在直腸癌組織中檢測細胞凋亡及c-erbB-2癌基因表達的意義

摘 要 目的:探討直腸癌細胞凋亡及c-erbB-2癌基因表達與直腸癌預后的關系。方法:應用免疫組化TUNEL及SP法對106例直腸癌進行細胞凋亡及c-erbB-2癌基因表達檢測，并分別以已知陽性對照切片作為陽性對照。結果:不同分化程度直腸癌中，細胞凋亡及c-erbB-2的陽性率不同。分化程度高，則細胞凋亡率高;分化程度低，則c-erbB-2陽性率高。同時有細胞凋亡和c-erbB-2陽性表達的幾率在低分化直腸癌中最高。結論:細胞凋亡及c-erbB-2可作為判定直腸癌預后的可靠指標。

關鍵詞 直腸腫瘤 凋亡 c-erbB-2癌基因

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.15.158

AbstractObjective:To study the relationship between apoptosis and c-erbB-2 in rectal carcinoma.Methods:Using immunohistochemical method，we examined 106 samples of rectal carcinoma.Results:The results show that the positive rates of apoptosis and c-erbB-2 were different in carcinoma tissue with different degree of differentiation，The higher the differentiation，the higher the rate of apoptosis，and the lower the differentiation，the higher the expression rate ofc-erbB-2.Conclusion:The examination of apoptosis and expression of c-erbB-2 in rectal carcinoma may be reliable indicators to judge the prognosis.

Key WordsRectal carcinoma;apoptosis;c-erbB-2

資料與方法

一般資料:收集直腸活檢標本106例，其中高分化腺癌22例;中分化腺癌20例;低分化腺癌64例。所有病例活檢術前均未進行抗腫瘤治療。

方法:將原蠟塊切片，分別作HE及免疫組化染色。檢測細胞凋亡使用TUNEL試劑盒，檢測方法參照試劑盒說明書進行。切片脫蠟無水，以3%過氧化氫、甲醛處理5分鐘，蛋白酶K室溫消化20分鐘，蒸餾水洗滌后加標記緩沖液，1分鐘后甩干;加反應液，TBS洗滌后用DAB顯色，蘇木素復染，分化、脫水、中性樹膠封固。以已知凋亡細胞陽性切片作陽性對照。免疫組化用S-P法，均以已知陽性對照切片作為陽性對照，以PBS取代一抗作陰性對照。染色結果:凋亡細胞核呈棕褐色，非凋亡細胞核呈綠色。c-erbB-2的陽性部位為細胞膜和細胞漿。

統計學處理:采用X2檢驗。

結 果

在直腸癌中凋亡細胞表現為細胞變圓或不規則，與鄰近細胞的連接消失，呈空暈狀，染色質濃縮聚集呈圓形或緊貼核膜邊緣呈新月狀，細胞核碎裂等。檢測發現，22例直腸癌高分化腺癌組織中，細胞凋亡呈陽性者20例，陽性率99.99%;20例中分化腺癌中，細胞凋亡呈陽性者16例，陽性率80.00%;在64例低分化腺癌中，細胞凋亡呈陽性者48例，陽性率75.00%。

免疫組化技術檢測發現，在22例直腸高分化腺癌組織中，4例可見 c-erbB-2陽性細胞，陽性率36.36%;20例中分化腺癌中，有12例c-erbB-2呈陽性細胞，陽性率60.00%;64例低分化腺癌中，有54例c-erbB-2陽性細胞，陽性率84.38%。在20例中分化腺癌和22例高分化腺癌中，同時有細胞凋亡及c-erbB-2癌基因陽性表達者分別為10例(50.00%)和6例(27.27%)。64例低分化腺癌中，同時有細胞凋亡及c-erbB-2癌基因陽性者42例(65.62%)。結果見表1。陽性細胞呈灶狀分布，無明顯規律性。

討 論

直腸癌與細胞凋亡的關系:細胞凋亡是指在活體組織中，單個細胞受其內在基因的編程調控，通過主動的生化過程而“自殺”死亡的現象，是機體的一種生理現象，貫穿于生命過程。細胞凋亡是在某種因素的作用下，由細胞自身設計的死亡程序^[1～3]，經常參與多種疾病的發生與發展。腫瘤的發生，不僅與細胞增殖，而且與細胞凋亡有著密切的關系。細胞凋亡被認為對腫瘤有預后評估的意義^[4]。但細胞凋亡與腫瘤分化程度的關系迄今尚不很清楚。本研究的旨在初步探討細胞凋亡與各分化程度直腸癌的關系，對直腸癌的防治提供參考。

腫瘤不僅是一類增生異常的疾病，也是凋亡異常的疾病，腫瘤中瘤細胞增殖和凋亡關系失調，可表現在3個方面:①瘤細胞增殖力增強，細胞凋亡受抑制;②瘤細胞增殖活性無明顯增強，但瘤細胞凋亡卻明顯受抑制;③瘤細胞增殖和凋亡都增強，但增殖超過凋亡，細胞數不斷增加。本組檢測發現，直腸癌組織凋亡陽性率與分化程度有密切關系。分化程度高，則凋亡陽性率高。這提示細胞凋亡變異對直腸癌的發展影響較大。可以認為，在直腸癌發展過程中，具有異常分化特征的細胞對凋亡調控信號的敏感性增加。通過凋亡機制的啟動，可篩選掉分化異常的細胞，這可能與部分直腸癌能夠在相當長的時間內維持相對穩定的狀態有一定的關系。

癌基因與直腸癌的關系:在已知的癌基因中，c-erbB-2與腫瘤關系密切。國內外學者的研究表明，它們在癌組織中均有高度表達的情況^[5]。本研究表明，與細胞凋亡相反，c-erbB-2表達越多，預后越差。有的組織還可以見到灶性的陽性細胞團，提示該組織增生活躍，預后較差。本研究不僅觀察了細胞凋亡，而且觀察了c-erbB-2在直腸癌中共同表達的情況。檢測發現，有的標本雖然c-erbB-2有相同程度的表達，但細胞凋亡數不同;有的組織凋亡細胞數相近，而表達c-erbB-2的細胞數相差很多。因此，單獨用其中一個指標進行直腸癌的預后評估，并不十分客觀，而應該用綜合指標判斷。本實驗結果表明，細胞凋亡與c-erbB-2的表達與直腸癌有一定關系，兩個指標不同，可能直接影響直腸癌的預后。直腸癌的發生是多種因素共同參與的結果，c-erbB-2的擴增和過表達，均會導致正常細胞的惡化轉化，隨著研究的深入，將為臨床有效治療提供理論依據。