燒傷創面內表皮生長因子與表皮生長因子受體蛋白變化的臨床研究

[摘要]目的：觀察燒傷創面內表皮生長因子（EGF）與表皮生長因子受體(EGFr)的變化，探討表皮生長因子在創面愈合中的作用，為臨床治療提供依據。方法：應用免疫組織化學方法對35例燒傷病人創面不同部位內的EGF蛋白和 EGFr蛋白的表達強度和分布情況進行了觀察。結果：EGF蛋白和 EGFr蛋白在燒傷創面內有明顯的一致表達，在創面上皮愈合邊緣部位EGF蛋白和 EGFr蛋白表達最強；在創面中心肉芽部位EGF蛋白和 EGFr蛋白表達次之；在創面已經愈合部位EGF蛋白和 EGFr蛋白表達相對減弱；正常皮膚對照部位EGF蛋白和EGFr蛋白無明顯的表達。結論：燒傷創面內不同部位EGF、EGFr蛋白的表達強度和分布情況不同，其變化與創面愈合密切相關，提示創面內源性的EGF、EGFr蛋白表達變化在促進創面愈合方面有很重要的作用。

[關鍵詞]燒傷創面；表皮生長因子；表皮生長因子受體；免疫組織化學

[中圖分類號]R644 [文獻標識碼]A [文章編號]1008-6455（2011）03-0414-03

Clinic study on the endogenous changes of EGF and EGFr in the burn wound

GU Ting-min，SUI Zhi-fu，CHANG Dong-qing，SHI Cheng-fang，ZHAO Zhi-li

(The Center of Laser and Plastic Surgery，General Hospital of Beijing Military Command，Beijing 100125，China)

Abstract:ObjectiveTo observate the change and the distribution of endogenous epidermal growth factor(EGF) and epidermal growth factor recepter(EGFr) in the burn wound and their effects on the wound healing.MethodsThe immunohistochemistry stainning method is used to detect the expression of EGF and EGFr in the different parts of burn wound in 35 patients.ResultsThere are more remarkably expression of EGF and EGFr in the margin part between the granulation part and the healed part of the burn wound and with obviously expression of EGF and EGFr in the center granulation part and with slightly expression of EGF and EGFr in the healed reepithelization part of the wound.ConclusionThe changes of endogenous EGF and EGFrin theburn wound are closely related to the wound healing and which may have an important role effects onwound healing.

Key words:burn wound;epidermal growth factor receptor(EGFr);epidermal growth factor（EGFr）; immunohistochemistry

創面愈合過程涉及了機體全身和局部的許多病理變化。我們曾報道過人和大鼠供皮區創面愈合過程中內源性表皮生長因子、表皮生長因子受體有明顯的表達，并表明其與組織修復有明顯的關系[1-3]。為探討其變化的普遍意義，我們對臨床燒傷創面內的EGF、EGFr變化進行了觀察，報道如下。

1資料和方法

1.1一般資料：本組病人35例，男25例，女10例。平均年齡35.4歲。平均創面面積（21.3±4.5）%體表面積。

1.2標本留取和實驗方法：征求病人同意后，創面植皮手術時分別切取燒傷創面不同部位標本包括：創面肉芽中心部（簡稱中心部）、肉芽與愈合皮膚的交界部（簡稱交界部）、愈合皮膚部位（簡稱愈合部）和離開創面的自身正常皮膚作為對照部位；標本切取是用眼科角膜環鉆切取包括創面、創基及少量皮下脂肪在內的組織標本塊，大小1cm3左右， 置于4%的多聚甲醛液固定待用。用Sigma公司鼠抗人EGF、EGFr抗體，北京中山試劑公司兔抗鼠生物素化抗體，行ABC免疫復合物法免疫組織化學染色，觀察判斷組織中EGF、EGFr蛋白的含量和分布。陽性細胞為棕黃色、細胞漿著色為主。判斷標準為光鏡下放大400倍，以所見視野內無陽性細胞為陰性； 10個以下陽性細胞時表達為弱陽性（+），視野內陽性細胞在11～30個時表達為中等陽性（++），視野內陽性細胞多于30個表達為強陽性（+++）。

