薄荷飲片揮發油氣相色譜指紋圖譜研究＊

劉東輝，黃月純，張子龍，魏 剛

(1.廣州中醫藥大學，廣東 廣州 510405; 2.廣州中醫藥大學第一附屬醫院，廣東 廣州 510405)

薄荷是我國傳統中藥，廣泛分布于北半球的溫帶地區，在我國廣布于南北各省。我國栽培的薄荷品種多屬東亞及熱帶亞洲的薄荷種 Metha haplocalyx Briq.[1]。薄荷藥材為唇形科植物薄荷Metha haplocalyx Briq.的地上干燥部分，味辛、性涼，口服用于風熱感冒、風溫初起、頭痛、目赤、喉痹、目瘡、風疹、麻疹、胸脅脹悶[1]。2010年版《中國藥典(一部)》規定薄荷藥材揮發油含量不得少于0.80%(mL/g)，葉不得少于30%。薄荷飲片是薄荷藥材切段、低溫干燥所得，藥典規定揮發油含量不得少于0.40%(mL/g)。薄荷素油是薄荷新鮮莖和葉經水蒸氣蒸餾、冷凍、部分脫腦加工提取的揮發油[2]，可直接使用，標準規定薄荷腦含量應為28.0% ～40.0%，氣相色譜指紋圖譜規定檢出桉油精、(—)－薄荷酮、薄荷腦。目前，薄荷在醫藥、食品和化妝品等方面都有著廣泛的應用。目前，由于氣相色譜(GC)－質譜聯用儀未能普及，氣相色譜儀已廣泛應用于揮發油的分析中。因此，筆者通過對多批次的市售薄荷飲片揮發油進行GC指紋圖譜研究，以探討目前中藥市場薄荷飲片的質量情況，為薄荷飲片質量控制提供了一定的參考。

1 儀器與試藥

Agilent 6890型氣相色譜儀;FID檢測器。10批次薄荷飲片購于多家藥材公司(見表1)，經廣州中醫藥大學第一附屬醫院黃月純主任中藥師鑒定，均為唇形科薄荷 Mentha hapLocaLyx Briq.的干燥地上部分;薄荷腦對照品(批號為110728－200005，供含量測定用)購自中國藥品生物制品檢定所;乙醚為分析純。

2 方法與結果

2.1 供試品溶液配制

取薄荷飲片適量，加8倍量水，按2005年版《中國藥典(一部)》附錄揮發油測定甲法收集揮發油，取薄荷揮發油1 mL，加入乙醚5 mL使溶解。

表1 薄荷飲片來源

2.2 氣相色譜條件

色譜柱:HP－INNOWax毛細管色譜柱(30 m×0.32 mm，0.25 μm);進樣口溫度:250 ℃;檢測器溫度:280 ℃;載氣:氮氣;流速:1.3 mL/min;升溫程序:柱始溫100℃，保持15 min，以8℃ /min的速率升到140℃，保持10 min，再以5℃ /min的速率升到200℃;進樣量:1.0 μL;分流比:2 ∶1。

2.3 方法學考察

精密度試驗:取薄荷揮發油進樣分析，連續進樣5次。結果主要特征峰的相對保留時間和相對峰面積基本一致，RSD均在3%以內，表明精密度良好。

穩定性試驗:取薄荷揮發油進樣分析，分別在 0，2，4，6，8，10 h時進樣6次。結果主要特征峰的相對保留時間和相對峰面積基本一致，RSD均在3%以內，表明10 h內供試品溶液穩定性較好。

重復性試驗:取同一批次薄荷飲片5份，分別提取揮發油后進樣分析。結果主要特征峰的相對保留時間和相對峰面積基本一致，RSD均在3%以內，表明方法重復性良好。

2.4 指紋圖譜建立與分析

共有峰確定:根據10批樣品(編號S11樣品差異大，未作統計)分析結果，薄荷標示出16個共有峰，計算各共有峰的保留時間與峰面積百分含量，結果見表2。經對照品對照，鑒別5號峰為薄荷腦。

相似度分析:采用國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統軟件(2004A版)計算相似度。以10批樣品指紋圖譜生成的共有模式為對照，計算各批樣品相似度，結果見表3。10批樣品GC指紋圖譜重疊圖及共有模式見圖1及圖2，樣品S11的指紋圖譜見圖3。

