中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染病原菌的培養(yǎng)及耐藥性分析

摘 要 目的:了解中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染病原菌的分布及耐藥狀況。方法:采用黑馬DL-96細(xì)菌鑒定儀進(jìn)行鑒定及藥敏試驗(yàn)。結(jié)果:685份腦脊液標(biāo)本，分離出病原菌143株，陽(yáng)性率20.88%，其中革蘭陽(yáng)性菌84株(58.74%)，革蘭陰性菌58株(40.56%)，真菌1株(0.70%);耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌的檢出率分別為72.2%和72.9%，未發(fā)現(xiàn)耐萬(wàn)古霉素的葡萄菌、腸球菌，萬(wàn)古霉素、奎奴普丁/達(dá)福普汀對(duì)革蘭陽(yáng)性球菌均有較高的抗菌活性;革蘭陰性菌對(duì)常用藥物頭孢他啶、頭孢曲松的敏感性較差，亞胺硫霉素對(duì)革蘭陰性菌有較好的抗菌活性。結(jié)論:中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染最常見(jiàn)的病原菌為凝固酶陰性葡萄球菌。

關(guān)鍵詞 腦脊液 病原菌 耐藥性

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.15.165

資料與方法

2007年3月～2009年11月送檢的腦脊液樣本685份，男452例，女233例;年齡2個(gè)月～13歲。

病原菌分離、鑒定:以無(wú)菌技術(shù)采集腦脊液2～3ml立即送檢，腦脊液2000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，取沉淀物涂片，做革蘭染色、墨汁負(fù)染色，鏡檢。根據(jù)染色反應(yīng)及細(xì)菌形態(tài)特征，可初步提示感染細(xì)菌的種類(lèi)，并報(bào)告于臨床。用接種環(huán)挑取經(jīng)離心后的沉淀物，分別接種于血瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板及巧克力瓊脂平板上，置35℃環(huán)境中培養(yǎng)18～24小時(shí)，第2天檢視，若有細(xì)菌生長(zhǎng)，分離培養(yǎng)鑒定，棄去腦心浸液肉湯管;若有1～3個(gè)凝固酶陰性葡萄球菌生長(zhǎng)，腦心浸液肉湯管不混濁，則無(wú)需鑒定、藥敏試驗(yàn)。離心后的沉淀物接種于裝有10ml腦心浸液肉湯管，置35℃環(huán)境中培養(yǎng)72小時(shí)，每天檢視有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。若有菌生長(zhǎng)，分離培養(yǎng)鑒定。

儀器和試劑:采用黑馬DL-96細(xì)菌鑒定儀進(jìn)行鑒定、藥敏試驗(yàn)。

方法:按照《臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第2版的要求分離致病菌^[1]，用黑馬DL-96進(jìn)行鑒定和藥敏。大腸埃希菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC 25923及銅綠假單胞菌ATCC 27853為質(zhì)控菌株。

ESBLs、MRS、D Test的檢測(cè):采用CLSI 2004年推薦的紙片擴(kuò)散法。用頭孢西丁代替笨唑西林。對(duì)紅霉素耐藥而克林霉素敏感的菌株鄰近紅霉素一邊的克林霉素抑菌環(huán)出現(xiàn)截平現(xiàn)象(大寫(xiě)D樣)，為D-試驗(yàn)陽(yáng)性，即體外誘導(dǎo)型克林霉素耐藥。