1.3統計學處理：對燒傷創面不同部位的陽性細胞數量進行統計計算均數，以分級創面內蛋白表達的差異變化。應用SPSS11.0統計軟件，以單因素方差分析比較均數間差別，P<0.05，表示差異有統計學意義。

2結果

2.1 一般組織學變化：從創面中心部、交界部和愈合部可以看到創面愈合的一個動態過程。創面中心部位為增厚的肉芽組織，內有豐富的毛細血管和成纖維細胞，毛細血管擴張充血，組織間隙滲出水腫，炎性細胞浸潤，無表皮細胞覆蓋。創面交界部位可見裸露的肉芽部位和有表皮覆蓋的創緣部位；肉芽部位形態學變化相同于同上述創面中心部位變化；創緣部位表皮細胞明顯增生，表皮細胞向創面中心部位遷移、擴展，可見個別的表皮細胞向中心部位移動而離開了創緣表皮群體。創面愈合部位可見創面表面已經完全上皮化，成纖維細胞和毛細血管較創面中心部和交界部位減少，真皮內可見新生的膠原排列密集，平行于表皮，真皮層增厚。

2.2 應用免疫組織化學方法觀察燒傷創面內EGF、EGFr有明顯的較為一致的表達變化。在正常皮膚內兩者無明顯的陽性表達，EGFr僅在正常皮膚基底細胞內有很弱的陽性著色信號。在燒傷創面交界部位EGF和 EGFr表達最強，強度在++～+++之間，每視野內陽性細胞數量EGF達到36.1±5.6、EGFr達到34.3±6.5。陽性細胞呈現聚集成團現象，主要表達在新生表皮內基底細胞和真皮淺層內的成纖維細胞，血管內皮細胞以及皮膚附屬器細胞內也有表達；在燒傷創面中心肉芽部位EGF和 EGFr表達強度次之，表達強度在++之間，每視野內陽性細胞數量EGF達到22.1±5.2、EGFr達到24.3±4.5，表達部位主要在肉芽創面的淺層和中層，主要在炎性細胞，如巨噬細胞，部分為成纖維細胞、血管內皮，陽性細胞成團現象少；在燒傷創面愈合部位EGF和 EGFr表達相對減弱，表達強度為+，每視野陽性細胞數量分別在12.1±3.8和10.3±4.5，表達部位主要在愈合表皮下的真皮淺層，主要在少量的成纖維細胞和炎性細胞內，陽性細胞多為單個散在分布。從創面表達強度看：交界部位EGF和 EGFr表達最強，中心部位EGF和 EGFr表達強度次之，愈合部位EGF和EGFr表達最弱，以上部位間EGF和 EGFr表達均數間差別P值均<0.05，表明差別均有顯著性意義。

3討論

3.1 創面愈合過程是一個復雜的生物學過程，表現為機體受到外傷刺激后反應出來的一系列生物化學的變化，包括血腫形成，炎性細胞的滲出、組織增殖、肉芽形成、細胞外基質沉積和創面的再上皮化等[4]。在整個創傷愈合的過程中，它是機體與創面內部增殖與抑制增殖相互協調的結果。在促進增殖方面許多細胞因子通過促進細胞的分裂、遷移等變化有明顯的促進愈合作用；在抑制增殖方面一些細胞因子通過促進細胞的凋亡等變化抑制了組織修復。EGF是機體內一個具有促進增殖變化作用的較強的細胞因子，是細胞有絲分裂的刺激原，可以加快細胞分裂、促進增殖、改變細胞的趨化性、增加細胞的遷移，應用EGF可以明顯增加創面內膠原和細胞DNA含量，加速創面愈合[5]。已經報道：臨床上應用表皮生長因子在促進外傷、手術、燒燙傷及各種激光損傷等引起的皮膚創傷愈合中有明顯的效果[6]；在對羊膜促進創面愈合的原因分析時發現：羊膜成分中含有多種生長因子：如EGF，KGF，HGF，和bFGF等，這些成分促進了細胞黏連、遷移、增殖和分化等重要功能，阻止了上皮細胞的凋亡，正相的調節了創傷愈合過程中增殖與抑制增殖的變化[7]。EGF在其中也發揮了很大的作用，目前的研究已經證實了EGF促進創傷愈合的作用，但臨床燒傷創面愈合中EGF和EGFr的變化報道較少。

