四種方法檢測甲胎蛋白的比較

摘 要 目的：比較時間分辨熒光免疫法（TRFIA）、微粒子化學發光法（CLA）、放射免疫法（RIA）和酶免疫法（EIA）四種方法檢測甲胎蛋白（AFP）的線性、重復性、準確性和對比試驗。方法：用不同濃度AFP分別進行了線性、精密度和回收試驗。結果：TRFIA、CLA、RIA、和EIA四種方法的線性范圍分別為1～1000ng/ml，1～1000ng/ml，10～400ng/ml和10～300ng；平均批內CV分別為3．75%、2．88%、5．08%和6．78%；平均批間CV分別為4．56%、3．45%、5．88%和7．72%；平均回收率分別為96．8%、97．1%、95．4%和92．6%。對比試驗為TRFIA與CLA的相關系數r=0．991，TRFIA與RIA的相關系數r=0．963、TRFIA與EIA的相關系數r=0．843。結論：TRFIA法和CLA法是目前檢測AFP理想的定量方法。

關鍵詞 時間分辨熒光免疫 化學發光免疫 放射免疫 酶免疫 甲胎蛋白

材料和方法

試劑與儀器：TRFIA法用豐華Ⅰ型時間分辨熒光免疫分析系統及其配套試劑：CIA法用Beckman公司ACCESS化學發光分析以及配套試劑；RIA法用SN-682型放射免疫γ-計數儀及中國原子能科學研究所試劑；ELA法用伯樂450型酶標儀；香港大龍洗板機及杭州埃夫郎公司進口AFP單抗試劑盒。

方法：TRFIA法：用Eu標雙抗體夾心一步法，按試劑說明書進行。CLA法：用ACCESS全自動發光免疫分析儀自動分析。RIA法：100ul血清及標準品加125I-AFP抗體混合，37℃、3小時。測每分鐘脈沖數，然后各管加分離劑1ml，室溫15分鐘后，以4000轉/秒離心15分鐘，棄上清液，在用γ-計數儀測各管衰變率，計算AFP含量。ELA法：血清20μl加緩沖液150μl，37℃、30分鐘，洗板5次拍干，加酶標抗體200μl。37℃、30分鐘，洗板5次拍干，加顯色劑顯色，酶標儀測OD值，計算AFP含量。

結 果

線性試驗：將標準液按不同濃度稀釋后做線性分析，結果顯示，TRFIA和CLA法的線性分別在1～1000ng/ml范圍呈良好的線性關系。而RIA和ELA法的線性分別在10～400ng/ml和10～300ng/ml范圍內呈良好的線性關系。提示TRFIA和CLA法線性最寬。

回收試驗：取不同濃度的混合學清，分別加不同濃度的標準品（乘稀釋倍數）。用四種方法測得的回收率分別為95．6～104．5%，91．2～106．5%，90．3～109．7%和85．6～112．8%，平均回收率分別為96．8%，97．1%，95．4%和92．6%。

對比試驗：用四種方法同時測定20份血清樣本。對比分析表明，TRFIA與CLA法的回歸方程為y=16．25+15．21x，r=0．991；TRFIA與RIA法的回歸方程為y=11．21+10．12x，r=0．963。TRFIA與ELA法的回歸方程為y=1．21+1．12x，r=0．872。

重復性試驗：取低、中、高值AFP（20，300，1000ng/ml）標準品分別用四種方法同時平行測定10次的批內變異和連續10天測定的批間變異，見表1。

討 論

目前較常用的測定方法主要是ELA法和RIA法^[1，2]，前者操作簡便，但是檢測甲胎蛋白靈敏度很低，線性較窄，高濃度AFP出現“鉤狀效應”，如不預先稀釋，常出現假陰性結果，很容易造成漏診。后者靈敏度較高，但存在標記物半衰期短和放射性污染而逐漸被CLA和TRFIA所取代。

TRFIA與CLA法的檢測靈敏度可高達1×10，兩者的檢測指標相當，兩者均可實現全自動監測。不僅如此，本研究結果表明，兩者的線性，重復性，準確性均較RIA法和ELA法為優，是現代免疫學定量分析的理想方法。

參考文獻

1 網江平，李炎萍，張明輝，等.甲胎蛋白定量與肝臟疾病的關系.中西醫結合肝病雜志，2003，13(3):167-168.

2 鄭玲，鄧文余，姚履楓.310例HBV感染者甲胎蛋白臨床意義的評估.中西醫結合，肝病雜志，2003，1:118-119.