標本溶血對臨床檢驗結果的影響

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.23.180

對溶血干擾的機制、溶血原因、溶血對常用臨床指標測定的影響及其預防等問題加以探討，現報告如下。

溶血影響的機制

對臨床檢驗的干擾和影響:①血細胞高濃度組分逸出，使血漿分析物濃度增加;②溶血能引起可見光譜的短波長段(300～500nm)的吸光度明顯增高，不同類型的分析方法受Hb吸光度的影響程度不同，以動力學法受Hb吸光度的影響最小，而經典的終點比色法則最易受Hb影響，導致樣品分析物測定濃度高于實際濃度;③利用偶氮反應的原理測定血清總膽紅素，Hb可競爭性地抑制膽紅素與重氮試劑的偶氮反應，使測定結果低于實際值。

對部分項目的影響

對肝功能分析的影響:⑴血清酶活性的測定:①ALT、AST等由于紅細胞內外的濃度差異顯著，輕微溶血就可以導致結果偏高;②紅細胞膜上有ALP，明顯溶血后會導致測定值升高;③由于紅細胞內GGT含量很低，輕微溶血對其測定結果影響不大，但重度溶血則有影響;④溶血血清脂肪酶活性也輕微下降，但淀粉酶、谷氨酸脫氫酶等酶活性測定不受溶血影響;⑤LDH受溶血的影響最大，因紅細胞和血小板中含有豐富的LDH，紅細胞LDH含量是血漿的180倍;⑥紅細胞中ACP是血漿的66倍，溶血時ACP明顯升高;⑵血清蛋白的測定:總蛋白的測定通常選用雙縮脲法，主波長540nm，而血紅蛋白在555nm有吸收峰，故總蛋白測定結果偏高;⑶血清膽紅素測定:目前以采用改良J-G法多見，而血紅蛋白可破壞其反應產物偶氮膽紅素，從而導致結果偏低。

對腎功能各指標測定的影響:①血、尿肌酐的測定:通常采用苦味酸法，此方法特異性較差，蛋白質、葡萄糖、維生素C等所謂假肌酐物質亦可與苦味酸發生反應，且這些物質大多存在于紅細胞中，故溶血標本若用終點法測定，結果必然偏高;②血清尿素氮測定:無論是二乙酰-圬法還是脲酶法，溶血均可導致光譜藍色部分吸光度值升高，對結果都有干擾，導致結果偏高;③尿酸測定采用磷鎢酸還原法，因谷胱甘肽具有還原性，可與磷鎢酸發生氧化還原反應導致結果偏高;采用尿酸氧化酶-過氧化物酶偶聯法，谷胱甘肽可競爭過氧化氫而導致結果偏低。

對血脂測定的影響:①血清總膽固醇TCH的測定;目前多采用二聯酶法，谷胱甘肽可還原過氧化氫而使結果偏低，但血紅蛋白高于2g/L會使結果升高;②甘油三酯的測定:除去上述如TCH影響因素外，目前所用甘油磷酸氧化酶-過氧化物酶法和乙酰丙醇顯色法都以測量甘油為基礎，而紅細胞膜磷脂可被磷脂酶作用產生游離甘油，所以溶血后測定結果偏高;③載脂蛋白A、B的測定:免疫透射比濁法使用最廣泛，以抗原抗體為基礎，血紅蛋白可使測定結果升高，故標本溶血后測定結果偏高。

對血糖測定的影響:目前血糖測定大多采用葡萄糖氧化酶-過氧化物酶偶聯法，紅細胞內谷胱甘肽可競爭過氧化氫而使測定結果偏低。

對心肌酶譜分析的影響:因LDH、HBDH在紅細胞內的含量皆明顯高于胞外，故溶血后結果都升高，雖然紅細胞中不含CK，但含有大量的腺苷酸激酶(AK)，可干擾測定CK的偶聯法的反應體系，人為地引起CK結果升高。

對ELISA試驗的影響:溶血對HBsAg有影響。當Hb<20g/L時，溶血對HBsAg影響不大，當Hb>20g/L時，可導致假陽性。

對血常規結果的影響:標本溶血使RBC計數降低，溶血越嚴重，RBC計數降低越明顯。標本溶血對WBC分類有影響，使中性粒細胞比例明顯降低，淋巴細胞比例明顯升高，而對WBC計數無影響。標本溶血常常血小板計數升高。實際工作中應避免標本溶血，發現異常分類結果，應通過手工分類法進行復核或重新采取標本。

對凝血像的影響:標本溶血具有與血小板第Ⅲ因子相似的凝血活性，使PT、APTT值縮短。因此PT、APTT的測定一定要標準化，盡量不用溶血標本測定PT、APTT。

對熒光定量PCR檢測的影響:標本溶血對HBV-DNA定量結果的影響與溶血的嚴重程度有關。當Hb在20g/L以下時，定量結果的差別無統計學意義;而當Hb達到40g/L時，HBV-DNA定量結果明顯偏低。

溶血原因及其預防

體外和體內溶血的主要區別是，前者為血漿或血清Hb與LDH、鉀平行增高，而后者通常是血漿或血清Hb與LDH升高，而鉀不升高，二者還可以通過珠蛋白檢測、間接膽紅素測定和網織紅細胞計數進一步加以鑒別。體外溶血可以通過樣品制備技術的標準化加以克服，另一方面從方法學上克服和減少溶血的干擾也是非常重要的，對于Hb對吸光度的干擾，可以通過設置樣品空白，或改用雙波長比色、分光光度法和動力學法等措施加以克服，屬于參與其分析法化學反應的溶血干擾，惟一的解決辦法是改變所用試劑的類型，改進試劑組配。

綜上所述，標本溶血對多數血清酶類活性測定有影響，其余如血糖、膽紅素等也受影響，從方法學上講，動力學方法比傳統的終點法受血紅蛋白吸光度的干擾要小;此外隨著自動化分析儀的廣泛使用和方法特異性的不斷提高，采用雙波長和雙試劑以及設立樣品空白可有效減少溶血對各項測定指標的影響和干擾，從而保證實驗報告的準確性，為臨床醫生對疾病的準確診斷提供依據。

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