細菌β內酰胺酶表型紙片檢查法的進展

關鍵詞 β內酰胺酶 表型 紙片法

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.15.170

細菌β內酰胺酶，尤其是革蘭陰性菌產生的廣譜酶(ESBLs)AmpC(C類酶)。金屬酶(B類酶)和D類酶(主要有OXA酶)引起的耐藥性，尤其是B和D類酶均可使碳青酶烯類抗生素失效，使細菌耐藥問題更加嚴重。

ESBLs表型紙片檢查的最佳方案

ESBLs篩查試驗:同時用頭孢他啶(抑菌環≤22mm)和頭孢泊肟(抑菌環≤17mm)，或同時用頭孢他啶和頭孢三嗪(抑菌環≤25mm)。

據研究如單用頭孢他啶，會遺漏TEM-20、25，SHV-3、5、7，CTX-M-5、14、15;單用頭孢噻肟會遺漏TEM-7、10、11、12、26，SHV-5、6、7;單用氨曲南(≤27mm)，會遺漏TEM-7、20、25，SHV-3、6;單用頭孢泊肟會遺漏TEM-11、12，SHV-6;單用頭孢三嗪，會遺漏TEM-7、10、11、SHV-6、18;同時用頭孢他啶和頭孢噻肟會遺漏TEM-5、7，同時用頭孢他啶和氨曲南，會遺漏TEM-20、25，SHV-3。

(ESBLs)確證試驗:應用CLSI/NCCLS推薦法，同時用頭孢他啶加棒酸和頭孢噻肟加棒酸。如單用頭孢噻肟加棒酸，會遺漏TEM-5、7、10、11、12、26、61，SHV-5、6;單用氨曲南加棒酸，頭孢三嗪TEM-10、12、25，SHV-6，CTX-M-15;單用頭孢泊肟或頭孢三嗪，會遺漏多種，同時用頭孢他啶和氨曲南，會遺漏CTX-M-15;同時用頭孢他啶和頭孢噻肟無遺漏。

AmpC酶

AmpC酶分為染色體酶和質粒介導酶。檢測AmpC酶現用方法有頭孢西丁篩查法，可同時篩查ESBLs和AmpC酶。國內已有些報道，新的紙片方法有以下幾種。

質粒介導的AmpC酶的簡易檢查法。在M-H平板上均勻涂大腸埃希菌ATCC 25922貼頭孢西丁紙片于涂菌平板上37℃溫育過夜，觀察頭孢西丁的抑菌環有無缺損。

質粒介導的AmpC酶的紙片法。(DDST)特異性抑制物用3-氨基苯硼酸或3-硝基苯硼酸或3-硫苯硼酸。將待測菌株均勻涂于M-H平板，加頭孢他啶和頭孢噻肟各1片，37℃溫育過夜，兩紙片間有抑菌環增大(>5mm)者為陽性。

資料表明，用頭孢噻肟的抑制試驗，ACT-1、MOX-2酶可為陰性。用頭孢西丁的效果最佳。它幾乎不受ESBLs和碳青酶烯酶的干擾，只有ACT-1酶可為陰性，因此酶對頭孢西丁幾乎無活性。

誘導型AmpC酶檢測法:強誘導劑用亞胺培南紙片，將待檢菌涂在M-H平板，將IMP紙片貼在中央，四周貼四個底物紙片，頭孢西丁、頭孢他啶、頭孢噻肟和哌拉西林/他唑巴坦，弱誘導劑用頭孢西丁紙片，底物用哌拉西林紙片溫育18～24小時，觀察，任意臨近誘導物的抑菌環減小2mm及2mm以上者為陽性。經檢測，銅綠假單胞菌、腸桿菌、枸櫞酸桿菌、沙雷菌等總陽性率為85.5%。

碳青酶烯酶的篩查法

可水解碳青酶烯的酶有A.D類的(OXA酶)和B類金屬酶。金屬酶發現有染色體酶多種。分為B1、B2、B3三組。非染色體酶有IMP酶、VIM酶、SPM、GIM酶等，此類酶可水解碳青酶烯類抗生素，故應用金屬離子偶螯合劑祛除鋅離子以滅活酶的活性，即抑制法。

EDTA與亞胺培南和頭孢他啶的雙紙片抑制法，此法的EDTA濃度和藥物底物應優選。巰基丙醇與頭孢他啶和亞胺培南雙紙片抑制法。但此抑制劑有毒性，應用適當的濃度。MBL商品紙片，加有EDTA胺培南紙片，與不加EDTA者對照。

酶類的篩查法

D類酶以OXA酶為主，與一般A類酶最具臨床意義的區別是對碳青酶烯類耐藥。

用表型紙片法提示細菌孔蛋白的缺失(耐藥膜)在紙片法篩查上述酶類時，應認真觀察是否同時存在細菌的孔蛋白缺，此類資料目前只適用于大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌。

參考文獻

1 王金良，沈定霞，羅艷萍，周光，曹敬榮，等.β內酰胺酶和肺炎克雷伯菌的紙片及表型檢測.江蘇臨床檢驗雜志，2007:32-1204.