表2 10批樣品薄荷揮發油GC指紋圖譜分析結果

表3 10批樣品薄荷揮發油GC指紋圖譜相似度結果

圖1 10批樣品薄荷揮發油GC指紋圖譜重疊圖

圖2 10批樣品薄荷揮發油GC指紋圖譜共有模式

圖3 薄荷(S11)揮發油GC指紋圖譜

3 討論

國內對薄荷揮發油化學成分已有較多的研究報道，其主要成分為薄荷腦(mentho1)，相對含量達62% ～87%，還含(—)－薄荷酮(menthone)、異薄荷酮(isomenthone)、胡薄荷酮(pulegone)、胡椒酮(piperitone)、胡椒烯酮(piperitenone)，此外還含多種揮發油成分[3]。薄荷揮發油的鑒別主要采用氣相色譜－質譜聯用技術(GC－MS)[4－6]，薄荷腦、薄荷酮含量主要采用氣相色譜法(GC)測定[7－8]。薄荷揮發油所鑒別的成分及相對含量差異相當大，特別是薄荷腦的相對含量差異極大[4－6]。有研究認為，是野生薄荷種群的差異所致[4];分析的薄荷樣品有鮮品[6－7]與干品[4]的不同;揮發油提取方法也有不同，研究的樣品批次一般較少[5－6]，代表性略顯不足。作為傳統用藥方式，復方煎劑采用薄荷飲片后下的方法，薄荷煎劑中薄荷腦含量最高，其次是(—)－薄荷酮[8]。含薄荷制劑一般采用水蒸氣蒸餾提取薄荷飲片揮發油后加入。因此，研究水蒸氣蒸餾提取的薄荷飲片揮發油指紋圖譜，對于薄荷飲片的質量控制、臨床應用均較大的指導意義。

測定結果表明，10批樣品薄荷揮發油的GC色譜主要特征峰有13個，其峰面積百分含量為(92.20±7.38)%。經與薄荷腦對照品對照，5號峰為薄荷腦峰。標出的13個特征峰可分為4區，Ⅰ區為1～3號峰，不同批次樣品峰面積百分含量相對較穩定;Ⅱ區為4～5號峰，5號峰(薄荷腦)為第一大峰，峰面積百分含量為(65.78±13.90)%;Ⅲ區為6～10號峰，不同批次樣品的峰面積百分含量差異較大;Ⅳ為11～13號峰，不同批次樣品的峰面積百分含量差異也較大。相似度分析表明，不同批次樣品的相似度較高，大于0.96，其中樣品6的相似度相對較低，主要原因是5號峰(薄荷腦)的峰面積百分含量較低。經飲片性狀分析，該樣品的葉所占比例較低，揮發油含量也較低。

本研究分析了11批薄荷飲片，發現有1批樣品(S11)的特征圖譜差異相對較大，在保留時間20 min及21 min附近出現2個大的特征峰，1～5號峰的相對百分含量比其他樣品明顯較小。此樣品是否與桂新等[4]報道的種群不同所造成有關，還有待于進一步研究。目前我國栽培的薄荷藥材飲片揮發油指紋圖譜的穩定性究竟如何，其特征指紋峰的相對含量能否維持在一定范圍內，還有待于收集更多的樣品進行分析，方能得出較客觀的結論。

[1]李錫文.我國一些唇形科植物學名的更動[J].植物分類學報，1974，12(2):213－234.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫藥科技出版社，2010:354，395.

[3]楚遵雷.薄荷的化學成分和臨床藥理作用[J].齊魯藥事，2009，28(9):545－546.

[5]楊 莉，于 生，丁安偉，等.GC－MS聯用技術分析鑒定薄荷中揮發性成分[J].現代中藥研究與實踐，2009，23(2):22－24.

[6]蘇 越，王呈仲，郭寅龍.基于準確質量測定和保留指數的GC－MS分析薄荷揮發性成分[J].化學學報，2009，67(6):546－554.

[7]林 彤，段金廒，錢大瑋，等.蘇薄荷揮發性成分分析及其動態變化研究[J].現代中藥研究與實踐，2006，20(4):28－31.

[8]葛爾寧.毛細管氣相色譜法測定薄荷煎劑中薄荷腦和(—)－薄荷酮的含量及變化[J].中國實驗方劑學雜志，2007，13(5):7－9.