子宮內膜癌中抑癌基因PTEN與雌激素受體表達的關系研究

摘 要 目的:探討抑癌基因PTEN在子宮內膜癌中的表達及與ER表達的關系。方法: 應用免疫組化SP法檢測子宮內膜癌組織中PTEN、ER的表達。結果:PTEN在31例子宮內膜癌組織中的陽性表達率為25.8%， 其陽性表達率與腫瘤的雌激素受體狀態明顯相關，二者差異有統計學意義﹙P<0.01﹚。結論 : PTEN表達缺失在子宮內膜癌的早期發生中起著一定的作用，常見于ER缺失的子宮內膜癌。

關鍵詞 子宮內膜癌 PTEN基因 雌激素受體

資料與方法

對象:選擇臨床及病理資料完善的中國醫科大學附屬第二醫院婦產科2003年7月～2005年11月間手術切除、病理證實為子宮內膜癌的存檔蠟塊31例，術前未行激素治療、化療或放療。腫瘤的病理分類、組織分級、肌層浸潤、淋巴結轉移由病理確定。根據國際婦產科聯盟(FIGO)2000年制定的手術-病理分期標準進行臨床分期，子宮內膜癌Ⅰ～Ⅱ期27例，Ⅲ～Ⅳ期4例。其中子宮肌層浸潤深度<1/2者24例，≥1/2者7例;病理組織分級:高分化14例，中分化11例，低分化6例;無淋巴結轉移29例，有淋巴結轉移2例。另取10例同期門診宮腔鏡檢查后經病理檢查證實為正常增生期的子宮內膜標本作為對照。

方法:標本常規石蠟包埋，5μm連續切片，采用免疫組化SP法染色。PTEN抗體為鼠抗人PTEN單克隆抗體(51182021) 濃縮液，ER抗體為鼠抗人ER單克隆抗體濃縮液，PTEN和ER單抗的工作濃度為1:50。用已知陽性的乳腺癌切片作為陽性對照，PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。嚴格按試劑盒說明書操作。

結果判定:切片在顯微鏡下采用盲法進行觀察，先在100×下觀察整張切片，排除腫瘤壞死出血區及邊緣反應區，于腫瘤內選擇染色相對密集處在400×下任選5個視野，按陽性細胞百分比及染色強度進行評分，以二者乘積≥3分為陽性標準(見表1)。陽性標準為細胞形態完整，結果清晰， PTEN及ER定位于胞漿和胞核。

統計學分析:對所有統計資料采用SPSS13.0軟件包進行統計分析。采用Fisher精確概率法檢驗。

結 果

PTEN在正常增生期子宮內膜及子宮內膜癌組織中的表達:PTEN的陽性表達位于胞漿及胞核，正常增生期子宮內膜、子宮內膜癌組織中的陽性表達率分別為100。0%(10/10)、25.8%(8/31)，有遞減趨勢，二者差異有統計學意義﹙P<0.01)，在正常子宮內膜組織向內膜癌轉化過程中PTEN的陽性表達率在降低。

子宮內膜癌中PTEN的表達與臨床、病理因素的相關性:PTEN在子宮內膜癌中的陽性表達率與腫瘤的雌激素受體狀態明顯相關。ER陰性患者PTEN的陽性表達率明顯低于ER陽性患者，二者差異有統計學意義﹙P<0.01﹚。PTEN的陽性表達率與腫瘤浸潤肌層深度、腫瘤的病理組織分級、淋巴結有無轉移、臨床手術-病理分期無相關性(P>0.05)。

討 論

PTEN基因是1997年美國3個研究小組用不同方法先后克隆出的第1個具有雙特異性磷酸酶活性的抑癌基因，即有脂質磷酸酶活性，又有蛋白磷酸酶活性，定位于染色體10q23.3，全長約200kb，有9個外顯子和8個內含子， PTEN 基因包括氨基端(N端)、C2結構域和羧基端(C端)。PTEN蛋白表達于細胞漿和細胞核內，具有酪氨酸磷酸酶活性，能使蛋白中的酪氨酸去磷酸，酪氨酸磷酸化后是細胞生長刺激途徑的一部分，故PTEN 基因的缺失、突變或表達產物的失活等，影響著腫瘤的發生發展。PTEN基因主要通過突變或等位基因缺失和甲基化方式來促進腫瘤的發生。大量報道顯示，PTEN活性的改變與多種類型腫瘤的發生有密切關系。文獻報道[4~6]，PTEN基因在子宮內膜癌中的突變率為32%~83%，比已知的p53、k-ras和 c-erbB-2等基因在子宮內膜癌的突變率都高，提示PTEN基因突變在子宮內膜癌致癌機制中起著非常重要的作用。PTEN抑癌基因在子宮內膜癌中的表達率與正常子宮內膜相比明顯下降已基本達成一致意見。Mutter[6，7]發現在有雌激素作用的正常子宮內膜中存在一定數量的PTEN表達陰性腺體，當這些腺體持續存在并呈緊密簇狀增生時，則形成分散的癌前病變，這意味著PTEN表達陰性腺體是鑒別子宮內膜腺癌的最早特征，提示PTEN基因突變是子宮內膜腺癌的早期事件。本研究采用免疫組化法對正常增生期子宮內膜、子宮內膜癌組織進行PTEN表達測定，結果發現其陽性表達率分別為100.0%、25.8%，有遞減趨勢，二者差異有統計學意義﹙P<0.01﹚，在子宮內膜組織向內膜癌轉化過程中PTEN的陽性表達率在降低，提示PTEN表達的缺失在子宮內膜癌的早期發生中起著一定的作用。 

雌激素具有多向促增殖作用，與ER結合作用于ERE，激活調節基因，促進子宮內膜細胞增殖。本研究顯示，PTEN在子宮內膜癌中的陽性表達率與腫瘤的雌激素受體狀態明顯相關，ER陰性患者PTEN的陽性表達率明顯低于ER陽性患者，二者差異有統計學意義﹙P<0.01﹚。提示PTEN表達缺失常見于ER缺失的子宮內膜癌;子宮內膜癌中ER可能正向調節PTEN的表達，其具體的作用機制有待于進一步研究。

參考文獻

1 賴東梅，朱關珍，豐有吉et al.子宮內膜癌Bcl-2癌基因的持續性表達及臨床意義. 現代婦產科進展，1998，7(3):210.

2 Weng LP，Smith WM，Dahia PLM et al.PTEN suppresses breast cancer cell growth by phosphatase activity-dependent Gl arrest followed by cell death. J CancerResearch， 1999， 59:5808.

3 Tamuram，Gu J，Matsamoto K et al.Inhition of cell migration，spreading，and focal adhesions by tumor suppressor PTEN. Science，1998，280(5369):1614.

4 Koul A，Willen R，Bendahl PO et al.Distinct sets of gene alterations in endometrial carcinoma implicate alternate modes of tumor:genesis. Cancer，2002，94(9):L2369.

5 Salvesen HB，Stefansson I，Kalvenes MB et al.Loss of PTEN expression is association with metastatic disease in patients with endometrial carcinoma. Cancer，2002，94(8): 2185.

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7 Mutter GL，Lin MC，Fitzgerald JT et al. Altered PTEN expression as a diagnostic maker for the earliest endometrial precancers. Journal of the National Cancer Institute，2000，92(11):924.