肺炎支原體實驗室檢測的方法及臨床意義

肺炎支原體(MP)無細胞壁最外層為細胞膜，主要通過呼吸道傳播，它不僅引起多種呼吸道疾病，還可導致肺外其他系統的多種并發癥。肺炎支原體的致病首先通過其頂端結構粘附在宿主細胞表面，并伸出微管插入胞內吸取營養、損傷細胞膜，繼而釋放出核酸酶、過氧化氫等代謝產生引起細胞的溶解、上皮細胞的腫脹與壞死。誘發機體產生的抗體也可能參與了上述病理損傷。呼吸道分泌的SI-gA對再感染有一定防御作用，但不夠牢固。因MP缺乏細胞壁只對大環內酯類、四環素類等抗生素較為敏感，對常規治療肺炎的抗生素耐受，而MP感染與病毒及細菌感染引起的呼吸道感染表現難以區別，為避免濫用抗生素，實驗室診斷顯得尤為重要。現將常用肺炎支原體實驗室檢測的方法及臨床意義分述如下。

病原體的分離與培養

取疑似病人的咽分泌物、痰或胸水接種于2ml無血清液體培養基。并以培養基10倍連續稀釋二管、三管同時培養，6周后培養液顏色未改變的判為陰性。不能判斷的，取0.1ml接種于牛心浸液的固體平板培養基上，在5％C02環境中，37℃培養1～2周即可長出菌落。選擇疑似菌落做溶血試驗、生長抑制試驗、氯化三苯基四氮唑還原試驗、糖發酵分解試驗、豚鼠紅細胞吸附試驗等進行鑒定。MP的分離培養是尋找病原體最可靠的方法，但耗時長(2～3周)，對標本運送及堵養基的要求高，且敏感性一般，尚不能依靠它解決臨床快速診斷。故不能用于常規檢測，但仍是尋找病原體及流行病學調查的可靠指標。

血清學檢查

MP的抗原成分主要存在于細胞膜上，由菌體的脂肪成分所構成，為糖脂類。已知MP感染后，MP可刺激B細胞產生IgM及16；抗體，在鑒定上具有重要意義。主要檢測方法有對抗體、抗原及核酸的檢測。

補體結合試驗：人感染MP后，MP的抗原糖脂成分刺激機體產生特異性抗體，與肺炎支原體細胞膜成分致敏的綿羊紅細胞結合形成固著補體使之不發生溶血反應，反之則激活補體，與后加入指示系發生溶血反應，一般補體結合抗體在感染后7～8天開始上升，3～4周達高峰，維持4～6個月，血清效價在1:64以上或恢復期比急性期有4倍或4倍以上增高有診斷意義。但補體結合試驗需要一定的儀器和技術，操作較復雜，不適用于臨床常規檢測。

冷凝集試驗：人感染MP后，血清中除出現特異性抗體外，還存在由I抗原刺激機體產生的非特異性IgM冷凝集素。即在4℃條件下可凝集人的O型紅細胞或自身洗滌紅細胞，在37℃溫浴后凝集現象消失。其滴度≥64時肺炎支原體感染有參考意義。龐氏等對臨床上146例疑似支原體肺炎患兒進行MP-IgM和冷凝集素檢測，結果MP－IgM陽性122例，冷凝集試驗陽性92例；36例非支原體肺患兒中，冷凝集試驗陽性12例。肺炎支原體感染的病人僅見有34％～65％呈陽性，冷凝集試驗為非特異性反應，也可見于肝病、溶血性貧血、傳染性單核細胞增多癥等。該試驗操作簡便，但其靈敏度及特異性較低，不是確定診斷的指標。

酶聯免疫吸附法(ELISA)：采用間接ELISA技術檢測被檢者MP－IgM或MP－IgG抗體的方法。IgM抗體出現早，一般在感染后1周出現，3～4周達高峰，以后逐漸降低，12～16周轉陰。因此MP－Igi陽性可作為急性期感染的診斷指標。該方法快速、簡便、不需任何設備、特異性高但靈敏感度不高，價格也較貴，質量還有待提高。尹氏等報告采用ELISA法對疑診MP肺炎患兒進行特異性抗體IgA檢測，并同時采用明膠顆粒凝集法測定特異性MP－IgM進行比較，結果提示MP－IgA抗體出現較MP－IgM稍晚，但持續時間長、特異性強，并與MP－IgM抗體滴度高低以及呼吸道感染的關系密切。因此。MP-IgA的測定對于提高MP感染診斷的敏感性及特異性可以起到不容忽視的互補作用。IgG上升較晚，持續時間較長。因此IgG效價的上升對MP感染的快速診斷意義不大。

凝集試驗：明膠顆粒法是在特異性免疫凝集原理基礎上，應用最新開發的明膠粒子和MP純化抗原。明膠粒子上沒有抗原性決定簇，無生物活性，對于血清成分的物理吸附作用也很小，非特異性反應大大減少。龐氏等用該法對臨床上146例疑似支原體肺炎患兒進行MP－IgM檢測，結果MP－IgM陽性122例陽性率為83.6％。該方法不需任何設備、操作簡便、特異性及靈敏度高，用于早期診斷，適合實驗室常規檢查。

PCR診斷技術

MP含DNA和RNA兩種核酸。其基因組為環狀雙鏈DNA。Jemen是根據16rRNA基因的可變區P1蛋白基因的序列，設計出兩對引物擴增上述兩基因的一部分(583bp和153bp)經實驗證明此法快速、特異、敏感。取患者咽拭子或痰液、肺泡灌洗液等經洗滌、離心等處理將獲得的模板進行變性退火、延伸循環擴增后其產物進行定性測定。可檢出≥10cFu/ml的MP。PCR法具有實驗時間短、特異性和敏感性高、不存在交叉反應和放射性污染等特點，但需昂貴設備，操作復雜，不易普及。

綜上所述，目前臨床診斷MP較普遍應用的還是血清學診斷方法。MP－IgM檢測是目前公認的早期診斷肺炎支原體感染的可靠指標，其特異性強靈敏度高，該方法具有簡便、快速、特異性強、靈敏度高，能進行早期診斷的優點。尤其是ELISA和血清凝集試驗這兩種檢測方法更為突出，適合一般實驗室常規檢測。