丹東河蚌多肽成分的提取研究

(遼東學院化工與材料學院，遼寧 丹東118003)

摘要：以丹東地區河蚌(褶紋冠蚌)的蚌淚和蚌肉為原料，對多肽提取工藝進行了研究#65377;試驗結果表明，在2 450 MHz#65380;750W微波功率下提取5 min，濾液經MW10 000 D的透析袋用去離子水透析，于80℃以下真空濃縮#65377;濃縮液冷至4℃，加5倍體積－20℃的丙酮，靜置，過濾，濾餅于80℃以下真空干燥得到多肽#65377;其純度可達92．1%，收率0．602%#65377;

關鍵詞：河蚌；蚌淚；多肽

中圖分類號：Q516；S986．2文獻標識碼：A文章編號：0439－8114(2008)06－0709－02

Study on Extracting Multi－peptides from Mussel in Dandong

DU Chun－lin，HONG Zhe，MENG Hui

(College of Chemical Engineering Material Science， Liaodong University， Dandong 118003， Liaoning， China)

Abstract： Conditions of multi－peptides extraction was studied from tears and meat of mussel(Cridtaria plicata Lea)in Dandong． The results indicated that multi－peptides were extracted with the process as follows：in 2 450 MHz，750W microwave power the raw materiels was extracted for 5 minutes， deionized water were dialysised from filtrate with MW10000D dialysis bag，then the filtrate was concentrated in vacuum under 80℃，concentrated liquid was cooled to 4℃，－20℃ acetone which size was 5 times as cooled liquid was added， concentrated liquid was filtered， filtering cake was dried under80℃ in vacuum ．The purity of multi－peptides was 92．1%， the yield was 0．602%．

Key words： mussel； exucate of mussel； multi－peptides

河蚌(Mussel)又名河蛤蜊，為蚌科動物，包括背角無齒蚌#65380;褶紋冠蚌#65380;三角帆蚌，生活于江河湖泊中，不同部位所含的成份不同，其作用不同[1]#65377;全國大部分地區都有分布，丹東地區尤為豐富#65377;從江蘇褶紋冠蚌(Cridtaria plicata Lea)提取的混合液(KAL)，制成靜脈注射劑和口服液，對動物抗腫瘤作用及免疫藥理作用十分明顯，對小鼠S180實體癌的生長口服抑制率在41%～60%，對接種的S180瘤株及EAC瘤株腹水型癌小鼠的生存期延長率平均在40%，可提高免疫力，對DTH#65380;PFC#65380;MΦ#65380;IL—2有明顯影響[2，3]#65377;國內陸續有河蚌提取物的鎮痛#65380;抗炎作用觀察，蚌肉提取物及河蚌多糖對免疫系統的影響和抗腫瘤作用的觀察[4，5]#65377;KAL的成分之一是多肽，作者用本地區盛產的河蚌(褶紋冠蚌)提取多肽(Polypeptide)，以與同品種的河蚌提取物KAL作抗癌活性對比，選擇具抗癌作用的有效成分#65377;

1材料與方法

1．1材料

①河蚌：褶紋冠蚌(丹東寬甸)#65377;②儀器：WT1升微波動態提取設備(甘肅天水華圓制藥設備科技有限責任公司)，722S可見分光光度計#65377;③試劑[6]：標準酪蛋白溶液500 μg·mL^－1，Folin－酚試劑甲，Folin－酚試劑乙#65377;化學試劑(化學純或分析純)#65377;

1．2方法

1．2．1工藝路線

1．2．2多肽提取取新鮮河蚌的蚌淚和蚌肉共500 _g，加水100 mL，勻漿，經2 450 MHz#65380;750 W微波處理5 min，控制80～85℃加熱10 min，過濾，濾液裝MW10 000D的透析袋用去離子水透析3次，每次24 h，測出每次透析外液的肽含量，分別于80℃以下真空濃縮#65377;濃縮液冷至4℃，加5倍體積－20℃的丙酮，靜置24 h，過濾，濾餅于80℃以下真空干燥，即得每次實收的多肽重量#65377;所得多肽總重量為3．01 _g，收率0．602%#65377;

