錯配修復(fù)基因(蛋白hMSH2)在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及意義

關(guān)鍵詞 錯配修復(fù)蛋白 正常子宮內(nèi)膜免疫組化

資料與方法

2003年4月～2007年8月20例來本院就診的正常子宮內(nèi)膜患者，手術(shù)治療子宮肌瘤的正常內(nèi)膜，其中增生期內(nèi)膜10例，分泌期內(nèi)膜10例。

本組24例子宮內(nèi)膜癌標(biāo)本，均取自收檢的手術(shù)標(biāo)本石蠟包埋組織。選取臨床病理資料完整的病例，所有患者術(shù)前均未經(jīng)任何治療。根據(jù)1988年ISGP分類法:病理診斷為“中-重度不典型增生”者2例;“子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤”1例;“子宮內(nèi)膜癌肉瘤(惡性苗勒氏管混合瘤)”1例;“子宮內(nèi)膜腺癌”20例，其中Ⅰa 2例，Ⅰb 9例，Ⅰc 5例;Ⅱa 3例，Ⅲa 3例;GI 10 例，G2 3例，G3 7例。以上標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定常規(guī)石蠟包埋連續(xù)切片。所有切片均經(jīng)病理檢查證實。

研究方法:石蠟切片常規(guī)脫蠟、水化，繼以免疫組化試劑盒檢測，操作步驟按說明書進(jìn)行。同一切片還進(jìn)行PCNA的SP法免疫組化染色。所有切片一批完成，陽性對照顯色后立即全部終止反應(yīng)。

結(jié)果判定:用光學(xué)顯微鏡檢查顯色反應(yīng)。hMSH2蛋白表達(dá)細(xì)胞核和細(xì)胞漿呈棕黃色顆粒為陽性。高倍鏡下每一張切片角及中央取5個高倍視野，各計算100個瘤細(xì)胞中陽性細(xì)胞所占的比例。同法判定正常子宮內(nèi)膜標(biāo)本。判定標(biāo)準(zhǔn):陽性(-):每張切片無棕黃色顆粒出現(xiàn)或陽性瘤細(xì)胞數(shù)≤10%;弱陽性(+);每張切片陽性瘤細(xì)胞數(shù)11%～30%;陽性(++):每張切片陽性腫瘤細(xì)胞數(shù)30%～50%;強陽性(+++):每張切片陽性瘤細(xì)胞數(shù)≥50%。

統(tǒng)計學(xué)處理:采用X2檢驗及四格表精確概率法進(jìn)行資料數(shù)據(jù)處理。

結(jié) 果

hMSH2蛋白和PCNA在正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá):hMSH2蛋白在正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá)。20例正常子宮內(nèi)膜組織中增生期10例、分泌期10例，其中hMSH2和PCNA均為細(xì)胞核內(nèi)著色。增生期腺體和間質(zhì)細(xì)胞hMSH2蛋白和PCNA均呈陽性表達(dá)，分泌期腺體細(xì)胞中hMSH2和PCNA的表達(dá)有所減弱甚至消失，而間質(zhì)細(xì)胞中則仍為陽性。HMSH2蛋白的表達(dá)與月經(jīng)周期不同時期的相關(guān)性，HMSH2蛋白在增生期和分泌期的表達(dá)有顯著差異(P<0005)。

hMSH2蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá):子宮內(nèi)膜癌組織中hMSH2蛋白表達(dá)強度，hMSH2蛋白的表達(dá)強度在正常子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌組織中有顯著差異(P<0025)。

hMSH2蛋白的表達(dá)與病理分級的相關(guān)性:24例子宮內(nèi)膜癌組織中，高分化(G1)10例，hMSH2蛋白呈陽性表達(dá)者9例;中分化(G2)3例，hMSH2蛋白呈陽性表達(dá)者3例;低分化(G3)7例，hMSH2蛋白呈陽性表達(dá)者6例。高、中、低分化的子宮內(nèi)膜組織中hMSH2蛋白表達(dá)無顯著差異(P>005)。

hMSH2蛋白表達(dá)與臨床分期的相關(guān)性:hMSH2蛋白的表達(dá)與臨床FIGO分期無明顯相關(guān)性(P>005)