3.2 本文擬以Ⅲ度燒傷創面中心部、肉芽與愈合皮膚的交界部位以及愈合皮膚部位為標本，以遠離創面的正常皮膚為對照動態觀察創面修復過程中的EGF、EGFr變化，探討創面愈合機理，為臨床治療提供依據。

3.3 本研究的組織學觀察證實：Ⅲ度創面修復過程是由創面邊緣上皮細胞增殖、遷移，逐漸向創面中心部位爬行最后覆蓋創面肉芽、形成上皮化完成修復過程的，修復完成前創面以肉芽組織形式存在?？梢钥闯觯簞撁嫒庋拷M織邊緣是新生上皮遷移、增殖的前沿，是創面修復最重要的部位。

3.4 創面修復過程中EGF、EGFr的動態變化表明：創面肉芽組織邊緣部位EGF和 EGFr表達最強，創面中心肉芽部位EGF和 EGFr表達次之，創面已經愈合部位的EGF和 EGFr表達減弱；明顯表達位于創面的淺層和中層；陽性細胞主要來源于新生表皮內基底細胞和真皮淺層內的成纖維細胞，血管內皮細胞以及皮膚附屬器細胞內。這些結果表明：燒傷創面內EGF、EGFr的表達變化與創面愈合密切相關，促進了創面愈合的過程。創面愈合的結果表現為創面肉芽的再上皮化，創面肉芽組織邊緣EGF、EGFr的高強度表達有助于創緣上皮細胞向創面遷移，覆蓋創面，創緣和創面淺層和中層EGF、EGFr的高強度表達更有助于生長因子發揮作用，該部位EGF、EGFr的高強度表達與組織學上可見的表皮細胞明顯增殖和向創面中心部位的遷移相一致。創面中心肉芽部位EGF和 EGFr表達相對減弱的意義可以理解為創面內自分泌或旁分泌的EGF、 EGFr通過移動聚集在創緣部位，加強再上皮化作用；創面愈合后上皮細胞分裂增殖減緩，出現機體的生理性“接觸性抑制”規律。這些結果與我們既往的實驗中的有關結果相一致，表明了創面內源性的EGF、EGFr的表達對促進創面愈合作用有廣泛的普遍意義。

3.5 我們知道：EGF發揮生物學效應首先需結合細胞膜上特異的EGFr，這樣就可使刺激增殖的信號傳入細胞內，引起細胞的一系列信號傳遞，出現細胞代謝增殖的效應[5，8]。本研究結果表現的EGF、EGFr同期高表達，有利于EGF作用的發揮，反映了機體調控創面愈合作為一種生理反應，宜于機體的修復。在創面肉芽部位EGF、EGFr蛋白含量亦少，上皮增殖不明顯；創面邊緣EGF、EGFr蛋白表達增強，細胞增殖再上皮化明顯；創面愈合上皮化完成，內在的抑制機制產生作用，EGF、EGFr蛋白表達減弱，引起細胞增殖減慢。EGF在組織修復中的作用更側重為促進創面的上皮化，而非側重促進肉芽組織的形成[9]。本研究表明EGF、EGFr的這種內在變化作用可能既有利于組織修復，也可避免過度增殖形成疤痕。如果EGF調控出現失?？赡芫蜁е聞撁嫘迯偷恼系K：調控過弱則形成創傷愈合過慢長期潰瘍；調控過強導致創傷愈合后明顯的疤痕增生。所以合理的應用EGF、促進創傷愈合是一個深入研究的課題，為了提高自體組織內EGF的分泌，已經證明：應用轉染EGF基因的方法對促進創面的愈合有明顯的效果，這對許多難愈合創面的修復提供了一個新的具有廣泛前景治療方法[10]。創面愈合過程中有許多種生長因子在進行調控，本研究僅僅觀察了燒傷創面內EGF、EGFr的變化，深入研究創面內多種細胞因子的變化，更加理解創傷愈合的機理，臨床治療保持與內源性的生長因子表達的平衡可能對促進創面修復有很大的作用。

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[收稿日期]2010-09-16[修回日期]2011-02-10

編輯/張惠娟