1．2．3單因素試驗對河蚌勻漿后的微波提取條件進行優化#65377;先固定微波提取時間和溫度，找出最佳微波功率；再固定微波功率及時間，找出最佳提取溫度；然后固定微波功率和提取溫度，找出最佳提取時間#65377;用同樣的方法分別考查透析次數#65380;透析時間#65380;濃縮液的pH值#65380;沉淀劑的溫度和用量及靜置沉淀溫度對收率的影響#65377;

1．2．4提取物的檢驗及純度的測定①提取物的檢驗：產品與Folin－酚試劑甲作用顯紫紅色，與Folin－酚試劑乙作用顯藍色，證明為多肽#65377;②標準曲線繪制：取6支試管，按表1劑量加入各試劑，先加入酪蛋白標準溶液#65380;0．90%NaCl溶液和Folin－酚試劑甲，搖勻，室溫下放置10 min，再加入Folin－酚試劑乙和相當于多肽酪蛋白濃度(g·L^－1)#65377;每管加入酚試劑后立即搖勻，30 min后，于波長650 nm下測吸光度#65377;得線性方程■=0．005 3x+0．005(r2=0．999 2)#65377;③多肽樣品絕度測定：準確稱取多肽產品0．25 _g，配成2．5×10－4 _g·L^－1的0．9%NaCl溶液，取該液1．0 mL，加Folin－酚試劑甲5．0 mL及Folin－酚試劑乙0．5 mL，測吸光度，求得多肽產品的純度為92．1%#65377;

2結果與分析

1)微波功率#65380;提取溫度和時間對提取率的影響我們考查了微波功率#65380;提取溫度及時間對多肽提取效率的影響，試驗證明，當微波功率750 W#65380;溫度控制在80～85℃時提取10 min，提取效率最高#65377;

2)多肽收率與透析次數的關系試驗證明，多肽收率隨著透析次數的增多而增大，以多肽總收率為縱坐標，透析次數為橫坐標作圖(圖1)#65377;

3)濃縮液的pH值對沉淀的影響不同pH值的濃縮液對沉淀的影響表明，當濃縮液的pH值為5．5時，加入冷凍的丙酮液，保持沉淀液溫度為4℃時靜置，產物的收率較高#65377;

4)沉淀劑用量對收率的影響沉淀劑丙酮的

用量直接影響到多肽的收率，分別考查了不同量的沉淀劑與濃縮液的體積比對產品收率的影響，結果見圖2#65377;由圖2可知，產品收率隨沉淀劑用量(倍數)的增大而增加，當沉淀用量(倍數)達到5時，產品收率最高，再增大倍數，產品收率不再增加#65377;

5)沉淀劑溫度對產品收率的影響沉淀劑丙

酮的溫度影響多肽的收率，當加入量為同種相同體積濃縮液5倍時，分別考查了不同溫度對產品收率的影響，結果見表2#65377;由表2可知，當加入的沉淀劑溫度為－20℃時，產品收率最高#65377;

6)靜置溫度對產品收率的影響靜置溫度對產品收率有較大影響，分別考查了不同溫度條件下靜置沉淀產品的收率(圖3)#65377;由圖3可見，當靜置溫度大于5℃時，產品收率明顯減少#65377;

3小結

通過試驗確定了河蚌中多肽的最佳提取工藝為2 450 MHz#65380;750 W微波處理5 min，控制80～85℃加熱10 min，濾液用MW10000 D透析袋對去離子水透析3次#65377;濃縮液pH值為5．5時，用濃縮液5倍量的－20℃丙酮為沉淀劑，沉淀液溫度控制在4℃#65377;

參考文獻：

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北京大學生物系生物化學教研室．生物化學實驗指導[M]．北京：高等教育出版社，1979．30－31．