結(jié) 果

病原菌檢出率，見(jiàn)表1。

分離菌的耐藥分析:①革蘭陽(yáng)性菌對(duì)各種抗生素的耐藥性:分離出葡萄球菌屬72株，其中CNS最多，表皮葡萄球菌47株，其他凝固酶陰性葡萄球菌12株，金黃色葡萄球菌13株，MRSA、MRSCNS的檢出率分別為76.9%(10/13)、72.9%(43/59)。未發(fā)現(xiàn)對(duì)萬(wàn)古霉素耐藥或中介的葡萄球菌，對(duì)奎奴普丁/達(dá)福普汀耐藥率為6.6%。5株紅霉素敏感的葡萄球菌未檢出體外誘導(dǎo)型克林霉素耐藥。腸球菌對(duì)高濃度耐藥率80.0%(1/5)，未發(fā)現(xiàn)對(duì)萬(wàn)古霉素耐藥或中介的腸球菌，對(duì)奎奴普丁/達(dá)福普汀耐藥率為80.0%(1/5)。4株肺炎雙球菌中檢出1株對(duì)青霉素耐藥(PRSP)，未發(fā)現(xiàn)對(duì)頭孢曲松、頭孢吡肟、萬(wàn)古霉素耐藥。②革蘭陰性菌對(duì)各種抗生素的耐藥性:陰溝腸桿菌、鮑氏不動(dòng)桿菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌未檢出對(duì)亞胺硫霉素耐藥，對(duì)頭孢三代、四代、阿米卡星耐藥率均大于70%。其中1株銅綠假單胞菌對(duì)亞胺硫霉素中介耐藥。

討 論

近年來(lái)，院內(nèi)感染受到臨床醫(yī)生普遍的重視。中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染病原菌的構(gòu)成及耐藥率分析對(duì)臨床醫(yī)生的診斷、用藥、療效判定有著重要的作用^[2]。

中樞神經(jīng)系統(tǒng)腦脊液的細(xì)菌學(xué)檢查對(duì)于細(xì)菌性腦膜炎的病原學(xué)診斷很有價(jià)值，同時(shí)有助于漿液性腦膜炎或無(wú)菌性腦膜炎的鑒別診斷。病原菌性腦膜炎對(duì)人類(lèi)危害較大，位居世界感染性疾病死亡率的前10位^[3]。對(duì)此，經(jīng)驗(yàn)性用藥可選擇萬(wàn)古霉素聯(lián)合碳青霉烯類(lèi)(如美羅培南)^[4]中的一種，美羅培南比亞胺硫霉素易穿透血腦屏障。

革蘭陰性菌以陰溝腸桿菌、鮑氏不動(dòng)桿菌為主，對(duì)頭孢吡肟、頭孢他啶、阿米開(kāi)星耐藥率大于65%。特別是鮑氏不動(dòng)桿菌在物表、皮膚易生存，易與手術(shù)操作等引發(fā)的醫(yī)院感染有關(guān)。國(guó)外近年來(lái)關(guān)于多藥耐藥不動(dòng)桿菌屬所致術(shù)后中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染報(bào)道較多^[5]。

本研究未檢出腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌，原因可能與標(biāo)本致病菌含量過(guò)少、采樣前抗生素的使用、感染菌培養(yǎng)條件苛刻、未及時(shí)送檢等有關(guān)。墨汁負(fù)染色是隱球菌性腦膜炎診斷最簡(jiǎn)便而迅速的方法，陽(yáng)性率約70%。雖然培養(yǎng)是確診的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但陽(yáng)性率不高，故培養(yǎng)陰性者也不能除外診斷。

參考文獻(xiàn)

1 張卓然，倪語(yǔ)星.臨床微生物學(xué)和微生物檢驗(yàn).北京:人民衛(wèi)生出版社，2006: 460-464.

2 李光輝，朱德妹，張嬰元，等.1995-2004 年上海地區(qū)部分醫(yī)院腦脊液分離菌的分布及耐藥性.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2007，17(10):1278-1281.

3 周建新，王強(qiáng)，唐明忠，等.神經(jīng)外科患者腦脊液細(xì)菌流行病學(xué)和耐藥性監(jiān)測(cè).中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2006，16(2):1542-1547.

4 賀斌，趙忠新，等.急性細(xì)菌性腦膜炎和病毒性腦膜炎的鑒別診斷.臨床神經(jīng)病學(xué)雜志，2002，15(1):29.

5 劉軍，劉麗丹，劉超.顱腦術(shù)后腦脊液切口漏致顱內(nèi)感染的臨床處理.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2006，16(2):158.