IL-8及其受體CXCR1在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及意義

[摘要] 目的 探討白細(xì)胞介素8(IL-8)及其受體CXCR1在子宮內(nèi)膜異位癥(EMT)內(nèi)膜上的表達(dá)水平及其在EMT發(fā)病中的意義。方法 EMT患者38例作為研究組，非內(nèi)膜異位癥(非內(nèi)異癥)患者29例作為對(duì)照組。免疫組化法檢測EMT患者異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜及非內(nèi)異癥的對(duì)照子宮內(nèi)膜之間IL-8與CXCR1的表達(dá)情況。結(jié)果 所有異位內(nèi)膜均可檢測到IL-8與CXCR1蛋白的表達(dá)，且其染色強(qiáng)度高于在位內(nèi)膜及正常生育期子宮內(nèi)膜(P<0.05)，EMT患者的在位內(nèi)膜IL-8 與CXCR1的表達(dá)高于同期正常生育期子宮內(nèi)膜(P<0.05)，對(duì)照組和異位組增生期子宮內(nèi)膜與分泌期子宮內(nèi)膜相比IL-8與CXCR1的表達(dá)無顯著性差異(P>0.05)。結(jié)論 證明IL-8在正常生育期子宮內(nèi)膜、EMT患者在位子宮內(nèi)膜及異位灶組織的表達(dá)差異與CXCR1一致，CXCR1/IL-8蛋白的異常表達(dá)可能在內(nèi)異癥的發(fā)生中發(fā)揮著極為重要的作用。

[關(guān)鍵詞] 子宮內(nèi)膜異位癥;白細(xì)胞介素-8;CXCR1;免疫組織化學(xué)

[中圖分類號(hào)] R711.71 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A[文章編號(hào)] 1673-9701(2010)14-12-03

Expression of Interleukin-8 and CXCR1 in Endometriosis and Its Significance

ZHU Ding LI Jie

Department of Obstetrics and Gynecology，Hunan Provincial People’s Hospital，Changsha 410002，China

[Abstract] ObjectiveTo study the expression of interleukin-8(IL-8) and CXCR1 in endometriosis. MethodsThirty-eight cases of endometriosis were selected as study group，and 29 cases of non- endometriosis served as control group. Immunohistochemistry was used to detect the expression of IL-8 and CXCR1 in the eutopic and ectopic endometrium in endometrium(study group) and in non- endometrium (control group). Results The IL-8 and CXCR1 protein expression was detected in ectopic endometrium. The staining intensity of CXCR1 and IL-8 in endometrium was higher than that in eutopic endometrium and normal endometrium(P<0.05). The expression of CXCR1 and IL-8 had no difference in proliferative phase and secretory phase between the ectopic group and the control group(P>0.05). Conclusion The abnormal expression of IL-8 is in accordance with CXCR1，and the abnormal expression of IL-8/CXCR1 may be play a very important role in pathogenesis of endometriosis.

[Key words] Endometriosis;IL-8;CXCR1;Immunohistochemistry

子宮內(nèi)膜異位癥(簡稱內(nèi)異癥)是一種常見的婦科疾病，雖為良性疾病，但具有組織侵襲和血管形成等惡性生物學(xué)行為。白細(xì)胞介素-8(IL-8)是由單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞及各種腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生[1]的一種小分子量多肽，是一個(gè)典型的CXC類趨化因子，可趨化和激活嗜中性粒細(xì)胞，并參與調(diào)節(jié)白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附過程，同時(shí)還具有促進(jìn)血管形成的作用[2，3]。IL-8通過其兩種不同的受體CXCR1、2發(fā)揮其作用，而CXCR2不是IL-8的特異性受體，能與其他細(xì)胞因子結(jié)合。本研究旨在檢測IL-8 及CXCR1在內(nèi)異癥患者在位及異位子宮內(nèi)膜中的表達(dá)情況及其差異，探討IL-8及CXCR1與EMT之間的關(guān)系。

1資料與方法

1.1臨床資料

收集湖南省人民醫(yī)院2007年1月1日～2009年9月30日因子宮內(nèi)膜異位癥行手術(shù)治療并經(jīng)病理證實(shí)的病例38例，年齡23~43歲，平均(32.63±5.02)歲，分為在位內(nèi)膜組和異位內(nèi)膜組，根據(jù)末次月經(jīng)及子宮內(nèi)膜組織學(xué)檢查結(jié)果確定在位內(nèi)膜組中增生期30例，分泌期8例，取同期因輸卵管吻合，宮頸不典型增生等良性病變行手術(shù)治療的非子宮內(nèi)膜異位患者的正常子宮內(nèi)膜標(biāo)本29例作為對(duì)照組，年齡22~43歲，平均(33.57±5.75)歲，其中增生期20例，分泌期9例。兩組患者均月經(jīng)規(guī)律，術(shù)前3個(gè)月未行激素治療，無急慢性盆腔炎性疾病及惡性腫瘤史，兩組年齡無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集術(shù)中同時(shí)取異位內(nèi)膜及在位內(nèi)膜，異位內(nèi)膜病灶通過活檢取得，同期在位內(nèi)膜通過刮宮取得。標(biāo)本采集后放入10%福爾馬林固定，送病理科做石蠟切片，用于做免疫組化。共105份標(biāo)本。