討 論

子宮內(nèi)膜組織學(xué)的周期性改變:子宮內(nèi)膜在結(jié)構(gòu)上分為基底層和功能層，基底層直接與子宮肌層相連，此層不受月經(jīng)周期中激素變化的影響，在月經(jīng)期不發(fā)生脫落。功能層靠近宮腔，它受卵巢激素的影響呈周期性變化。一般而言，增生期子宮內(nèi)膜腺上皮與間質(zhì)細(xì)胞呈增生狀態(tài)，腺體數(shù)增多、增長。腺上皮細(xì)胞表現(xiàn)增生活躍，細(xì)胞呈柱狀，有分裂相。到分泌期，內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞的增生停止，上皮細(xì)胞開始出現(xiàn)分泌功能，間質(zhì)細(xì)胞分化為肥大的蛻膜樣細(xì)胞。因此，子宮內(nèi)膜在月經(jīng)周期的不同時期，細(xì)胞的增殖活性也各不相同。本研究針對這一現(xiàn)象，通過免疫組化的方法，對正常的子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌，標(biāo)記hMSH2，以觀察其表達(dá)的規(guī)律。在正常的子宮內(nèi)膜中，不論功能層中的腺體細(xì)胞，還是間質(zhì)細(xì)胞在月經(jīng)周期中的增生期，其細(xì)胞均活躍地進(jìn)入細(xì)胞周期;而分泌期則只有基質(zhì)細(xì)胞仍保持細(xì)胞的增殖性。

hMSH2蛋白的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌:最新的研究結(jié)果表明，在與腫瘤發(fā)生有關(guān)的基因中，除癌基因、抑癌基因、凋亡基因、抑凋亡基因外，還存在著另一類基因，即錯配修復(fù)基因。對錯配修復(fù)基因的發(fā)現(xiàn)和研究，是近年來分子生物學(xué)領(lǐng)域的一項重大進(jìn)展。本研究中，在子宮內(nèi)膜樣子宮內(nèi)膜癌中，875%的標(biāo)本hMSH2蛋白呈陽性表達(dá)，其中583%的標(biāo)本其惡性細(xì)胞中為強陽性～陽性表達(dá)，在這些標(biāo)本中，hMSH2蛋白表達(dá)的強度明顯強于正常增生期內(nèi)膜腺體細(xì)胞或基質(zhì)細(xì)胞。同時還發(fā)現(xiàn):大部分癌癥標(biāo)本中，hMSH2蛋白有較強表達(dá)的，同樣也存在較高的增殖活性，即PCNA呈強陽性表達(dá)(與正常增生期內(nèi)膜相比)。在hMSH2陽性標(biāo)本中，333%hMSH2蛋白表達(dá)強度與正常增殖的腺體細(xì)胞相一致，同樣hMSH2蛋白的陽性表達(dá)與PCNA的表達(dá)基本相同。這與Leach等人的報道相一致:即50%～90%的大腸腺瘤和散發(fā)的大腸癌中hMSH2蛋白有強陽性免疫活性。此外，JinTx等人曾報道75%的尿道轉(zhuǎn)移癌有hMSH2蛋白的強陽性表達(dá)。而本試驗結(jié)果也表明:與其他散發(fā)癌癥相同，大部分散發(fā)的子宮內(nèi)膜癌也保持較高的hMSH2蛋白的表達(dá)。這可能是為了適應(yīng)隨著細(xì)胞增殖頻率的增加，對DNA錯配修復(fù)的需要也相應(yīng)增加的緣故。

