黃河故道地區(qū)葡萄根結(jié)線蟲(chóng)rDNA- ITS-PCR研究

摘 要： 用PCR方法擴(kuò)增來(lái)自黃河故道地區(qū)不同區(qū)域葡萄根結(jié)線蟲(chóng)群體的ITS片段，并進(jìn)行克隆和序列分析。結(jié)果表明，來(lái)自6個(gè)不同采集點(diǎn)的供試線蟲(chóng)屬于同一種群，獲得的ITS序列長(zhǎng)度為766 bp，與已知南方根結(jié)線蟲(chóng)ITS區(qū)編碼序列一致性達(dá)到99.74%；聚類結(jié)果顯示，與南方根結(jié)線蟲(chóng)親緣關(guān)系最近。結(jié)合形態(tài)鑒定結(jié)果，初步確定黃河古道地區(qū)葡萄根結(jié)線蟲(chóng)病病原為南方根結(jié)線蟲(chóng)（Meloidogyne incognita）。

關(guān)鍵詞： 葡萄； 根結(jié)線蟲(chóng)?。?南方根結(jié)線蟲(chóng)； ITS-PCR； 序列分析

中圖分類號(hào)：Ｓ６６1．1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ 文章編號(hào)：１００９－９９８０?穴２０11?雪０6－1104－０3

Study on rDNA -ITS-PCR of root-knot nematode in grape in the Chinese Yellow River east region

LIU San-jun1，2， YU Qiao-li2， LI Hong-lian1*

（1Plant protection College，Henan Agricultural University， 2Zhengzhou Fruit Research Institute， Chinese Academy of Agricultural Sciences， Zhengzhou， Henan 450000 China）

Abstract: The amplification， cloning and sequencing of the rDNA-ITS region of 6 different populations of root-knot nematodes from trail of the Yellow River east region were conducted. The sequence analysis results showed that six populations of root-knot nematodes on grape from Luoyang， Zhengzhou， Kaifeng， Shangqiu in Henan Province and Dangshan， Xiaoxian in Anhui Province belong to Meloidogyne incognita. The length of ITS was 766 bp. The results of the sequence analysis and the form identifications showed that this pathogen was Meloidogyne incognita.

Key words: Grape； Root-knot nematode disease； Meloidogyne incognita； ITS-PCR； Sequence analysis

自1889年Neal首次報(bào)道加州的葡萄發(fā)生根結(jié)線蟲(chóng)病[1]以來(lái)，葡萄根結(jié)線蟲(chóng)病已成為制約葡萄生產(chǎn)的世界性病害，危害日益嚴(yán)重。危害葡萄的根結(jié)線蟲(chóng)在世界的分布主要有4種：南方根結(jié)線蟲(chóng)（Meloidogyne incognita）、花生根結(jié)線蟲(chóng)（M. arenaria）、爪哇根結(jié)線蟲(chóng)（M. javanica）和北方根結(jié)線蟲(chóng)（M. hapla）[2-3]。

葡萄種植在黃河古道地區(qū)有悠久歷史，伴隨而來(lái)的葡萄根結(jié)線蟲(chóng)病普遍發(fā)生，對(duì)葡萄生產(chǎn)和育苗造成很大的危害[4]，但病原線蟲(chóng)種類卻未有明確報(bào)道。近年來(lái)，分子鑒定已應(yīng)用于根結(jié)線蟲(chóng)的分類鑒定中并取得了很大的進(jìn)展[5-7]。ITS是核糖體DNA中介于18S和28S之間的內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)，它們?cè)谏镞M(jìn)化過(guò)程中顯示種的特征，在種內(nèi)具有高度保守性，在不同種間又有不同程度的變異，是最廣泛應(yīng)用于寄生蟲(chóng)種間分類鑒定的理想遺傳標(biāo)記[8-11]。我們對(duì)本地區(qū)的葡萄感病病株進(jìn)行了病原線蟲(chóng)的分離培養(yǎng)，從形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)兩方面對(duì)其進(jìn)行鑒定，以明確黃河故道地區(qū)的葡萄根結(jié)線蟲(chóng)種類，為線蟲(chóng)病害防治、線蟲(chóng)與寄主間的分子互作、抗線蟲(chóng)基因的篩選和利用等提供理論依據(jù)?！?br>