ＡＴ１Ｒ在腎間質纖維化中的表達及銀杏葉片的干預作用

028000內蒙古自治區通遼市醫院神經內科1

130000吉林大學藥學院實驗藥理與毒理學教研室2

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摘 要 目的：探討AT1R（血管緊張素Ⅱ1型受體）在腎間質纖維化發生發展中的作用及意義，并觀察銀杏葉片對AT1R在腎臟中表達的影響。方法：采用單側輸尿管梗阻（UUO）手術復制大鼠腎間質纖維化模型，通過免疫組織化學技術，從細胞水平及分子水平研究AT1R在UUO大鼠腎間質中的表達情況。結果：UUO 2周后，與假手術組比較，模型組大鼠AT1R表達量明顯增加；與模型組比較，銀杏葉片治療組與苯那普利治療組腎間質AT1R表達量明顯減少。結論：AT1R在UUO大鼠腎臟中高表達，AngⅡ與其結合后，通過多種途徑參與腎間質纖維化的形成，促進纖維化病變的發展。銀杏葉片有減輕腎間質纖維化程度、延緩腎間質纖維發展進程的作用。

關鍵詞 單側輸尿管梗阻 銀杏葉片 腎間質纖維化 AT1R

材料和方法

實驗動物：Wistar大鼠。

主要試劑：銀杏葉片、鹽酸苯那普利、即用型SP免疫組化染色試劑盒及DAB顯色試劑盒，其他試劑均為分析純。

主要儀器：LKB-Ⅴ型超薄切片機、凝膠圖像處理系統、TECHNE TC-312 PCR擴增儀、低溫高速離心機、Olympus PM-10AO全自動顯微照相裝置、電泳裝置。

實驗動物及分組：體重200～220g的Wistar大鼠24只，雌雄各半，隨機分為四組，每組6只。分別為：假手術組（Sham組）、模型組（UUO組）、苯那普利組（Benazepril組）及銀杏葉片組（Gb組）。

單側輸尿管梗阻模型（UUO）的制備：大鼠適應性飼養7天后，禁食12小時，10%水合氯醛 2ml/kg腹腔麻醉，無菌條件下行腹正中偏左縱切口2cm進入腹腔，游離左側輸尿管，在靠近腎門處及輸尿管下段分別結扎并從中間剪斷輸尿管，逐層縫合腹壁及皮膚。假手術組分離輸尿管（但不結扎和剪斷輸尿管）后即關閉腹腔。

給藥方法：自造模后第2天起各組動物開始給藥。銀杏葉片組以300mg/kg（以總黃酮苷計）體重銀杏葉片懸液灌胃，每日1次；苯那普利組以15mg/kg體重苯那普利混懸液灌胃，每日1次；模型組和假手術組給予等量生理鹽水灌胃，每日1次。給藥2周后，各組大鼠處死、取材。

腎臟形態學檢測：大鼠處死后，取雙側腎臟，稱重后，用鋒利刀片自腎門處作冠狀切面將腎臟半剖開，取腎臟上極標本立即置入新配4%多聚甲醛溶液中固定48小時，常規制備石蠟切片，進行AT1R免疫組織化學染色。

免疫組化染色結果的定量分析：在每張切片不包含腎小球和血管的腎小管間質區域隨機選取10個高倍鏡視野（×400），用JEDA801D病理圖像分析系統對所選視野內的免疫組化陽性信號進行圖像分析，計算不同時間點各組大鼠腎組織陽性信號的平均光密度。

統計學分析：所有數據用均數±標準差（X±s）表示。顯著性檢驗采用SPSS 11.5軟件，組間差異用方差分析或秩和檢驗進行統計學檢驗。

結 果

AT1R免疫組化染色結果：在正常腎間質中有少量AT1R表達；UUO 2周后，可見UUO模型組大鼠AT1R表達量較假手術組明顯增加（P<0.01）；與UUO模型組比較，銀杏葉片治療組與苯那普利組腎間質AT1R表達量明顯減少（P<0.05）。

討 論

UUO動物模型所致纖維化的機制可能與尿路壓力升高、腎組織缺血缺氧、炎細胞浸潤、氧化應激及細胞因子和生長因子表達增加等因素有關。

銀杏葉提取物（GbE）的有效成分主要為黃酮類和萜內酯類化合物。大量研究證明，GbE不但具有擴血管作用，而且還具有降血脂、抗凝血、清除自由基、抗炎、鎮痛、抗腫瘤等作用，因而已被廣泛應用于心、腦血管疾病的預防和治療。近年來，有學者將其應用在腎臟缺血再灌注損傷及中藥腎臟毒性的實驗研究中，初步證明GbE對腎臟功能有明顯保護作用，如可顯著減少蛋白尿、升高血清蛋白、降低UUN及BUN、減少Ccr等^[1]。對腎缺血再灌注損傷的實驗研究表明，GbE能降低腎缺血再灌注所致的過氧化脂質的增高，提高清除氧自由基的超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）及ATP酶的活性，明顯提高腎缺血再灌注損傷動物的抗氧化能力，從而抑制腎小球擴大，減少纖維組織增生，保護腎單位，改善腎功能^[2，3]。

本實驗采用單側輸尿管梗阻手術復制大鼠腎間質纖維化模型，通過免疫組織化學技術從細胞水平及分子水平研究AT1R在UUO大鼠腎間質中的表達情況，旨在探討AT1R在腎間質纖維化發生發展中的作用及意義，并觀察銀杏葉制劑對AT1R在腎臟中表達的影響，闡明其減輕腎間質纖維化程度、延緩腎間質纖維化發展進程的作用及其機制，為逆轉和減輕腎間質纖維化提供可靠的科學理論依據。

近年研究證明，腎組織局部RAS（腎素-血管緊張素系統）在腎間質纖維化形成中具有重要作用。

AngⅡ的生物學效應是通過與細胞膜上特異性受體結合實現的。ACE抑制劑（ACEI）通過抑制AngⅡ合成，使AngⅡ對AT1R和AT2R的作用均降低。

本研究發現，正常腎間質中有少量AT1R表達，在UUO 2周后， UUO模型組大鼠AT1R表達量明顯高于假手術組，與UUO模型組比較，銀杏葉片治療組與苯那普利組腎間質AT1R表達量明顯減少，說明RAS在腎間質纖維化發生發展中起重要作用，銀杏葉片可通過下調AT1R的表達量，減少AngⅡ與其結合量，而延緩腎間質纖維化發生發展。

參考文獻

1 劉曉剛，劉素雁，隋滿姝. 銀杏葉提取物治療實驗性腎病綜合征的實驗研究. 中國中西結合腎病雜志 2006， 7(4): 205-207.

2 夏安周，邢淑華，張如輝. 銀杏葉提取物對腎缺血再灌注損傷的保護作用. 中國藥理學通報 2004， 20(7): 839-840.

3 張晶晶， 劉晉芝， 石少慧， 劉和娣。銀杏葉提取物對兔腎缺血再灌注損傷的保護作用。中國中醫藥科技 2005， 12(4): 227-228.