在子宮內(nèi)膜樣內(nèi)膜癌標(biāo)本中，hMSH2蛋白有292%呈現(xiàn)弱表達(dá)。而在一篇有關(guān)轉(zhuǎn)移癌的研究中發(fā)現(xiàn):hMSH2蛋白表達(dá)的減少僅發(fā)生于低分化腫瘤和進(jìn)展期癌癥。這表明:hMSH2蛋白表達(dá)的減少可能參與了癌癥的進(jìn)展。而且，hMSH2蛋白的表達(dá)是預(yù)測疾病復(fù)發(fā)的一個重要的指標(biāo)，我們的研究結(jié)果在某些范圍內(nèi)與之形成對比。即在7例hMSH2蛋白表達(dá)呈弱陽性的子宮內(nèi)膜癌中，4例為G1，1例為G2，2例為G3，5例為ⅠA～ⅠC，2例為Ⅱa～Ⅲa，這些病例PCNA的表達(dá)也相對減弱。這說明，hMSH2蛋白表達(dá)強度較低的腫瘤，亦有較低的細(xì)胞增殖潛能。因此，在子宮內(nèi)膜癌中，很可能hMSH2蛋白僅反映細(xì)胞增殖性，而與腫瘤發(fā)生發(fā)展無關(guān)。在子宮內(nèi)膜和泌尿系統(tǒng)癌癥中，這種癌癥的發(fā)生和進(jìn)展方式的不同可能導(dǎo)致hMSH2蛋白表達(dá)狀態(tài)的不同。

本研究還發(fā)現(xiàn)，有3例癌癥標(biāo)本，hMSH2蛋白表達(dá)完全陰性，而在這些腫瘤組織中基質(zhì)細(xì)胞和正常的內(nèi)膜腺體則以正常強度表達(dá)hMSH2蛋白。我們猜測，這些腫瘤組織可能有hMSH2基因的突變，而且可能缺乏錯配修復(fù)功能。值得注意的是，其中有一例為子宮間質(zhì)肉瘤，而且我們一直認(rèn)為其癌癥發(fā)生的過程與子宮內(nèi)膜樣內(nèi)膜癌的發(fā)生過程不同。在HNPCC家族中，60%的腫瘤在hMSH2基因的每一個等位基因上均存在突變，一種為源系突變，另一種為體細(xì)胞突變，這些突變導(dǎo)致hMSH2蛋白表達(dá)的缺失。相反，僅11%散發(fā)的結(jié)腸癌中有hMSH2基因突變，其中僅有1%表現(xiàn)為外顯突變。這說明，在散發(fā)結(jié)腸癌的發(fā)生機制中，這種突變的發(fā)生率很低。就內(nèi)膜癌來說，這一點可以從Katabuchi等報道的文獻(xiàn)中推斷出來:即僅有很少數(shù)的內(nèi)膜癌，有hMSH2基因的突變，這些作者還發(fā)現(xiàn):這些腫瘤同時缺乏hMSH2蛋白的免疫組化表達(dá)。總的來說:hMSH2基因的突變或hM-SH2蛋白表達(dá)的完全缺失在散發(fā)性子宮內(nèi)膜癌中很少發(fā)生，特別是對于Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌，而且這一基因的突變在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生機制中可能不起很重要的作用(除了一些及少數(shù)的內(nèi)膜癌)。

綜上所述，在正常子宮內(nèi)膜的腺體中，hMSH2蛋白的表達(dá)很可能參與維持其周期性改變。在大部分內(nèi)膜癌標(biāo)本中，hMSH2蛋白的表達(dá)強度和正常子宮內(nèi)膜一致，或有所加強。這可能是為了適應(yīng)隨著細(xì)胞增殖的增加對DNA錯配修復(fù)的需要也相應(yīng)增加的緣故。

參考文獻(xiàn)

1 Koshiyama M，Konishi I，et al.J Clin Endocrionl Metabol，1995，80:1106-12.

2 Leach FS，Polyak K，et al.Cancer Res，1996，56:235-40.

3 Leach FS，Polyak K，et al.Cancer Res，1996，56:235-40.

4 Jin TX，F(xiàn)urihata M，et al.Cancer，1999，85:478-84.

5 Burks RT，Kessis TD，et al.Oncogene，1994，9:1163-6.

6 Bubb VJ，Curtis LJ，et al.Oncogene，1996，12:2641-9.

7 Katabuchi H，van-Rees B，et al.Cancer Res，1995，55:5556-60.