p15和Fas基因在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)

基金項(xiàng)目 黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)11521321)

摘 要 目的:探討p15和Fas在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法:應(yīng)用免疫組織化學(xué)S-P法檢測60例子宮內(nèi)膜癌組織及10例正常子宮內(nèi)膜組織中p15和Fas的表達(dá)，并分析兩基因與子宮內(nèi)膜癌臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果:p15和Fas在子宮內(nèi)膜癌組織和正常子宮內(nèi)膜組織中的陽性表達(dá)率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別P<0.01，P<0.05);p15的陽性表達(dá)率在子宮內(nèi)膜癌不同組織學(xué)分級(jí)中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);Fas的陽性表達(dá)率在子宮內(nèi)膜癌不同組織學(xué)分級(jí)和肌層浸潤程度中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);p15和Fas在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.401，P<0.01)。結(jié)論:p15和Fas的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生和發(fā)展關(guān)系密切，p15和Fas的表達(dá)對(duì)判斷子宮內(nèi)膜癌患者的預(yù)后具有重要意義。

關(guān)鍵詞 子宮內(nèi)膜腫瘤 基因 腫瘤抑制 免疫組織化學(xué) p15 Fas

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.15.163

資料與方法

收治60例子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本取源于齊齊哈爾市三級(jí)甲等醫(yī)院。臨床分型:子宮內(nèi)膜癌采用1988年FIGO分期標(biāo)準(zhǔn):Ⅰ期40例、Ⅱ期10例、Ⅲ期7例、Ⅳ期3例;腫瘤浸潤肌層深度:<1/2者35例，≥1/2者25例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移7例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移53例;病理分級(jí):高分化36例，中分化18例，低分化6例;組織學(xué)類型:腺癌53例，腺鱗癌5例，透明細(xì)胞癌1例，漿液性乳頭狀腺癌1例。

主要試劑:p15鼠抗人單克隆抗體、Fas鼠抗人單克隆抗體和即用型免疫組織化學(xué)超敏S-P試劑盒(廣譜)。

實(shí)驗(yàn)方法:所有標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林溶液固定、石蠟包埋。使用HE染色初步觀察子宮內(nèi)膜癌組織的病變特點(diǎn)，確定組織類型和病理分級(jí)，篩選入組。按試劑公司提供的染色程序進(jìn)行S-P免疫組織化學(xué)染色法檢測子宮內(nèi)膜癌組織中p15、Fas的表達(dá)，免疫組化前切片進(jìn)行微波抗原修復(fù)，免疫組化S-P法參照試劑說明書進(jìn)行。

結(jié)果判定:免疫組化單染判定標(biāo)準(zhǔn):以細(xì)胞膜、細(xì)胞漿或細(xì)胞核出現(xiàn)清晰的黃-棕褐色顆粒判定為陽性。每例先在低倍鏡下選取陽性細(xì)胞多且分布均勻的區(qū)域，然后隨機(jī)計(jì)數(shù)10個(gè)不重復(fù)、不重疊的高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞中的陽性細(xì)胞數(shù)，取平均數(shù)作為結(jié)果。根據(jù)細(xì)胞有無著色分為:①0分:切片中<5%細(xì)胞呈陽性表達(dá);②1分:切片中5%～50%細(xì)胞呈陽性表達(dá);③2分:切片中>50%的細(xì)胞呈陽性表達(dá)。≥1分判斷為陽性。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件分析處理。應(yīng)用X2檢驗(yàn)，Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有顯著性。

結(jié) 果

p15在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá):p15表達(dá)定位于細(xì)胞核和細(xì)胞漿，細(xì)胞核著色深。經(jīng)X2檢驗(yàn)，p15在正常子宮內(nèi)膜組織中的陽性表達(dá)率為100.0%，1分為20.0%(2/10)、2分為80.0%(8/10)，在子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達(dá)率為66.7%，1分為30.0%(18/60)、2分為36.7%(22/60)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=9.618，P<0.01)。在子宮內(nèi)膜癌臨床病理學(xué)參數(shù)中，不同組織學(xué)分級(jí)間p15陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=10.274，P<0.01)，不同臨床分期、不同肌層浸潤深度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及不同組織學(xué)類型p15陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=2.535、0.857、0.991、0.020，P>0.05)，見表1。

Fas在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá):Fas的表達(dá)主要位于細(xì)胞膜及細(xì)胞漿上，細(xì)胞膜著色深。經(jīng)檢驗(yàn)，F(xiàn)as在正常子宮內(nèi)膜組織中的陽性表達(dá)率為80.0%，1分為50.0%(5/10)、2分為30.0%(3/10)，在子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達(dá)率為46.7%，1分為41.7%(25/60)、2分為5.0%(3/60)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=6.852，P<0.05)。在子宮內(nèi)膜癌臨床病理學(xué)參數(shù)中，不同肌層浸潤程度和不同組織學(xué)分級(jí)Fas陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=10.162、8.943，P<0.05)，不同臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及不同組織學(xué)類型中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=2.616、2.297、0.505，P<0.05)，見表1。

p15與Fas在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)的相關(guān)性:p15和Fas在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)的相關(guān)性經(jīng)Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)呈正相關(guān) (r=0.401，P<0.01)，見表2。

討 論

子宮內(nèi)膜癌是婦科常見的三大惡性腫瘤之一，其發(fā)病機(jī)制至今仍不明確。目前認(rèn)為腫瘤可能是染色體的特定區(qū)域缺失、癌基因的激活和抑癌基因的失活，以及細(xì)胞增殖與凋亡之間的平衡失調(diào)所引起的病變。p15基因是已被公認(rèn)的腫瘤抑制基因^[1]，F(xiàn)as是促凋亡基因^[2]，p15和Fas與子宮內(nèi)膜癌的關(guān)系目前研究較少。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法，對(duì)子宮內(nèi)膜癌組織中p15和Fas的表達(dá)進(jìn)行觀察，探討它們?cè)谧訉m內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用及相互關(guān)系。

p15在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)的意義:近年來，許多研究表明細(xì)胞周期的失控是導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的重要原因。p15是迄今發(fā)現(xiàn)的最直接抑制細(xì)胞周期的多腫瘤抑癌基因之一，p15通過作用于細(xì)胞周期蛋白依賴激酶(CDK)與細(xì)胞周期蛋白D(CyclinD)復(fù)合物，特異性抑制CDK4、CDK6激酶活性，阻止Rb蛋白磷酸化，限制細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，從而抑制細(xì)胞增殖^[3]。本研究結(jié)果顯示:p15的低表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，與夏瑾瑜等^[4]研究結(jié)果相似，與張麗志等^[3]研究結(jié)果不一致，可能是實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定方法不同所致，提示隨著腫瘤分化程度的降低，p15抑制細(xì)胞增殖的作用相應(yīng)減弱，因而腫瘤細(xì)胞增殖活躍，利于腫瘤的進(jìn)展。p15基因的檢測對(duì)預(yù)測子宮內(nèi)膜癌的愈后具有重要參考價(jià)值。

Fas在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)的意義:近年來研究顯示，F(xiàn)as系統(tǒng)在腫瘤免疫逃避機(jī)制中起重要作用，腫瘤的發(fā)生還與細(xì)胞增殖與死亡的動(dòng)態(tài)平衡失調(diào)有關(guān)。本研究結(jié)果顯示:Fas基因的低表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，與王紅英等^[5]研究結(jié)果相似，表明子宮內(nèi)膜癌發(fā)展進(jìn)程中可能存在Fas基因突變，并由此