農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葡萄胚性與非胚性愈傷組織遺傳轉(zhuǎn)化過(guò)程中脅迫響應(yīng)基因的表達(dá)

摘 要： 葡萄愈傷組織經(jīng)農(nóng)桿菌侵染后會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞褐化和壞死現(xiàn)象，大大降低了轉(zhuǎn)基因效率，此過(guò)程中脅迫基因發(fā)揮了重要作用。我們通過(guò)sqRT-PCR的方法研究了葡萄胚性（EC）和非胚性（NEC）愈傷組織在農(nóng)桿菌侵染前、侵染30 min以及共培養(yǎng)3 d后PR-10， Mn-SOD， APX， IRL 5， CAT和β-1，3-glucanases基因的表達(dá)情況。EC和NEC中PR-10表達(dá)量均較高，并在侵染過(guò)程中呈上升趨勢(shì)；NEC的Mn-SOD表達(dá)量沒(méi)有明顯變化，EC侵染30 min后Mn-SOD表達(dá)量的相對(duì)灰度值提高為侵染前的1.8倍，共培養(yǎng)3 d后又降低為侵染前的0.9倍；NEC的APX表達(dá)量低且比較穩(wěn)定，EC在侵染前、侵染30 min和共培養(yǎng)3 d后APX表達(dá)量的相對(duì)灰度值分別為NEC的3.2倍、2.1倍和4.1倍；NEC中CAT表達(dá)量較低，且在轉(zhuǎn)基因過(guò)程中呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢(shì)，EC在侵染30 min后CAT表達(dá)量的相對(duì)灰度值提高為侵染前的2.4倍；NEC中IRL 5的表達(dá)量非常低，和CAT一樣在轉(zhuǎn)基因過(guò)程中呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，而EC中該基因的表達(dá)量相對(duì)高一些；NEC的β-1，3-glucanases表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于EC，侵染前、侵染30 min和共培養(yǎng)3 d后其表達(dá)量的相對(duì)灰度值分別為EC的29倍、5.5倍和4.7倍。我們還研究了蛋白酶處理以后，這些基因在EC中的表達(dá)情況。結(jié)果顯示：共培養(yǎng)3 d后進(jìn)行蛋白酶處理的EC中Mn-SOD，APX，IRL 5這3個(gè)基因表達(dá)量相對(duì)灰度值降低為未處理EC的0.21、0.74和0.10，CAT和β-1，3-glucanases的表達(dá)量分別提高為未處理EC的3.7倍和8.7倍。這些結(jié)果在一定程度上說(shuō)明了葡萄胚性和非胚性愈傷對(duì)于農(nóng)桿菌侵染呈現(xiàn)不同褐化反應(yīng)的潛在原因，對(duì)于我們?cè)诨蛩缴涎芯窟@2種愈傷組織經(jīng)過(guò)農(nóng)桿菌侵染后的細(xì)胞可塑性提供了新的視角，有利于將來(lái)進(jìn)一步降低愈傷褐化和細(xì)胞死亡的研究，從而提高轉(zhuǎn)基因效率。……