1.2.2免疫組織化學(xué)法石蠟包埋的標(biāo)本切成3μm厚的切片，脫蠟至水后，3%H2O2室溫孵育10min以滅活內(nèi)源性過氧化物酶，浸入0.01M枸櫞酸鹽緩沖液(pH為6.0)，微波修復(fù)，滴加5%BSA封閉液，室溫20 min，滴加一抗兔IgG(1:50，博士德生物工程有限公司);陰性對(duì)照組以PBS代替一抗;4℃過夜;PBS洗2 min×3次;滴加生物素化山羊抗兔IgG(博士德生物工程有限公司)，37℃濕盒孵育20min;PBS洗2min×3次;滴加試劑SABC，37℃濕盒孵育20min;PBS洗5min×4次;DAB顯色1min，鏡下控制反應(yīng)時(shí)間;蒸餾水洗滌;蘇木素輕度復(fù)染1min;脫水、透明、封片，結(jié)果判定以胞漿陽性為判定標(biāo)準(zhǔn)，胞漿染成棕黃色的為陽性細(xì)胞。觀察不少于5個(gè)高倍視野(400倍)，計(jì)數(shù)至少500個(gè)細(xì)胞。采用統(tǒng)一的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，按染色強(qiáng)度分為4級(jí):0=陰性染色，1=弱陽性染色，2=中度陽性染色，3=強(qiáng)陽性染色;按陽性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞總數(shù)的比例分為5級(jí):0=陰性，1=陽性細(xì)胞占1%～25%，2=陽性細(xì)胞占26%～50%，3=陽性細(xì)胞占51%～75%，4=陽性細(xì)胞占76%～100%。每張切片的染色積分以這兩者乘積表示[4]。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

運(yùn)用SPSS13.0 for windows 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P<0.05被認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1IL-8蛋白的表達(dá)

如圖1所示，在正常子宮內(nèi)膜標(biāo)本中，20例增生期內(nèi)膜中16例、9例分泌期內(nèi)膜中7例可檢測到IL-8表達(dá)。IL-8在正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá)主要彌散性分布于腺體細(xì)胞的胞漿及胞膜上，尤以腺體近基底膜處為甚，而間質(zhì)則很少表達(dá)IL-8。整個(gè)月經(jīng)周期中，分泌期內(nèi)膜與增生期內(nèi)膜的IL-8表達(dá)無明顯差異(P>0.05)。

對(duì)于EMT患者，30例增生期及8例分泌期在位子宮內(nèi)膜組織除各1例外，均可見IL-8表達(dá)。IL-8染色特征與正常子宮內(nèi)膜樣本相似，在位子宮內(nèi)膜增生期及分泌期的IL-8表達(dá)亦無明顯差異(P>0.05)。見表1。與正常生育期子宮內(nèi)膜相比，EMT患者的在位子宮內(nèi)膜IL-8的表達(dá)高于同期正常生育期子宮內(nèi)膜(P<0.05)，尤以腺體表達(dá)差異為甚。38例異位灶組織切片中均可檢測到IL-8陽性染色，且其染色強(qiáng)度高于在位子宮內(nèi)膜及正常生育期子宮內(nèi)膜(P<0.05)。

2.2CXCR1蛋白的表達(dá)

如圖2所示，除了1例正常分泌期子宮內(nèi)膜樣本，所有的子宮內(nèi)膜和異位內(nèi)膜均有CXCR1染色，CXCR1在正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá)主要彌散性分布于腺體細(xì)胞的胞漿及胞膜上，其中尤以腺體近基底膜處為甚，腺體細(xì)胞比間質(zhì)細(xì)胞具有較高的染色強(qiáng)度。整個(gè)月經(jīng)周期中，增生期內(nèi)膜與分泌期內(nèi)膜相比無顯著性差異(P>0.05)。見表1。

EMT患者異位內(nèi)膜CXCR1染色特征與正常子宮內(nèi)膜樣本相似。所有的EMT患者異位內(nèi)膜腺體呈CXCR1彌漫性強(qiáng)陽性表達(dá)。且其染色陽性強(qiáng)度明顯高于在位子宮內(nèi)膜及正常生育期子宮內(nèi)膜(P<0.05)，在正常子宮內(nèi)膜及EMT患者在位子宮內(nèi)膜和異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞觀察CXCR-1染色無顯著性差異。

