針刺聯合川芎嗪處理對大鼠腦缺血再灌注損傷的影響

摘要：目的觀察針刺聯合川芎嗪處理對大鼠腦缺血再灌注損傷的影響。方法取健康SD大鼠18只，以線栓法制備大鼠腦缺血再灌注模型。隨機分為假手術即正常對照組（A組，n=6）、缺血再灌注損傷對照組（B組，n=6）和針刺聯合川芎嗪干預組（C組，n=6）。再灌注24 h后取腦，固定切片，染色。用大鼠行為學改變、病理形態學變化、凋亡細胞數三個指標對干預效果作出評價。結果成功復制大鼠鼠腦缺血再灌注損傷模型；針刺聯合川芎嗪干預組效果顯著，可明顯改善缺血再灌注所致的神經元損傷。結論針刺聯合川芎嗪處理能夠有效抑制大鼠腦缺血再灌注損傷中神經細胞的凋亡，對大鼠有較好的腦保護作用。

關鍵詞：針刺 川芎嗪 腦缺血再灌注 大鼠

中圖分類號：R743R285.5文獻標識碼：A文章編號：1672-1349(2011)05-0571-01

本研究在中醫藥理論的指導下，利用大鼠腦缺血再灌注損傷模型，觀察了針刺聯合川芎嗪處理對大鼠腦缺血再灌注損傷的影響，從而為中醫藥在腦血管病的應用提供理論依據。

1材料與方法

1.1實驗動物健康SD大鼠，體重280 g±20 g，由山西醫科大學動物中心提供。本實驗過程嚴格遵循有關動物實驗保護規定。

1.2方法取健康小鼠18只按隨機數字表法進行隨機分組，將其分為3組，每組6只，分別為假手術組（A組）、對照組即缺血再灌注損傷組（B組）和針刺聯合川芎嗪干預組（C組）。

1.2.1腦缺血模型的制備參考Longa^［1］ 報道的大鼠大腦中動脈阻塞再灌注模型，并加以改進。選用3.0 的單股尼龍手術縫線，將阻塞端灼燒成梭型。按手術步驟暴露右側頸總動脈、頸外動脈和頸內動脈，從頸外動脈插線，栓塞右側大腦中動脈。線栓深度距頸總動脈分叉17 mm±1.5 mm，假手術組除不插線外其他步驟相同。線栓保留2 h 后，小心拔除到頸總動脈分叉處恢復血流，縫合切口，分籠飼養觀察。

1.2.2實驗方法A組只分離血管，不給插線，也不干預。 B組分離血管，線栓2 h后拔除從而恢復灌注，但不干預。 C組在術后2 h，針刺百匯和足三里，同時川芎嗪腹腔給藥（40 mg/kg)。各組1 d后斷頭取腦組織，放入10％的多聚甲醛中保存，以備染色。

1.2.3檢查指標和方法術后通過水迷宮實驗觀察各組小鼠行為學表現。水迷宮按照AAA制作^［2］。分三階段進行訓練，記錄大鼠游完全程到達終點所需時間與進入盲端次數(錯誤次數)；標本固定后，包埋，冠切片，做蘇木精-伊紅染色（HE染色），光鏡下觀察腦組織細胞形態變化；凋亡細胞原位末端標記法(TUNEL)染色，光鏡下計數凋亡細胞數，計算各組凋亡細胞率。

1.2.4統計學處理計量資料以均數±標準差（x±s）表示，采用單因素方差分析，組間進行多重比較。應用SPSS17分析。

2結果

2.1各組行為學改變缺血組較正常對照組游泳時間延長，錯誤次數增多（P＜0.05）；干預組較缺血組錯誤次數減少，游泳時間縮短（P＜0.05）；干預組和假手術組比較無統計學意義（P>0.05）。詳見表1。

2.2各組病理形態學變化假手術組神經元細胞規整，染色均勻。細胞核完整，核仁明顯；缺血組正常神經元細胞數明顯減少，可見散在的凋亡細胞，細胞核固縮，深染成藍紫色，細胞水腫受壓，排列凌亂；干預組絕大多數神經元細胞保持正常形態。

2.3凋亡細胞數C組凋亡細胞率較B組缺血組明顯減少（P＜0.05）；與A組假手術組無統計學意義（P>0.05）。詳見表2。

3討論

針刺具有疏通經絡、調暢氣血、調和臟腑陰陽的功效，并且對血脂、血液流變學、血生化指標、腦電圖等具有一定影響^［3］。川芎嗪是中藥川芎的有效成分之一，川芎具有活血化瘀的作用^［4］。針刺與中藥兩種方法均應用于臨床腦缺血再灌注損傷的治療中，但是目前尚無關于二者聯合應用效果的報道。

本課題選取大鼠對缺血最敏感的腦組織海馬CA1區為觀察對象，采用針刺聯合川芎嗪處理對大鼠腦缺血再灌注損傷進行醫學干預。觀察結果表明，針刺聯合川芎嗪干預可使小鼠行為學表現，海馬CA1區細胞形態，組織結構接近正常。干預組凋亡細胞數較缺血損傷組顯著減少。針刺聯合川芎嗪干預對大鼠腦缺血再灌注損傷有較好的保護作用。

參考文獻:

［1］Longa EZ，Weinstein PR，Calson S，et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats［J］.Stroke，1989，20（1):84-90.

［2］徐淑云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學［Ｍ］.北京：人民衛生出版社，1991:662.

［3］劉會安，侯冬芬，刁增躍，等.化濁益智針法治療血管性癡呆的臨床療效觀察及機理研究［Ｊ］.中國針灸，1997，17(9)：521.

［4］王曉楊.川芎嗪與心、腦缺血再灌注研究進展［Ｊ］.河北中醫，2005，27（6）：478-479.

作者簡介：成建華（1967—），女，畢業于山西中醫學院，主治醫師，現工作于山西醫科大學第一醫院（郵編：030001）；焦志強，工作于山西省祁縣昭馀衛生院。

（收稿日期：2011-01-13）

（本文編輯王雅潔）