xué)觀察

腫瘤組織石蠟切片經(jīng)HE染色，正常細(xì)胞核被染成黑色，胞漿被染成紅色#65377;組織生長(zhǎng)異常時(shí)，可能出現(xiàn)胞核聚集，則出現(xiàn)局部深染#65380;不均勻，或者核分散消失則不見核染色#65380;只見胞漿所染紅色#65377;各組的腫瘤切片見圖1#65377;由圖可見，模型組腫瘤細(xì)胞#65380;組織結(jié)構(gòu)清晰#65380;典型，造模是成功的；抗腫瘤藥物環(huán)磷酰胺對(duì)腫瘤的抑制作用很明顯，但是同時(shí)也會(huì)損傷胸腺和肝臟；菜子多糖對(duì)腫瘤有不同程度的抑制作用，同時(shí)未見對(duì)肝#65380;腎#65380;脾#65380;胸腺造成損傷#65377;

2．3菜子多糖對(duì)荷瘤鼠NK細(xì)胞活性的影響及T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響

體外檢測(cè)NK細(xì)胞活性是了解NK細(xì)胞功能及其與某些疾病關(guān)系的一個(gè)重要手段#65377;淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)是檢測(cè)機(jī)體細(xì)胞免疫功能的一種體外試驗(yàn)，轉(zhuǎn)化率的高低可以直接反映機(jī)體細(xì)胞免疫功能的水平#65377;當(dāng)T淋巴細(xì)胞受到ConA刺激后發(fā)生母細(xì)胞增殖反應(yīng)，或細(xì)胞特別是增殖細(xì)胞中的線粒體水解酶可將MTT分解為藍(lán)紫色結(jié)晶，其光密度值能反映細(xì)胞的增殖情況#65377;由表3可知，接種了S180腫瘤細(xì)胞的小鼠NK細(xì)胞活性和T淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化能力與正常組相比會(huì)下降；抗腫瘤藥物環(huán)磷酰胺可以提高T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的能力但同時(shí)進(jìn)一步損傷NK細(xì)胞；菜子多糖可以明顯提高荷瘤鼠NK細(xì)胞的活性和T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的能力，粗多糖RSPS在中劑量條件下效果比高低劑量條件下的效果好，同等劑量條件下，RSPS－2能顯著提高荷瘤鼠的NK細(xì)胞活性，使其恢復(fù)甚至超過正常組#65377;由此可以初步推斷，RSPS－2的抗腫瘤是通過提高其淋巴細(xì)胞及NK細(xì)胞的活力來間接作用于腫瘤細(xì)胞，從而起作用的#65377;

2．4菜子多糖對(duì)荷瘤鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力及遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)的影響

巨噬細(xì)胞是機(jī)體抗腫瘤免疫中的重要效應(yīng)細(xì)胞，具有吞噬#65380;免疫調(diào)節(jié)等功能，其抗腫瘤作用的最大特點(diǎn)是對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷具有選擇性#65377;遲發(fā)型超敏反應(yīng)是檢測(cè)細(xì)胞免疫功能的常用方法之一，是由特異性致敏效應(yīng)T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)#65377;二硝基氟苯(DNFB)是一種半抗原，將其按一定濃度涂于小鼠腹壁后會(huì)與皮膚蛋白結(jié)合形成全抗原，能刺激T淋巴細(xì)胞增殖成致敏淋巴細(xì)胞，再次攻擊后會(huì)誘發(fā)遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)#65377;DTH與機(jī)體免疫能力一致，它是由特異性致敏效應(yīng)T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)，是檢測(cè)細(xì)胞免疫功能的常用方法之一#65377;試驗(yàn)結(jié)果(表4)表明，接種了S180腫瘤的小鼠，巨噬細(xì)胞的吞噬能力下降，遲發(fā)型超敏反應(yīng)的程度明顯低于正常組；抗腫瘤藥物環(huán)磷酰胺會(huì)加劇破壞巨噬細(xì)胞的吞噬能力，提高荷瘤鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的程度使之超過正常水平；而菜子多糖普遍可以提高荷瘤鼠的巨噬細(xì)胞的吞噬能力，提高荷瘤鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的程度#65377;其中，級(jí)分多糖RSPS－2的效果已經(jīng)超過正常組，而RSPS－3和RSPS也可以使荷瘤鼠的巨噬細(xì)胞的吞噬能力有所回升，提高荷瘤鼠的遲發(fā)型超敏反應(yīng)程度，使之接近正常水平#65377;

2．5菜子多糖對(duì)荷瘤鼠血清溶血素形成的影響

菜子多糖對(duì)荷瘤鼠血清溶血素形成的影響見表5#65377;接種了S180腫瘤細(xì)胞的小鼠，血清溶血素比正常水平有所下降，抗腫瘤藥物環(huán)磷酰胺則明顯降低了荷瘤鼠血清溶血素的形成；粗多糖RSPS在高中劑量組可以明顯提高荷瘤鼠的血清溶血素的形成，使之超過正常水平；級(jí)分多糖RSPS－2和RSPS－3的影響沒有RSPS明顯，但是也可以使荷瘤鼠的血清溶血素接近或超過正常水平#65377;

3結(jié)論

抗腫瘤藥物環(huán)磷酰胺的使用，可起到明顯的抑瘤作用，但是同時(shí)會(huì)造成肝的腫大和胸腺的損傷；菜子多糖可以起到一定的抑瘤效果，但不會(huì)對(duì)荷瘤鼠的肝#65380;腎#65380;脾以及胸腺有明顯的損傷作用，可以提高荷瘤鼠NK細(xì)胞的活性，提高T淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化能力和巨噬細(xì)胞的吞噬能力，提高荷瘤鼠的血清溶血素的形成#65377;推測(cè)其機(jī)理，可以初步斷定，RSPS－2是通過提高NK細(xì)胞活性，提高T淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化能力和巨噬細(xì)胞的吞噬能力來起到抗腫瘤作用的#65377;

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