3討論

目前認(rèn)為，內(nèi)異癥患者的子宮內(nèi)膜可能有不同于正常內(nèi)膜的特性。我們比較了內(nèi)異癥患者及非內(nèi)異癥患者的在位子宮內(nèi)膜中IL-8的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)內(nèi)異癥患者的子宮內(nèi)膜中IL-8的 表達(dá)水平明顯高于非內(nèi)異癥患者。結(jié)果提示，與非內(nèi)異癥者相比較，異位癥患者的子宮內(nèi)膜的血管形成活性增強(qiáng)，這些有較高血管形成活性的內(nèi)膜返流入腹腔后，有可能比一般內(nèi)膜更容易刺激周圍的血管形成，使異位內(nèi)膜種植成功的可能性增加，可能是對(duì)內(nèi)異癥發(fā)病來源的一種解釋。

IL-8是最為重要的粒細(xì)胞趨化因子，有著復(fù)雜的生物學(xué)功能。本研究發(fā)現(xiàn)，在EMT患者異位灶組織中，所有的標(biāo)本均能檢測到CXCR1蛋白表達(dá)，且陽性染色強(qiáng)度明顯高于正常生育期子宮內(nèi)膜及EMT患者在位子宮內(nèi)膜(P<0.05)，而EMT患者在位子宮內(nèi)膜的CXCR1陽性染色強(qiáng)度高于正常生育期子宮內(nèi)膜(P<0.05)，而且其主要配體IL-8蛋白在正常生育期子宮內(nèi)膜、EMT患者在位子宮內(nèi)膜及異位灶組織也能觀察到類似差別，提示CXCR1/IL-8表達(dá)的差異可能通過自分泌/旁分泌作用，在EMT的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。通常情況下，CXCR1能高選擇性地與IL-8結(jié)合，介導(dǎo)IL-8致細(xì)胞內(nèi)Ca2+內(nèi)流，能誘使釋放粒細(xì)胞酶，促進(jìn)其游走，并引起O-2的釋放及活化磷脂酶D的生物學(xué)活性。CXCR1與IL-8的親合力低于CXCR2，使CXCR1降調(diào)節(jié)失活的IL-8所需量為CXCR2的7~13倍。被IL-8降調(diào)節(jié)失活后，CXCR1復(fù)活速度高于CXCR2，CXCR1的快速復(fù)活顯示其在感染區(qū)域介導(dǎo)的IL-8信號(hào)發(fā)揮著更為重要的作用[5]。CXCR1介導(dǎo)的IL-8活性極為廣泛，不僅能趨化、活化粒細(xì)胞，還參與趨化因子受體與整合素之間的細(xì)胞對(duì)話。有研究顯示內(nèi)異癥患者腹腔液中IL-8的濃度明顯高于對(duì)照組，而且IL-8的水平與疾病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，提示IL-8可能在內(nèi)異癥疾病的進(jìn)展和維持中起重要作用[6]。己有研究顯示，IL-8能通過激活特異的白細(xì)胞整合素促使單核細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的緊密結(jié)合，而這一作用通過單核細(xì)胞CXCR1及CXCR2介導(dǎo)，IL-8受體與整合素之間的相互對(duì)話，可能在囊胚黏附、侵入子宮內(nèi)膜這一重要生理過程中發(fā)揮重要功能[7]。一般認(rèn)為，逆流入腹腔的有活力的子宮內(nèi)膜碎屑黏附到腹膜間皮細(xì)胞并穿透，是內(nèi)異癥發(fā)生的始動(dòng)環(huán)節(jié)，整合素的變化介導(dǎo)了這種近距離對(duì)話作用。CXCR-1在異位灶組織及在位子宮內(nèi)膜中如此普遍高表達(dá)，在這始動(dòng)環(huán)節(jié)中所起的作用值得進(jìn)一步研究。此外，CXCR1還介導(dǎo)了IL-8的促進(jìn)血管生成、直接促細(xì)胞增殖的功能[8]。1998年Tomio等發(fā)現(xiàn)內(nèi)異癥者其腹腔液中IL-8水平增高，且與種植灶體積大小直接相關(guān)。活性病灶(主要指紅色病灶、腺樣病灶及火焰樣病灶)的評(píng)分越高，IL-8的水平也越高，其血管生成也越活躍。IL-8與CXCR1結(jié)合后還能改變殺傷性T淋巴細(xì)胞表面Fas/FasL系統(tǒng)的表達(dá)，促進(jìn)CTL細(xì)胞的凋亡，導(dǎo)致腹腔內(nèi)NK細(xì)胞及殺傷性T細(xì)胞活性下降，從而促進(jìn)腹腔對(duì)異位灶的免疫耐受，延長異位灶的生存時(shí)間，有助于種植的異位灶逃避機(jī)體的漿膜免疫監(jiān)視[9]。CXCR1/IL-8蛋白的異常表達(dá)可能在內(nèi)異癥的發(fā)生中發(fā)揮著極為重要的作用。

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(收稿日期:2010-03-20)