ＲＰ－ＨＰＬＣ法測(cè)定三九胃泰顆粒中兩種黃酮類成分的含量

摘 要 目的：對(duì)三九胃泰顆粒中的2種主要黃酮類成分5，7，3’，4’-四甲氧基黃酮(Ⅰ)和 5，7，3’，4’，5’-五甲氧基黃酮(Ⅱ)進(jìn)行含量測(cè)定。方法：采用反相高效液相色譜法，使用ZORBAX Extend C18柱(250mm×4．6mm，5μm)，流動(dòng)相為甲醇-水梯度洗脫（0～18 分鐘為35:65，19～22分鐘為0:100），流速1．2ml/分，檢測(cè)波長(zhǎng)337nm，柱溫25℃。結(jié)果：化合物Ⅰ、Ⅱ進(jìn)樣量在0．4～4．0μg范圍內(nèi)均有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r均為0．9999（N=6）；化合物Ⅰ、Ⅱ的平均回收率（N=6）分別為100．6%和102．6%，RSD分別為1．02%和1．09%。結(jié)論：本方法能夠準(zhǔn)確地測(cè)定三九胃泰顆粒中的2種主要黃酮類化合物的含量，其測(cè)定結(jié)果可為三九胃泰顆粒質(zhì)量控制提供新的依據(jù)。

關(guān)鍵詞 三九胃泰顆粒 黃酮 RP-HPLC 含量測(cè)定

三九胃泰顆粒處方由三椏苦、黃芩、九里香、兩面針、木香、茯苓、白芍、地黃共八味中藥組成，其中九里香為主要藥材。我們從九里香分離得到兩種主要的甲氧基黃酮類成分，經(jīng)NMR等波譜學(xué)手段，鑒定它們分別是5，7，3’，4’-四甲氧基黃酮（即九里香酮）和 5，7，3’，4’，5’-五甲氧基黃酮，并采用HPLC法測(cè)定了這兩種化合物在三九胃泰中的含量。由于三九胃泰部頒標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定項(xiàng)下僅有黃芩苷含量測(cè)定，因此本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果為三九胃泰顆粒的質(zhì)量全面控制提供新的依據(jù)。

資料與方法

儀器與材料：Agilent 1100高效液相色譜儀，VWD檢測(cè)器，Agilent 1100色譜工作站。甲醇為色譜純，水為重蒸餾水。電子天平為Mettlertoledo AG135型。三九胃泰顆粒為市售成藥，共11批次，購(gòu)自長(zhǎng)春市吉林大藥房。

化合物Ⅰ、Ⅱ的對(duì)照品均為自制，系從九里香葉提取物中分離得到，并經(jīng)1H-NMR、13C-NMR、MS、IR和UV等光譜鑒定其結(jié)構(gòu)；按本方法色譜條件，歸一化測(cè)得純度分別為98．2%和99．8%。

色譜條件：ZORBAX Extent C18柱(250mm×4．6mm，5μm)，柱溫25℃，流動(dòng)相為甲醇-水梯度洗脫（0～18分鐘為35:65，19～22分鐘為0:100），流速1．2ml/分，檢測(cè)波長(zhǎng)337nm，進(jìn)樣量20μl。

方法學(xué)考察：線性關(guān)系考察；精密度試驗(yàn)；重復(fù)性試驗(yàn)；加樣回收率試驗(yàn)，結(jié)果化合物Ⅰ、Ⅱ平均回收率（N=6）分別為100．6%（RSD為1．02%）、102．6%（RSD為1．09%）；穩(wěn)定性試驗(yàn)。方法學(xué)考察結(jié)果均滿足相關(guān)要求。

含量測(cè)定：對(duì)照品溶液制備：精密稱取化合物Ⅰ和化合物Ⅱ的對(duì)照品各4．0mg，置同一100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。

供試品溶液制備：取10個(gè)不同批號(hào)的三九胃泰顆粒，每個(gè)批號(hào)取3袋，混合均勻，精密稱取40g，分別用甲醇超聲提取3次，每次加甲醇100ml，超聲時(shí)間分別是1小時(shí)，合并提取液，蒸干溶劑，加甲醇溶解并定容至25．0ml，過(guò)0．45μm微孔濾膜，制得供試品溶液。

樣品的測(cè)定：分別取上述對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算樣品中化合物Ⅰ、Ⅱ的含量。

結(jié) 果

測(cè)得的10批樣品結(jié)果，見(jiàn)表1。

討 論

測(cè)定波長(zhǎng)的選擇：紫外光譜圖顯示化合物Ⅰ、Ⅱ皆在337nm附近有最大吸收，故選定337nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

流動(dòng)相選擇：分別采用乙腈-水、甲醇-水作為流動(dòng)相，發(fā)現(xiàn)前者不能使所測(cè)化合物與樣品中其他成分達(dá)到基線分離，而前者的分離效果較好，故采用甲醇-水為流動(dòng)相。此外，為將樣品中的其他成分在一個(gè)分析周期內(nèi)從色譜柱中洗脫出來(lái)，采用了梯度洗脫的方式，在所選色譜條件下，待測(cè)的2種化合物均達(dá)到基線分離。

本文考察了提取溶劑，通過(guò)HPLC測(cè)定，比較了水、甲醇、乙醇和氯仿，結(jié)果以甲醇的提取率最高，水的提取率最低；通過(guò)對(duì)甲醇室溫冷浸24小時(shí)、回流提取1小時(shí)、超聲提取1小時(shí)提取率的比較，發(fā)現(xiàn)回流提取率最高。而回流提取3次和4次的提取率基本一致，最終確定每次加入甲醇量為15ml，回流時(shí)間均為1小時(shí)即可使提取率達(dá)到最高。

小結(jié)：本測(cè)定方法可以準(zhǔn)確、便捷地測(cè)定三九胃泰顆粒中黃酮類成分，化合物Ⅰ、Ⅱ能達(dá)到基線分離，重復(fù)性及回收率較好，結(jié)果可靠。各批次的三九胃泰中5，7，3’，4’，-四甲氧基黃酮（G）和5，7，3’，4’，5’-五甲氧基黃酮（H）的含量基本穩(wěn)定，平均值分別為24μg/g和20μg/g。本文的研究結(jié)果可為三九胃泰顆粒質(zhì)量控制提供了新的依據(jù)。

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